La investigación realizada fue de tipo experimental por medio de la cual se buscó una

alternativa para la remoción de cobre usando biomasa inerte, proceso desarrollado en el

laboratorio de microbiología de la Facultad de Medio Ambiente y Recursos Naturales de la
Universidad Distrital Francisco José de Caldas. Los ensayos de espectrofotometría de
absorción atómica, para analizar las concentraciones de cobre con las cuales se determinó
la eficiencia de la bioadsorción, se realizaron en el laboratorio de la empresa Asa Franco y
Cia Ltda. Esta investigación consistió en elaborar ensayos usando como biomasa muerta
de Saccharomyces cerevisiae mezclándola con concentraciones de10, 20, 50, 100 y 150
mg/L de Sulfato de Cobre penta-hidrato (CuSO4•5H2O), en pHs 4 – 5 – 6, manteniendo
una temperatura de 28 °C y agitación constante de 80 rpm durante 180 min; esto con el
fin de evaluar el comportamiento de la levadura y la adsorción de cobre en condiciones de
laboratorio. Además se realizaron repeticiones de los tratamientos evaluados por
triplicado para garantizar la confiabilidad de los resultados; el análisis de resultados se
realizó aplicando las pruebas estadísticas de análisis de varianza y Tukey (ANOVA, α=0.05;
TUKEY, α=0.05) (Anexo 8; Anexo 9).

Activación y preparación de Saccharomyces cerevisiae. 4.1.1. Activación de Saccharomyces

cerevisiae. Para la activación de la levadura se adicionaron 20 g de S. cerevisiae industrial y
250 mL de agua desionizada con 10 g de sacarosa (C12H22O11) (Pauro et al., 2009), este
cultivo se dejó en agitación constante a 150 rpm durante 2 horas (Xiaona, Qiaoyu,
Guomin, Wenqing, Zhanhui, Xingbing & Xingjun, 2009), a una 26 temperatura de 30 °C
(Hernández, 2009). Posteriormente, la levadura se sembró en Agar Papa Dextrosa (PDA)
(Anexo 1), y fue llevada a incubación a 25 °C durante 8 días para verificar su activación

4.1.2. Filtrado, muerte y secado de la biomasa. La levadura activa se filtró, se agregaron 20

mL de agua desionizada para remover completamente los residuos y posteriormente fue
inmersa durante 2 min en 20 mL de formaldehido (CH2O) al 1%. Seguidamente se realizó
un segundo lavado con 20 mL de agua desionizada y filtrado para retirar el excedente de
formaldehido, y luego de esto la levadura fue llevada a un horno a 65 °C por 28 horas, con
el fin de secarla completamente. Para verificar la muerte de la biomasa, se sembró en un
medio PDA y se incubo a 25 °C durante 8 días. Posteriormente la biomasa muerta ya seca
fue macerada en pequeños trozos hasta pasada por los poros de un tamiz de 0,5 mm y se
almacenó en una caja de petri a temperatura ambiente hasta su evaluación (Xiaona et al.,
2009).

4.2. Ensayos de bioadsorción. Los ensayos de bioadsorción se llevaron a cabo con la

biomasa muerta, utilizando una solución stock de 300 ppm de Sulfato de Cobre penta-
hidrato (CuSO4 * 5H2O) (Anexo 2). Se prepararon las soluciones de trabajo,
concentraciones de 10, 20, 50, 100, 150 mg/L Cu (II) (Anexo 3; Tabla 3). La concentración
de biomasa evaluada fue de 2000 mg/L (0.4 g de levadura en 200 mL de solución). Los
ensayos fueron ajustados a pH 4 – 5 – 6 con HCl y NaOH a diferentes concentraciones de
normalidad según fue requerido (Anexo 4) y fueron llevados a un agitador orbital a una
temperatura de 28 °C y una agitación de 80 rpm. Para la evaluación de la bioadsorción del
cobre por la levadura se tomaron muestras de 25 mL a los 0, 60, 120 y 180 min, las cuales
se centrifugaron a 3600 rpm durante 10 minutos para extraer el sobrenadante (Pauro et
al, 2009).
Para la conservación de las muestras hasta su análisis, se aplicaron 5 gotas de HNO3 al
30%, y se refrigeraron a 4 °C (American Public Health Association. APHA, 1992). Para los
controles, se usaron 200 ml de cada una de las concentraciones de Cu II 10 – 20 – 50 – 100
– 150 mg/L bajo las mismas condiciones de pH y tiempos sin agregar la biomasa de S.
cerevisiae (Anexo 5). La evaluación de las concentraciones de cobre se realizó por medio
de espectrofotometría de adsorción atómica - Perkin elmer 2380 (Xiaona et al., 2009). Los
resultados fueron reportados en mg/L de Cu II, por el laboratorio de Asa Franco & Cia Ltda.

4.3. Análisis estadísticos. Para determinar si se presentó diferencia entre la bioadsorción

de las diferentes concentraciones se aplicó un análisis de Varianza (ANOVA) y un análisis
de Tukey (α=0.05) para determinar diferencias entre los tratamientos.

4.4. Evaluación de calidad analítica. Con el fin de garantizar la confiabilidad en los

resultados obtenidos durante el estudio, se realizaron pruebas de calidad analítica (Tabla
4). Para la preparación de la curva de calibración se usó una solución estándar trazable de
cobre = 1,000 +/- 0,002 g/L para absorción atómica marca Panreac lote 0000335785.

* Tratamientos: Las muestras se ajustaron a los pH del estudio, realizando un análisis cada
hora durante 3 horas. * B: Blanco: Se determina si hay contaminación del analito (Cu II) en
el agua desionizada, en el material y en los reactivos (HCl, NaOH y HNO3). * C: Control:
Permite analizar la eficiencia de la técnica. * R: Replica: Verificar la reproductibilidad de los
resultados obtenidos * CC: Curva de Calibración: Con la cual se determinan las
concentraciones máximas y mínimas de detección de Cu II por absorción atómica.