UNIVERSIDAD PERUANA UNIÓN

Facultad de Ingeniería y Arquitectura

Escuela Académica Profesional de Ingeniería Ambiental

Informe de Laboratorio N°2 “Fijación de muestras y tinción simple”

Curso: Presentado en Cumplimiento Parcial

De “Microbiología Ambiental”

Alumno:

Lizbeth Pomari Cañazaca

Docente: Sady Lourdes Haro Casildo

Ciclo y Grupo: Cuarto Ciclo – Grupo I

Juliaca, 22 de agosto del 2018

INFORME DE LABORATORIO N°2: FIJACION DE MUESTRAS Y TINCION
SIMPLE
I. Objetitos
1.1.Objetivo General
 Realizar el procedimiento de fijación de muestras y tinción
simple.
1.2.Objetivo Específico
 Realizar el procedimiento de fijación de una muestra líquida
mediante la inserción de calor.
 Realizar el procedimiento de tinción simple para una muestra
líquida y sólida.
 Observar en el microscopio a 4X, 10X y 40X, la composición y
estructura de los microorganismos presentes en la muestra líquida
y sólida.

II. Revisión de literatura

La gran mayoría de microorganismos son casi incoloros cuando se les observa
a través de un microscopio óptico estándar, para una visualización de bacterias
de manera adecuada y de sus estructuras internas, se requieren tinciones
biológicas. La introducción de tinciones a mediados del siglo XIX influyó
mucho sobre los principales avances en microbiología. En tamaño y forma las
bacterias de importancia médica son microorganismos muy pequeños que se
presentan en tres formas generales: esféricos designados como cocos,
organismos en forma de bastón designados como bacilos, y de formas
espirilas, dentro de estas tres mencionadas anteriormente se encuentran otros
microorganismos que adoptan variantes morfológicas designadas como
formas pleomórficas. Las tinciones consisten en preparaciones acuosas u
orgánicas de colorantes o grupos de colorantes que proporcionan una variedad
de colores a los microorganismos y a los tejidos vegetales y animales, u otras
sustancias de importancia biológica

2.1.Los colorantes
Se pueden clasificar según su origen o según su comportamiento químico.
Según su origen:
 Naturales. Son los colorantes extraídos de animales y sobre
todo de plantas. Por ejemplo, la hematoxilina
 Artificiales. Son los colorantes preparados quiímicamente.
 Fijación: Consiste en formar una película de la muestra sobre un
portaobjetos perfectamente limpio y desengrasado (conservado en
alcohol). La deposición de la muestra debe ocupar aproximadamente
una superficie de 1cm2. los portaobjetos suelen flamearse antes de su
uso para eliminar los restos de grasa y suciedad. La forma de realizar
la extensión depende del estado físico en que se encuentre la muestra:
para muestras líquidas basta con depositar una gota en el centro del
portaobjetos y extenderla con un asa; para muestras sólidas, o colonias
procedentes de un cultivo, se deposita con antelación sobre el
 portaobjetos una pequeña gota de agua, o mejor de solución salina, en
la que se efectúa una emulsión.
 Desecación: Siempre debe realizarse al aire. Puede favorecerse
colocando el portaobjeto sobre el calor suave de una llama de un
mechero, pero tomando precauciones para no forzar el proceso de
secado.

2.2.Técnica de tinción simple

Esta es una técnica que utiliza un colorante, todas las células se observan
del color del colorante empleado. Aunque los diferentes colorantes se unen
de forma específica a las distintas partes de las células el propósito
principal de una tinción simple es destacar el microorganismo completo
para que se vean las formas y las estructuras celulares básicas. El colorante
se aplica al extendido fijado por un tiempo determinado, se lava, se seca y
examina.

III. Materiales y Métodos

3.1.Materiales, reactivos y equipos
3.1.1. Materiales
 Muestra líquida (agua estancada)
 Muestra sólida (restos de microorganismos bucales)
 Pipeta pasteur
 Portaobjetos
 Cubreobjetos
 Mechero
 Mondadientes
3.1.2. Reactivos
 Colorante (azul de metilo o cristal violeta)
3.1.3. Equipos
 Microscopio
3.2.Metodología
3.2.1. Metodología para el proceso de montaje “in vivo”
Mediante el uso de una pipeta pasteur, tomar una cantidad de
la muestra líquida (agua estancada), verter una gota de la
muestra líquida sobre el portaobjetos, posterior a ello sellar
con un cubreobjetos y finalmente llevar al microscopio para
realizar las respectivas observaciones a 4X, 10X y 40X.
3.2.2. Metodología para el proceso de fijación de muestra por calor
Tomar la muestra de montaje in vivo, homogenizar y/o
expandir la gota de muestra líquida con ayuda de un
mondadientes, dejar secar la muestra al ambiente y posterior
llevar a cabo la fijación por calor, pasando el portaobjeto por
la llama del mechero.

3.2.3. Metodología para el proceso de tinción simple

 3.2.3.1.Tinción simple para la muestra líquida (agua
estancada)
Para la tinción simple se empleará la muestra líquida
ya fijada anteriormente, mediante el uso del colorante
(Azul de metilo), añadir 1 o 2 gotas de mencionado
colorante, enjuagar con agua del caño a chorros,
manteniendo el portaobjetos en una posición
inclinada, secar los restos de agua y observar en el
microscopio a 4X, 10X y 40X.
3.2.3.2.Tinción simple para la muestra sólida (restos de las
paredes bucales)
Para la tinción simple se empleará palitos
mondadientes para la obtención de microorganismos
presentes en las cavidades bucales, seguir el proceso
de fijación y mediante el uso del colorante (Azul de
metilo), añadir 1 o 2 gotas de dicho colorante,
enjuagar con agua del caño a chorros, manteniendo el
portaobjetos en una posición inclinada, secar los
restos de agua y observar en el microscopio a 4X, 10X
y 40X.
IV. Resultados
4.1.Resultados para el proceso de montaje “in vivo”
Mediante el proceso de montaje “in vivo”, haciendo el uso del
microscopio se logran ver pequeños microorganismos (bacterias), estos
son transparentes y no se logra visualizar sus fisiologías ni otras
características.

Visualización en el microscopio

40 PTL 100 PTL 400 PTL

 4.2.Resultados para el proceso de tinción simple
4.2.1. Resultados para la tinción simple para la muestra líquida
(agua estancada)
Mediante el uso del microscopio se logró observar, la
estructura y características fisiológicas de los
microorganismos “bacterias” presentes en la muestra líquida
(agua estancada).

40 PTL 100 PTL 400 PTL

4.2.2. Resultados para la tinción simple para la muestra sólida

(restos de las paredes bucales)
Mediante el uso del microscopio se logró observar, la
estructura y características fisiológicas de los
microorganismos “bacterias” presentes en la muestra sólida
(restos de las paredes bucales).
 40 PTL 100 PTL 400 PTL

V. Discusión

 Según Koneman (2008) como la mayoría de las bacterias carecen de

coloración, es importante teñirlas para poder observarlas al microscopio y
determinar su tamaño, morfología y disposición relativa.
 Según Granados (1997) existen distintos factores que afectan a las técnicas de
tinción, como el no realizar correctamente el frotis o variar el tiempo de
tinción, estos factores pudieron haber afectado la observación

VI. Conclusión

 Los colorantes son muy importantes para la observación de microorganismos

ya que proporciona contraste entre el este y el medio que lo rodea, permitiendo
diferenciar su morfología.

 La técnica de tinción simple facilita la observación detallada de las formas,

tamaños y agrupaciones variadas que presentan los microorganismos.
 VII. Referencias
Forrester, T. (2013). Newsletter n ° 1, (June).
Guadalajara, U. De. (n.d.). Manual de Prácticas Bases de Biología Celular.
Vázquez, C., Martín, A., Isabel, M. I., & Serrano, S. (2010). Técnicas básicas de
Microbiología - Observación de bacterias. Reduca (Biología), 3(5), 15–38.
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cMS1C5EeF7MKYecv50jL9Ag#v=onepage&q=KONEMAN%2C
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Qweqw:
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