Universidad Nacional Mayor de San Marcos

Facultad de Química e Ingeniería Química

D. A. de Química Analítica e Instrumentación

ANALISIS QUIMICO POR

INSTRUMENTACION
Mg. Neptalí Ale Borja
nalebunmsm@gmail.com
naleb@unmsm.edu.pe
Quim. Angelica Rodriguez Best
mrodriguezb1@unmsm.edu.pe
2018
INTRODUCCIÓN A LAS TÉCNICAS
INSTRUMENTALES
1. INTRODUCCIÓN

MUESTRA

PROCESO ANALÍTICO
MEDIDA Y TOMA Y
OPERACIONES
TRANSDUCCIÓN DE TRATAMIENTO DE
PREVIAS
LA SEÑAL ANALÍTICA DATOS

RESULTADOS
 TÉCNICA principio científico fundamental que proporciona
información analítica sobre la composición de la materia.

aplicación de una técnica para la resolución

MÉTODO
de un problema analítico

PROCEDIMIENTO instrucciones para aplicar un método

descripción específica y detallada de la

PROTOCOLO aplicación de un método

Espectroscopía de Absorción UV-Visible

Determinación de fosfato en agua por Espectroscopia Absorción UV-visble
Procedimientos: ASTM ó AOAC
Protocolo: tomar X ml de muestra y añadir Y ml de reactivo....
 Métodos Analíticos

Métodos químicos Métodos instrumentales

por vía húmeda

Gravimetría Análisis Electroquímicos Separación Opticos

volumétrico

Precipitación Titulación Electrólisis Cromatografía Emisión

Pesada conductimetría Absorción

2. PRINCIPALES TIPOS DE TÉCNICAS ANALÍTICAS

Técnicas espectroscópicas
Espectrofotometría ultravioleta-visible
Espectrofotometría de fluorescencia y fosforescencia
Espectrometría atómica (emisión y absorción)
Espectrofotometría de infrarrojo
Espectroscopía Raman
Espectroscopía de rayos X
Técnicas radioquímicas
Espectroscopía de resonancia magnética nuclear
Espectroscopía de resonancia de spin electrónico

Técnicas electroquímicas
Potenciometría
Voltamperometría
Técnicas voltamperométricas
Técnicas de redisolución
Técnicas amperométricas
Coulombimetría
Electrogravimetría
Conductimetría

Técnicas cromatográficas
Cromatografía de gases
Cromatografía líquida de alta resolución
Técnicas diversas
Análisis térmico
Espectrometría de masas
Técnicas cinéticas
Técnicas acopladas
CG-MS
ICP-MS
CG-IR
Generadores de Señales
Indica la presencia del analito

• La aplicación de una señal externa a la muestra, con modificación subsecuente

de la misma por el analito (espectroscopía de absorción)
• la creación de un ambiente sobre la muestra, que permite al analito producir
una señal (las mediciones potenciométricas)

Transductor de entrada (detector)

Convierte un tipo de señal en otro

Cantidad física medida Transductor de entrada Salida

eléctrica

Concentración de especies Celda polarográfica Corriente

electroactivas
Actividad iónica en solución Electrodo selectivo de iones Voltaje
Intensidad luminosa Fototubo Corriente
Fotodiodo Corriente
Temperatura Termistor Resistencia
Termopar Voltaje
 3. SELECCIÓN DE UN MÉTODO ANALÍTICO

SELECCIÓN DE UN MÉTODO ANALÍTICO

• ¿Qué exactitud y precisión se precisa?

• ¿ De cuánta muestra se dispone?
• ¿ Cuál es el intervalo de concentración del analito?
• ¿ Qué componentes de la muestra interferirán?
• ¿ Cuáles son las propiedades físicas y químicas de la
matriz de la muestra?
• ¿ Cuántas muestras deben analizarse?
PRECISIÓN

 Se define como el grado de concordancia mutua entre los datos

que se han obtenido de una misma forma

 La precisión mide el error aleatorio, o indeterminado, de un

análisis

 Los parámetros de calidad de la precisión son la desviación

estándar absoluta, la desviación estándar relativa, la desviación
estándar relativa de la media, el coeficiente de variación y la
varianza

EXACTITUD

 La exactitud mide el error sistemático, o determinado, de un

método analítico (valor medido y el valor verdadero aceptado)
Análisis de un material de referencia, comparación usando otro
método que se sabe es exacto, estudios de recuperación
SENSIBILIDAD

La sensibilidad de un instrumento o de un método

mide su capacidad de discriminar entre pequeñas
diferencias en la concentración del analito

•sensibilidad de calibración:
pendiente (m) de la curva de calibración a la
concentración de interés.
S = mc + Sbl
• sensibilidad analítica :

 = m / ss ss desviación estándar de las señales

 LÍMITE DE DETECCIÓN (LD)

• Concentración o el peso
mínimo de analito que pueden
detectarse para un nivel de
confianza dado

Señal correspondiente al LD
Sm = Sbl + 3 sbl

Concentración correspondiente al LD

S = mc + Sbl Sm = mcm + Sbl

Sbl señal media del blanco,
cuando n = 20 - 30

sbl desviación estándar

Sm - Sbl 3 sbl del blanco
Cm = Cm =
m m
 LÍMITE DE CUANTIFICACIÓN

• Concentración o el peso
mínimo de analito que se utiliza
en la práctica que se emplea
para cuantificar

Señal correspondiente al LOQ

Sm = Sbl + 10 sbl

Concentración correspondiente al LOQ

S = mc + Sbl Sm = mcm + Sbl

Sbl señal media del blanco,
cuando n = 20 - 30

sbl desviación estándar

Sm - Sbl 10s bl del blanco
Cm = Cm =
m m
 LÍMITE DE RESPUESTA LINEAL

• Concentración o el peso
mínimo de analito a partir de la
cual deja de existir una relación
lineal entre señal y
concentración

INTERVALO ÚTIL

• Intervalo de calibración que se

emplea en la práctica, comprendido
entre LOQ y LOL
SELECTIVIDAD (K)

La selectividad de un método analítico denota el

grado de ausencia de interferencias debidas a otras
especies contenidas en la matriz de la muestra

KB,A = mB/mA; KC,A = mC/mA

K =0 no hay interferencia

K <0 el interferente causa una reducción de la señal del analito

K >0 el interferente causa un aumento de la señal del analito

S = mA cA + mB cB + mC cC + Sbl

S = mA(cA + KB,A cB + KC,A cC) +Sbl

 4. SEÑALES Y RUIDO

SEÑAL Información acerca del analito

MEDIDAD
ANALÍTICA
RUIDO Información indeseable

• El valor promedio de la señal de ruido N es constante e

independiente de la magnitud de la señal total S.
• La relación señal-ruido (S/N) es un parámetro de calidad mucho
mejor que el ruido solo.

x
S/ N=
s
RUIDO QUÍMICO

• Variaciones no controladas del equilibrio químico: cambios de

temperatura, presión, intensidad luminosa

RUIDO INSTRUMENTAL

• Ruido térmico (Johnson)

– Agitación o movimiento de partículas cargadas
• Ruido de disparo
– Movimientos de partículas cargadas a través de una unión
• Ruido de parpadeo
– Depende de la frecuencia (1/f)
• Ruido ambiental
– Depende del entorno
 4. MÉTODOS DE CALIBRACION

En muchos tipos de análisis químico se mide la respuesta del

procedimiento analítico a cantidades conocidas de analito, y
basándose en ellas se puede interpretar la respuesta de una muestra
de contenido desconocido

4.1 MÉTODO PATRÓN EXTERNO

•Comparación de las señales de la muestra con un conjunto de señales que

ofrecen individualmente "muestras de calibración", (disoluciones patrón)
Estándares de diferente concentración del analito que han sido preparados artificialmente
para que su matriz sea semejante a la de la muestra real.
•No deben usarse estándares puros, puede conducir a errores sistemáticos
importantes.
•Se someten al proceso analítico las muestras de calibración y la muestra
problema de forma independiente.
•El conjunto de las señales de calibrado permite establecer una relación
inequívoca entre la señal y la concentración de analito, que comúnmente se
denomina "recta de calibrado" y que idealmente es una relación lineal señal-
concentración en el intervalo dado de concentraciones.
•La concentración de analito en la muestra se consigue por interpolación

REGRESIÓN LINEAL SENCILLA O DE REGRESIÓN POR MÍNIMOS CUADRADOS

•Proporciona una relación lineal entre la cantidad de analito (x) y la magnitud

de la variable medida (y) que incluye a la mayoría de los puntos
•Los errores en los valores de y son mayores que los errores en los valores de x
•Las desviaciones estándar en los valores de y son similares
La mejor línea recta será la que se obtiene por minimización de las
desviaciones verticales entre los puntos y la línea (la distancia entre los puntos
experimentales y la recta sean mínimas para todos y cada uno de los puntos)

• Desviación vertical (residual) = di • Pueden ser + o -, por ello usamos di2

di = yi – y = yi – (m xi + b) di2 = (yi – y)2 = (yi – m xi - b)2
 Y
Y

xiyi

C C
Ecuación de la recta: y = m x + b

m = pendiente = y
∑xy – (∑x ∑y)/N
m= x
b = ordenada en el origen cuando x = 0
∑x2 –(∑x)2 /N

b=y–mx
Si la relación entre señal y concentración no es lineal, puede resultar
complejo encontrar la función de calibración correspondiente. Es más
practico reducir el margen de aplicación del procedimiento analítico al
rango de concentraciones en el que existe linealidad.
Coeficiente de correlación
• Se emplea como una medida de la correlación entre dos variables
• Indica si la minimización que se ha llevado a cabo es correcta.
Ello indicará que existe el mismo nº de puntos por arriba y por debajo de la recta y
r = 1,000 o muy próximo a dicho valor

Curva de calibración Siempre debe graficarse

4.2 ADICIONES PATRÓN (ADICIÓN ESTÁNDAR)

•El método de la adición estándar es aconsejable cuando se quiere asegurar

la correcta similitud entre el comportamiento de patrones y el problemas.

•En las muestras complejas o con matrices difícilmente reproducibles en los

patrones (alimentos, muestras biológicas o medio ambientales) es
aconsejable el uso de la adición estándar.
Son métodos para estandarizar y analizar dentro de la propia matriz de la
muestra (calibración metodológica "in situ").

PROCEDIMIENTO

-Consiste en preparar los patrones con la misma muestra a analizar y añadir

una cantidad conocida de la especie química a determinar.

-A n alícuotas de disoluciones de calibración con concentraciones crecientes

se la añaden la misma cantidad de muestra.
Todas las disoluciones contienen una concentración de analito que es la suma
de la original de la muestra (se busca) y la añadida

-Se someten las n alícuotas de muestras reales enriquecidas al proceso

analítico, obteniéndose una señal para cada alícuota.
-Se representan las señales en función de la concentración del estándar
añadido. Se obtendrá una recta de calibrado paralela a la que se obtendría con
los estándares sin adición de muestra

-La señal sobre el eje de ordenadas es la que origina la muestra no enriquecida.

-La concentración de analito en al muestra se obtiene por extrapolación de la

recta de calibrado, su cruce con la prolongación del eje de abscisas proporciona
el dato buscado.

Y Siendo C= Cx + Cs

Concentración del patrón adicionado

Concentración del problema

Yx = Señal debida al problema

Cs Y
Ys = Señal debida al patrón
Cx
4.3 MÉTODO DEL ESTÁNDAR INTERNO

OBJETIVO: -minimizar fluctuaciones instrumentales

-establecer referencias con fines cualitativos y cuantitativos.

•Se utiliza un estándar o patrón interno (I) diferente al empleado en la

calibración convencional. El patrón interno es una cantidad conocida de un
compuesto o elemento, no presente en la matriz de la muestra, que se
adiciona tanto a los estándares como a la muestra problema

PROCEDIMIENTO

Supongamos una muestra que contiene el analito X que queremos

determinar, el procedimiento consiste en preparar:

1.- Mezclas conocidas del patrón interno (I) y de los patrones del analito/os a
determinar (X) para construir una curva patrón.

2.- Cuando una cantidad conocida de patrón se agrega a una muestra

problema, la curva de calibrado puede utilizarse para hallar la concentración
del problema.
3.-Las fluctuaciones en la señal afectan por igual al analito y al patrón pero
no a la relación.

Señal debida X
Señal debida I Y I

Concentración X
Concentración I

Características del patrón interno

-compatibilidad (p.e. solubilidad) con la muestra y el patrón
-características químicas y fisico-químicas similares al analito
-respuesta discriminada respecto del analito
 CRITERIOS NUMÉRICOS PARA SELECCIONAR MÉTODOS ANALÍTICOS

Criterio Parámetro de calidad

1. Precisión Desviación estándar absoluta,
coeficiente de variación,
varianza
2. Exactitud Error absoluto sistemático, error
relativo sistemático
3. Sensibilidad Sensibilidad de calibración,
sensibilidad analítica
4. Límite de detección Blanco más tres veces la
desviación estándar del blanco
5. Intervalo
Concentración
de entrConcentración entre límite de
concentración cuantificación (LOQ) y Límite de
linealidad (LOL)
TABLA 6 6. Selectividad Coeficiente de selectividad
OTRAS CARACTERÍSTICAS A TENER EN CUENTA EN LA ELECCIÓN DEL MÉTODO

1. Velocidad
2. Facilidad y comodidad
3. Habilidad del operador
4. Coste y disponibilidad
del equipo
5. Coste por muestra
 COMPONENTES DE LOS INSTRUMENTOS
DISEÑOS GENERALES DE INSTRUMENTOS OPTICOS:

Las técnicas espectroscópicas se fundamentan en 6 fenómenos:

1. Absorción.
2. Emisión
3. Fluorescencia
4. Fosforescencia.
5. Dispersión
6. Quimioluminiscencia
COMPONENTES DE UN INSTRUMENTO

convierte una señal analítica que no puede es

Función del
detectable ni comprensible por un ser humano
instrumento
en una forma que sí lo es.
COMPONENTES DE LOS INSTRUMENTOS
Procesador de señales

Modifica la señal transducida para que se adecue al

dispositivo de lectura
Amplificación Conversión digital-analógica

Conversión analógico-digital Filtrado

Atenuación Integración

Conteo Rectificación

Conversión corriente-voltaje Conversión voltaje-corriente

Transductor de salida (lectura)

Convierte la señal procesada en una señal entendible
por el observador
Impresoras alfanuméricas Registradores (y-t)
Medidores digitales osciloscopios
Disco duro Pantalla catódica, monitor de
video
Disco flexible Cassete de cinta
 INSTRUMENTOS

FUENTES:

• Lámparas de H2 y D2

• Filamento de W

• Lámparas de gas Xe
 LÁMPARAS DE FILAMENTO DE TUNGSTENO
• Se utilizan para longitudes de onda del espectro visible y el ultravioleta próximo. Son
fuentes de un espectro continuo de energía radiante entre 360-950 nm.
• En el paso de la corriente eléctrica el filamento de tungsteno se pone incandescente y
emite luz. La temperatura del filamento puede estar entre 2600 a 3000K.

LÁMPARAS DE FILAMENTOS DE HALUROS DE

TUNGSTENO
Son de mayor duración y emiten energía radiante de mayor
intensidad.
 Lámparas de Hidrógeno y Deuterio.

 Producen un espectro continuo en la región ultravioleta entre

220-360 nm.

 Precauciones: Las subidas y bajadas bruscas de tensión

producen sufrimiento de la lámpara y cambios en las lecturas
de la Absorbancia.
La lámpara tiene una vitalidad limitada y se debe vigilar para que
funcione bien el aparato.
 LÁMPARAS DE VAPORES DE MERCURIO

 Emiten un espectro discontinuo o espectro de líneas que se utilizan

para calibración de longitudes de onda, se emplean sólo para
espectrofotómetros y cromatografía HPLC.
 SELECTORES DE LONGITUD DE ONDA (1)

 Los instrumentos espectroscópicos para las regiones UV y visible

normalmente están equipados con uno o más dispositivos que restringen la
radiación que se va a medir, a una banda estrecha, para que el analito la
absorba o emita.
 Para las mediciones de absorción, las bandas estrechas de radiación
disminuyen mucho las desviaciones de la ley de Beer debidas a la radiación
policromática.
 Muchos instrumentos emplean un monocromador o un filtro para aislar la
banda de longitud de onda deseada de manera que sólo se detecta y se mida la
longitud de onda que se desea.
 Otros instrumentos utilizan un espectrógrafo para desdoblar o dispersar las
longitudes de onda de forma que puedan encontrarse con un detector de
multicanales.
 SELECTORES DE LONGITUD DE ONDA (2)
• Los monocromadores emplean una rejilla de difracción para dispersar la
radiación en las longitudes de onda que la componen.

• El intervalo de longitudes de onda que pasan por un monocromador,

denominadas paso de banda espectral o ancho de banda efectiva, puede ser
menor de 1 nm para los instrumentos más caros, o mayor que 20 nm, para los
sistemas más baratos.

• El espectrógrafo también contiene una rejilla de difracción para dispersar el

espectro.

• Otros instrumentos que se usan para espectroscopia de emisión todavía

emplean un dispositivo denominado policromador, que contiene varias
rendijas de salida y varios detectores múltiples que permiten medir
simultáneamente muchas longitudes de onda.

• Los filtros que se utilizan para las mediciones de absorción comúnmente son
filtros de interferencia.

• Estos filtros transmiten radiación en un ancho de banda de 5 a 20 nm. Un filtro

sólo puede aislar una banda de longitudes de onda; para cada banda se debe
utilizar un filtro diferente.
 SELECTORES DE LONGITUD DE ONDA (3)

Para el análisis espectroscópico, se necesita de una radiación estrecha y

continua de l denominado BANDA.

Un ancho de banda estrecha aumenta la sensibilidad de las medidas de

A. Es un requisito para obtener una relación lineal entre la señal óptica
y la concentración.

La anchura de banda efectiva es una medida inversa de la calidad del

dispositivo. La resolución es mejor cuanto mas estrecha es el ancho de
banda.

Existen 2 clases de selectores de longitud de onda, los filtros y los

monocromadores.
 INSTRUMENTOS (4)

SELECCION DE λ:

• Filtros:
de absorción
de interferencia

• Monocromadores
 SELECTORES DE LONGITUD DE ONDA (4)

 Se emplean 2 tipos de filtros: Filtros de interferencia (Fabry-Perot) y

filtros de absorción.

 Los filtros de interferencia se fundamentan en las interferencias ópticas

para producir bandas estrechas. Consta de un dieléctrico transparente
(Fluoruro de Ca o Mg) que ocupa el espacio entre 2 películas metálicas
semitransparentes. El espesor de la capa dieléctrica se controla
cuidadosamente y determina la l de la radiación transmitida.

 Los filtros de absorción absorben ciertas zonas del espectro. El mas

habitual es un vidrio coloreado. Tienen anchos de banda efectivos que
oscilan entre 30 y 250 nm. En el comercio existen con máximos de
transmitancia en todo el Visible.

 Los filtros de absorción son inferiores a los de interferencia, pero son

adecuados para muchas aplicaciones.
 MONOCROMADORES
• Cuando se desea variar en forma continua y en un amplio intervalo la l
de la radiacion (barrido de espectro).

• Los componentes de los monocromadores:

1) Rendija de entrada que proporciona una imagen optica rectangular.

2) Lente colimadora o espejo que produce un haz paralelo de
radiacion.
3) Prisma o red que dispersa la radiacion en sus longitudes de onda
individuales.
4) Elemento focalizador que forma de nuevo la imagen de la rendija
de entrada, y la enfoca en una superficie plana denominada PLANO
FOCAL.
5) Rendija de salida en el plano focal que aisla la banda espectral
deseada

Los monocromadores son de prisma, red y red de escalera.

 RENDIJAS

• RENDIJA DE ENTRADA: Tiene como función reducir al

máximo la luz difusa y evitar que la luz dispersa entre en el sistema
de selección de longitud de onda.

• RENDIJA DE SALIDA: Tiene como función impedir que la luz

difusa atraviese la cubeta de la muestra, que provocaría desviaciones
a la Ley de Beer-Lambert.
 MONOCROMADORES
 Prismas: son fragmentos con forma de
cuña de un material que permite el
paso de la luz. Ej. de vidrio para
trabajar en el espectro visible o cuarzo
para trabajar en el ultravioleta lejano.

 Redes de difracción: son un gran

número de líneas paralelas situadas a
distancias iguales entre sí y son
hendiduras sobre un vidrio o una
superficie metálica. Cada una de
estas hendiduras se comporta como
un pequeño prisma.
 RECIPIENTES PARA MUESTRAS
• Los recipientes para las muestras, conocido como celdas o cubetas,
deben tener ventanas que sean transparentes en la región del espectro de
interés.

• Para la región UV se requiere cuarzo o sílice fundida y también se

pueden utilizar en la región visible y aproximadamente a 3000 nm en la
región del IR. Comúnmente se utiliza vidrio de silicato para la región
entre 375 y 2000 nm.

• En la región visible también se utilizan celdas de plástico.

• Las mejores celdas tienen ventanas que son perpendiculares a la

dirección del rayo, para disminuir las pérdidas por reflexión. La longitud
más común de las celdas que se utilizan en las regiones UV y visible es
de 1 cm.

• La calidad de los datos espectroscópicos depende en gran medida de la

forma como se utilizan las celdas y de su mantenimiento. Las marcas de
las huellas digitales, grasa u otros depósitos sobre las paredes alteran las
características de transmisión de las celdas.
 CELDAS O CUBETAS
• Es el recipiente donde se coloca la muestra para la medición. Pueden
ser de distintos tipos y tamaños (cuadradas, rectangulares, redondas). Se
obtienen mejores resultados usando cubetas de bordes paralelos. Si se
utilizan cubetas redondas se deben marcar e introducir en el aparato
siempre en la misma posición. Suelen estar fabricadas en vidrio o en
plástico.
 DETECTORES (6)
• Para obtener información espectroscópica, la energía radiante
transmitida, fluorescente o emitida, debe detectarse de alguna forma y
convertirse en una cantidad que pueda medirse.
• Un detector es un dispositivo que indica la existencia de algún
fenómeno físico.
• En los instrumentos modernos, la información de interés se codifica y
se procesa como una señal eléctrica.
• Se utiliza el término transductor para indicar una clase de detector que
convierte cantidades, como intensidad de la luz, pH, masa y
temperatura, en señales eléctricas que posteriormente pueden
amplificarse, manipularse y, finalmente, convertirse en números
proporcionales a la magnitud de la cantidad original.

Puede ser de dos tipos:

Fotónicos: fenómenos de fotoemisión o fotoconducción

Térmicos: aumento de temperatura se convierte en señal eléctrica

FOTOCÉLULAS O CÉLULAS FOTOVOLTAICAS

• Es una lámina de Cobre sobre la que se extiende una capa de Selenio o

de Óxido de Cobre. A esto se le conoce como semiconductor. Sobre el
semiconductor hay una capa de metal transparente que sirve de
electrodo. La luz incide sobre el Selenio y éste desprende electrones,
que pasan a la placa de Cobre originando una diferencia de potencial
por existir carga negativa sobre el Cobre y positiva sobre el Selenio. El
conjunto se conecta a un amperímetro que señala el paso de corriente.

Características:

• Son resistentes; económicas; sensibles desde el ultravioleta hasta los

1.000 nm. de longitud de onda; no se requiere batería externa, ni vacío;
la corriente producida es directamente proporcional a la Energía que
llega y tienen “efecto fatiga”, es decir, que presentan una subida inicial
de corriente, que luego decrece progresivamente hasta el equilibrio. Por
eso hay que esperar entre 30-60 segundos entre una lectura y otra.
 FOTOTUBOS MULTIPLICADORES
• Un fototubo multiplicador es un tubo que contiene un cátodo que emite
electrones de forma proporcional a la Energía que incide sobre él.
Tiene un ánodo que recoge los electrones y la corriente se multiplica
varias veces al chocar los electrones sobre sucesivos ánodos que van
teniendo un voltaje superior al precedente. La señal se amplifica en
cientos o miles de veces.
 DETECTORES DE RADIACION
El detector ideal debe tener una elevada sensibilidad, una elevada señal/ruido y
una respuesta constante en un intervalo considerable de longitudes de onda.
Debe tener un tiempo de respuesta rápido y una señal de salida igual a cero en
ausencia de iluminación.
La señal eléctrica producida por el transductor debe ser directamente
proporcional a la Potencia radiante. S= kP

Los detectores son de fotones y térmicos

Detectores de fotones:

1) Celdas fotovoltaicas o de capa-barrera.

2) Fototubos de vacío.
3) Tubos fotomultiplicadores.
4) Detectores de fotoconductividad.
5) Fotodiodos y
6) Detectores de transferencia de carga