Informe n°1 de Laboratorio

“Tinción de gram”

Integrantes: Aranzza Beas

Aranzazu León
David Orellana
Asignatura: Microbiología
Carrera: Enfermería
Docente: Marco Silva

N° del laboratorio: 1
Fecha: 7/09/2018
Universidad Finis Terrae
ÍNDICE

Resumen…………………………………………………………………………..3

Introducción….…..……………………………………………………………….4

Objetivos…….….…...……..……………………………………………………...5

Procedimientos y materiales…….………………………………………...…..6

Metodología…..……………….…………………………………………..…..7-10

Resultados….……………………..……………………………………………..11

Discusión…….…………………………………………………………………….12

Cuestionario……………………………………………………………………13-14

Conclusión………………………………………………………………………..14

Bibliografía….…………….……………………………………………………..14
Resumen

En el laboratorio se trabajó de manera planificada la técnica tinción de gram, para ello se

dispuso de cuatro medios de cultivo bacteriano, escherichia coli, staphylococcus aureus,
bacillus cereus y streptococcus, en base a los pasos entregados por el docente en práctico
se realizó la preparación de frotis para cada colonia de bacterias con el fin de realizar la tinción
de gram. Cada procedimiento se controló mediante la variable del tiempo y el uso correcto de
cada material aminorando la probabilidad de una alteración en las muestras.
Como resultado se obtuvieron distintas tinciones a partir de cada componente que se usó, ya
sea colorante (cristal violeta), descolorante (alcohol acetona), colorante de contraste (safranina)
y fijador (lugol). Luego de cada proceso se dio a conocer por medio de la observación en el
microscopio electrónico cada uno de los efectos de los componentes en las distintas muestras
tomadas. Cada proceso se garantizó por medio de fotografías.
De esta manera se logró ampliar y llevar a la práctica los conocimientos entregados por el
docente de la asignatura, presenciando las propiedades biológicas de la tinción de gram en
relación a los componentes usados en el laboratorio de microbiología.
Introducción:

Las bacterias son células procariontes que se caracterizan por ser ubicuas, es decir, se
encuentran en todo hábitat de la naturaleza, ya sea en el agua, en el aire, en los alimentos, la
tierra o el mar. Éstas pueden colonizar fómites y diversos tejidos en los animales provocando
diversos tipos de enfermedades. Las enfermedades bacterianas se tratan por antibióticos.
Las bacterias pueden ser:
Patógenas, es decir, provocan enfermedades infecciosas.
Oportunistas, vale decir que producen enfermedad en las personas con factores
predisponentes que puedan favorecer una infección.
Residentes, son propias y favorecen distintas funciones en el organismo, se les considera como
flora microbiana.

Cuando se habla de tinción de gram se hace referencia a un concepto particular en relación a

las tinciones empleadas en bacteriología para el diagnóstico de bacterias, en el existen 3 tipos
de tinciones en particular:

Están las tinciones simples que solo usan un colorante como el azul de metileno o la fucsina, y
estos permiten observar la presencia de organismos intracelulares como la Neisseria. Son
tinciones simples debido a que solo definen la forma y agrupación bacteriana.
También están las tinciones dobles o diferenciales que utilizan más de un colorante y permiten
la agrupación de las bacterias de acuerdo a su diferente afinidad tintorial, entre ellos destacan
la tinción de Gram que agrupa a las bacterias en dos grupos, bacterias grampositivas y
bacterias gram negativas, y la de Ziehl-Neelsen utilizada en la tinción de Mycobacterium.

Para comprender la técnica de tinción de gram es necesario conocer sus características

generales:
La pared celular de las bacterias gram positivas se caracteriza por tener una gruesa capa de
peptidoglicano que retiene el complejo colorante mordiente, si una bacteria fija el colorante a la
pared celular se les considera gram positivas. En cambio la pared celular de las bacterias gram
negativas se caracteriza por ser una capa de peptidoglicano más fina que facilita la salida del
complejo colorante mordiente, en el cual este colorante no se fija y la pared solo capta el
colorante de contraste.

Es necesario conocer y tener un buen manejo de estos conceptos, puesto que servirán de gran
ayuda para poder realizar las preparaciones de frotis en el laboratorio, identificar las
características de cada sustancia permitirá saber cada una de sus funciones y procesos
involucrados en cada muestra bacteriana, los pasos principales a realizar se fundamentan en:
El tiempo empleado para cada frotis, en la cantidad de muestra bacteriana y de sustancia
dispuesta en el portaobjetos y en el proceso de lavado y secado que permitirán tener una
muestra fidedigna.
Objetivos Generales:

Con este informe se pretende evidenciar cada paso y proceso en la tinción de gram y junto a
ello desarrollar habilidades académicas en el análisis, la recolección de datos a través de la
observación, la comprensión y el orden para así desde luego relacionar lo teórico en bacterias
mediante la práctica en tinciones.

Objetivos Específicos:

● Adquirir habilidades y destrezas en la preparación de frotis por medio de los materiales

en el laboratorio.
.
● Adquirir nuevos conocimientos sobre el uso y precaución en materiales y sustancias en
el laboratorio.

● Reconocer las diferencias entre las bacterias gram positiva y gran negativa.
Procedimiento Experimental

Descripción de materiales y componentes, junto con las metodologías empleadas en el

práctico.

Materiales:

● Suero fisiológico
● Un portaobjetos
● Un asa de cultivo
● Mechero de Bunsen
● Pinza
● Medios de cultivo
● Aceite de inmersión
● Microscopio electrónico
● Un descolorante alcohol-acetona
● Un fijador de lugol
● Un colorante cristal violeta
● Un colorante de contraste safranina
● Plumón
● Fósforos
● Guantes
Metodología

Antes de empezar hay que tomar medidas básicas con el uso del equipo de protección
personal como guantes y rotular cada uno de los materiales.

Muestra n°1 (Escherichia Coli)

a) La técnica comienza con la preparación del frotis bacteriano numerando cada uno de los
espacios del portaobjetos y añadiendo una pequeña gota de suero fisiológico con el
objetivo de mezclar minuciosamente cada muestra bacteriana:

Fig.1 Fig.2

Fig.3 Fig.4

1. En primer lugar se flamea el asa de cultivo para esterilizarlo y tomar cada muestra
de colonia bacteriana de los distintos medios de cultivo.

2. La toma de muestras se basa en la técnica de sembrado con asa de cultivo en la

que se traspasan colonias bacterianas a cada uno de los espacios del
portaobjetos. Cada muestra es fijada por calor con el uso de la llama del mechero
de bunsen a unos 2-3 cm.
Fig. 5 Fig. 6

Fig. 7 Fig. 8

3. Luego se tiñe el portaobjetos con el colorante cristal violeta por 1 minuto en el

portaobjetos.
4. Lavar la superficie del portaobjetos con agua de la llave para quitar los
excesos.
5. Luego éste se cubre con lugol por 1 minuto y se lava.

Fig. 9 Fig. 10

6. Éste paso es crítico ya que se descolora con alcohol acetona por 15 segundos
exactos.
7. Se lava con agua el portaobjetos para eliminar los restos de disolvente.

Fig. 11 Fig. 12

8. Se tiñe con safranina por 30 segundos en el espacio del portaobjetos y se lava

para eliminar el colorante de contraste

Fig.13 Fig.14

9. Se seca el portaobjetos en una toalla nova.

Fig.15 Fig.16

10. Se le añade una gota de emulsión con el asa de cultivo estéril.

11. Se regula el microscopio para su observación.

Fig.17 Fig.18

Fig.19 Fig.20

Fig.21 Fig. 22
Resultados:

Colonia Resultados de la tinción de gram

Escherichia coli La bacteria al finalizar el proceso de tinción expresa
un color rosado, lo que la clasifica como una Gram
negativa.

Staphylococcus La bacteria al finalizar el proceso de tinción expresa

aereus un color violeta, lo que la clasifica como una Gram
positiva.

Bacillus cereus. La bacteria al finalizar el proceso de tinción expresa

un color violeta, lo que la clasifica como una Gram
positiva.

Streptococcus. La bacteria al finalizar el proceso de tinción expresa

un color violeta, lo que la clasifica como una Gram
positiva.
Discusión:

El trabajo de laboratorio de tincion de gram permite poder clasificar cada colonia de bacteria en
gram positivas o en gram negativas, se puede así identificar la posición y la cantidad de capas
de peptidoglicano que contenga cada bacteria en su estructura. Además de poder visualizar su
forma.

La escherichia coli es un bacilo de corto tamaño. Debido a que presenta una delgada capa de
peptidoglicano en el espacio periplásmico ubicado entre sus dos membranas lipídicas; el
alcohol-acetona decoloró el cristal violeta ya puesto en ella y toma el color de la safranina, lo
que indica que es una bacteria gram negativa, y es resistente a la penicilina y lisozimas, debido
a su membrana externa de lipopolisacáridos.

La staphylococcus aureus es un coco inmóvil que aparece solo, en racimos o en cadenas, la

bacillus cereus tiene forma de un cilindro alargado (bacilos) y la streptococcus tiene forma de
esfera dividida en un solo plano dispuesto en parejas y/o cadenas. Estas tres bacterias
presentan en el exterior de membrana una gruesa capa de peptidoglicano que no logra
descolorar el cristal violeta con el cual se han teñido, demostrando que pertenecen al grupo de
gram positivas y son sensibles a la penicilina y lisozimas, ya que, ambas bactericidas bloquean
los enlaces peptídicos del peptidoglicano.
Cuestionario.

1. ¿Cuál es el fundamento de la tinción de gram?

El fundamento se basa en las diferencias de la pared celular de las bacterias grampositiva y
gramnegativas. Las bacterias grampositivas fijan el colorante cristal violeta que al unirse al lugol
forman un complejo insoluble en agua, debido que las bacterias grampositivas poseen en su
pared celular RNA en forma de ribonucleato de magnesio.
Las bacterias gramnegativas no poseen este compuesto en su pared celular, por tanto no forma
el complejo insoluble, se unen con el último colorante (fucsina básica) que es de color rosado.

2. ¿En qué tipo de situación la tinción de gram podría constituirse como un

diagnóstico antes de esperar el crecimiento de los cultivos bacterianos?
Podría constituirse como un diagnóstico cuando surge la tinción violeta o rosado ya que serían
indicadores para realizar cualquier identificación bacteriana.

3. ¿Cuál es el fundamento de la tinción de Zielh-Neelsen?

El fundamento se basa en las propiedades de la pared celular de estos microorganismos. La
pared está formada un tipo de ácido grasos llamada ácidos micólicos de cadena larga que les
permite retener los colorantes con mayor facilidad.
En este tipo de tinción se utiliza el compuesto fenólico carbol fucsina( colorante básico).Este
colorante tiene la capacidad de interaccionar con los ácidos grasos de la pared celular.
La tinción con carbolfucsina es mejorada con presencia de calor, debido a que la cera de la
pared celular se derrite y las moléculas de colorantes se mueven con mayor rapidez hacia el
interior de la pared celular. El ácido que e se usa posteriormente sirve para decolorar las
células que no fueron teñidas porque su pared no fue suficientemente afín al colorante.
La fucsina como colorante básico forma un complejo con los ácidos micólicos de la pared de los
microorganismos.

4. Defina sensibilidad y especificidad.

Sensibilidad: Es una medida que indica eficaz es una técnica para poner de manifiesto
pequeñas de la incógnita.
Especificidad: Capacidad de una técnica para determinar entre 2 antígenos diferentes.

5. ¿Qué tan sensible y específica es la tinción de Ziehl-Neelsen en el

diagnóstico de la tuberculosis?
Es específica pero no sensible debido a los ácidos micólicos.
6. ¿Cuál es el fundamento del test de catalasa y para que se emplea?
Fundamento: Se agrega la colonia sobre una gota de agua oxigenada.La enzima transforma el
peróxido de hidrógeno en agua más oxígeno, por eso se crean las burbujas.
Práctica: Se pone en un portaobjetos una gota de agua oxigenada diluida y se efectúa en ella
una emulsión densa de la bacteria tomada por pipeta.
Si se trata de una bacteria catalasa, aparece de inmediato unas burbujas de oxígeno debido a
la acción de la catalasa del microorganismo sobre el agua oxigenada.
Conclusión:

En conclusión esta tinción tienes varios beneficios en el ámbito de la microbiología tanto en

campos de estudio y aplicación como en el campo clínico.
La tinción Gram es más rápida y sencilla por esto es utilizada en clínica por su eficiencia para
poder dar un diagnóstico momentáneo,en comparación con las colonias bacterianas que es un
proceso más lento.
Esta tinción determina el tipo de bacteria, si es gram negativa o positiva, la forma( coco,
espirilos o bacilos), gracias a esto se le puede asociar a algún tipo de enfermedad que pueda
poseer un paciente o una bacteria que esté en el medio.
Se dividían en bacterias gramnegativas las cuales se tiñeron de color rosado(escherichia coli),
las grampositivas de un color violeta (bacilus, streptococcus, Staphylococcus aerus), las cuales
son mencionadas y mostradas en los resultados.

Bibliografía:

Prats Guillem. 2006. Microbiología Clínica. Capítulo 3. Págs 33 – 68 Editorial Panamericana.

Prats Guillem. 2006. Microbiología Clínica. Capítulo 2. Págs 18 – 32 Editorial Panamericana.
Carmen, Maria.online 17 de mayo 2013.Enfermedades infecciosas y microbiología clínica.
https://www.seimc.org/contenidos/documentoscientificos/eimc/seimc_eimc_v31n06p402a409.p
df
Saseda David medico.Mayo 2018.Tinción de Gram. https://www.webconsultas.com/pruebas-
medicas/tincion-de-gram-13399