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Ingeniería Enzimática
Problemario de Cinética Enzimática
1. Empleando los datos que se presentan en la tabla, determinar las constantes cinéticas de la
enzima por el método gráfico.
[S] V
0.5 0.33
1 0.6
1.5 0.82
2 1
3 1.29
5 1.67
7 1.91
10 2.14
12 2.25
15 2.37
2. Determinar las constantes cinéticas por el método gráfico y por medio de las 3 linearizaciones
para los siguientes datos. Discutir a qué se deben las diferencias entre los valores obtenidos.
3. La 6- fosfato isomerasa puede catalizar glucosa, fructosa y galactosa. En base a los datos de la
tabla determinar las constantes cinéticas para cada sustrato y ordenarlos de mayor a menor
afinidad a la enzima.
V mM/min
[S] mM
Gluc Fruc Gala
100 272.73 342.86 206.90
200 444.44 533.33 352.94
500 714.29 800.00 612.24
750 825.69 900.00 731.71
1000 895.52 960.00 810.81
1500 978.26 1028.57 909.09
2000 1025.64 1066.67 967.74
3000 1077.84 1107.69 1034.48
4000 1105.99 1129.41 1071.43
7000 1144.41 1158.62 1122.99
10000 1160.54 1170.73 1145.04
4. Se determina la velocidad inicial de la invertasa para diferentes concentraciones de sustrato
obteniéndose los datos que se presentan en la tabla. Determinar vmax y km por medio de la
linearización de Lineweaver-Burk. Si [E]T=1nM/L ¿Cuántas moléculas de sustrato puede procesar
una molécula de enzima por minuto? Calcular kcat/km ¿Es una enzima eficiente?
[S] μM/L Vo μM/Lmin
5 22
10 39
20 65
50 102
100 120
200 135
5. Durante el daño hepático severo, una enzima es liberada al torrente sanguíneo. Durante el
ejercicio intenso, una enzima que cataliza la misma reacción también es liberada al torrente
sanguíneo. Ambas son fácilmente distinguibles por la diferencia en sus valores de km (la muscular
presenta km=2x10-5 M). La muestra de sangre de un paciente inconsciente generó los resultados
de la tabla. ¿Qué presenta el paciente?
[S] M V (μM/mL min)
5x10-5 43
-5
7x10 57
1x10-4 75
-4
1.5x10 100
2x10-4 120
-4
3x10 150
6x10-4 200
17. Se desea producir leche deslactosada, pero Desafortunadamente, tanto el conservador A como
el B que pueden emplearse para conservar la leche hasta el momento de procesarla inhiben a la
β-Galactosidasa. En base a la siguiente tabla indique el tipo de inhibición de cada uno de los
conservadores y decida cuál de los dos usaría.
[I] mM 0 10 mM A 10mM B
[S] mM Vo μM/s Vo μM/s Vo μM/s
1 2.5 1.17 0.77
2 4.0 2.1 1.25
5 6.3 4.0 2.0
10 7.6 5.7 2.5
20 9.0 7.2 2.86
18. La enzima X se estudia para analizar el efecto de un inhibidor. Para esto se emplean dos
concentraciones diferentes de inhibidor. En base a los datos de la tabla, determinar el tipo de
inhibición, las constantes cinéticas para cada concentración de inhibidor y la constante de
inhibición.
V (mM/L min)
[S] (mM/L)
Sin I I (3mM/L) I (5mM/L)
1.25 1.72 1.25 1.01
1.67 2.04 1.54 1.26
2.5 2.63 2.00 1.72
5 3.33 2.86 2.56
10 4.17 3.7 3.49
19. La ARNasa R se prueba con dos concentraciones diferentes de inhibidor. Determinar el tipo de
inhibidor, las constantes cinéticas para cada concentración y la constante de inhibición. Diga si
utilizaría o no este inhibidor para proteger el ARN durante una extracción.
V mM/L min
[S] μM/L
Sin I I (0.5μM) I (0.8μM)
1250 1.72 1.25 1.01
1670 2.04 1.54 1.26
2500 2.63 2.0 1.72
5000 3.33 2.86 2.56
10000 4.17 3.7 3.49
20. Se analizó una enzima frente a diferentes inhibidores. Determinar la naturaleza da cada
inhibidor (tipo de inhibición) y la constante de inhibición de cada uno.
[S] V nM/min
mM Sin I I (6μM) X (30 μM) Y (4 mM) z (0.2 mM)
0.2 16.67 6.25 5.56 10 8.89
0.25 20 7.69 6.67 11.11 10.81
0.333 24.98 10 8.33 12.5 13.78
0.5 33.33 14.29 11.11 14.29 19.05
1 50 25 16.67 16.67 30.77
2 66.67 40 22.22 18.18 44.44
2.5 71.4 45.45 23.81 18.52 48.78
3.33 76.92 52.63 25.64 18.87 54.06
4 80 57.14 26.67 19 57.14
5 83.33 62.5 27.77 19.23 60.60