CENTRO DE CIENCIAS BASICAS

DEPARTAMENTO DE QUIMICA
ACADEMIA DE BIOLOGIA MOLECULAR

Lic. Químico Farmacéutico biólogo

Sexto semestre
BIOLOGIA MOLECULAR
Dr. Rafael Gutiérrez Campos

Práctica No. 1
“Uso de Material de Laboratorio en Biología Molecular”

Integrantes:
Borunda Baquera Paulina
Flores Ibarra Joselyn Georgina
Palos Dueñas Dulce María
Ramos Hernández Alejandra

27/08/2018
OBJETIVOS
El alumno:
1. Conocerá los materiales básicos utilizados en las técnicas de Biología
Molecular.
2. Aprenderá el uso correcto de los materiales de los mismos.
3. Conocerá las reglas de seguridad particulares que se deben utilizar en
laboratorio de Biología Molecular.
INTRODUCCIÓN
Los avances en la investigación biológica abren nuevos caminos a la enseñanza y la
comprensión de las ciencias biológicas que representan un gran reto, con nuevos desafíos.
Estos cambios y nuevos conocimientos de la biología nos han dado la oportunidad de
brindar nuestro esfuerzo por presentar una serie de trabajos de laboratorios sencillos,
fáciles de realizar, dinámicos y de bajo costo que se adaptan a los tiempos de hoy.
(Mezarina, 2007).

Diferentes trabajos se han desarrollado en torno a la importancia, las limitaciones y las

ventajas de incluir en la enseñanza de las ciencias los trabajos prácticos, los cuales de
acuerdo a Correa (2012) son una línea de investigación del campo de conocimiento que se
ocupa de la Enseñanza de la Biología, donde autores como Barrerá & Valdés (1996),
Puentes (2008) y Correa (2012) agrupan las salidas de campo, las prácticas de laboratorio,
las actividades de lápiz y papel, entre otras.
Se centra la atención en las prácticas de laboratorio, las cuales se contextualizan dentro
del campo de la Biología Molecular, puesto que “ha construido una nueva concepción de lo
vivo, que se basa en lo “invisible”, donde las interpretaciones teóricas se apoyan en
métodos experimentales deductivos e inductivos, que permiten la comprensión de los
complejos fenómenos vivos ocurrentes a nivel intracelular” (Castro, 2011).
Por lo tanto, para conocer este mundo invisible, de acuerdo con Correa (2012) el empleo
de prácticas de laboratorio contribuirán al estudio de fenómenos biológicos a nivel
microscópico, a la enseñanza de conceptos difíciles de aprender, y la posibilidad de la
enseñanza desde un punto de vista multidisciplinar, argumentos compartidos con Córdoba
(2012) y enfatizados al relacionarlos con las implicaciones de la enseñanza de la Biología
Molecular, al presentar un alto nivel de especificación y complejidad en los conceptos.
El laboratorio es un lugar de trabajo en el que se realizan los experimentos diseñados
previamente para contrastar una hipótesis por medio de resultados observables
cualitativamente o cuantitativamente. Es por ello, que debe ser un lugar agradable que invite
a pensar y a reflexionar sobre el problema por resolver o por observar, y para esto, debemos
mantenerlo limpio, cuidar los instrumentos y colocar cada cosa en su lugar, así como
mantener y poner en práctica las medidas de seguridad personal, tales como el uso de la
bata de laboratorio.

Debido a la gran especialización de este tipo de laboratorios, deben cumplirse una serie de
requerimientos físicos, de organización y de materiales. El laboratorio de biología molecular
requiere la manipulación de equipos muy precisos, por lo tanto, conocer su correcta
manipulación garantiza la exactitud del resultado final. (Mezarina, 2007).

METODOLOGÍA

Es importante el También, por seguridad,

conocimiento específico para evitar accidentes, y
1. El profesor
de cada uno de dichos riesgos en las mismas
explicara el uso del
materiales, ya que al prácticas, se necesita un
equipo y material de
saber su funcionalidad conocimiento previo del
laboratorio propio del
se pueden emplear uso adecuado de todos
laboratorio de
correctamente en las los implementos que
Biología Molecular.
diferentes prácticas de existen en el área a
laboratorio a realizar. trabajar.

Al configurar el volumen de Cuando se agregan

2. De acuerdo con
trabajo, el giro debe ser suave volumenes muy
las indicaciones del
y no debe pasarse de los pequeño se deben
profesor, escoger
límites superior o inferior, depositar en el fondo
lamicropipeta
sostener el cuerpo de la del microtubo, si esta
adecuada para medir
micropipeta en una mano y vacío, o sumergiendo
diferentes volumenes
usar la otra mano para girar la la punta de la
de agua, ajustarla y
rueda. También se puede micropipeta en el
colocarlos en
usar el botón de volumen liquido que ya se
microtubos
para ajustar fácilmente con encuentra en el
graduados.
una mano. microtubo.

De no ser así,el
La electroforesis es un
líquidos agregado
método de separación de
puede quedar en las 3.Cargar una
biomoléculas como el ADN
paredes dle muestra en un gel de
o ARN de acuerdo a su
recipiente y nunca agarosa según las
tamaño, permitiendo
mezclarse con los indicaciones del
además su aislamiento
reactivos profesor o técnico.
cortando la zona de
previamente
interés.
agregados.

RESULTADOS
“Manual de Usuario”
a) Micropipetas:

Figura 1.Micropipetas.De derecha a izquierda: Micropipeta No.1, Micropipeta No.2 y

Micropipeta No.3.

Funcionamiento:
Se debe seleccionar la pipeta acorde a los volúmenes que se van a manejar:

 No.1 de 0.5 a 10 µl
 No.2 de 10 a 100 µl
 No.3 de 100 a 1000 µl
En la parte superior de cada una de las micropipetas se encuentra el botón pulsador,el cual
tiene dos topes al presionarlo.Cuando se desee absorber la muestra el botón debe ser
presionado hasta el primer tope antes de sumergirlo en el líquido(muestra),una vez
dentro,lentamente se permite que el botón vuelva a su posición original y se corroborá que
la muestra haya sido tomada y no exista presencia de aire en la punta.
Cuando se desee expulsar la muestra tomada se presiona el botón pulsador hasta el
segundo tope y de igual manera lentamente se permite que regrese a su lugar.
En la figura 1 se observan las 3 micropipetas las cuales en el extremo superior derecho
tienen un botón expulsador de puntas,las cuales tienen que ser depositadas en un
contenedor adecuado.Cada una de las micropipetas tienen una rueda proporcionada en la
parte media superior,la cual sirve para la graduación del volumen.
De acuerdo a la pipeta que se use,será el tipo de punta que se utilizará,es decir,si el
volumen de la pipeta es grande se utilizará una punta con capacidad para dicho volumen.
Las micropipetas deben estar en posición vertical siempre que contenga líquido,para ello
evitar que tenga contacto con el cuerpo de la pipeta.

b) Microcentrífugas:

Antes de usar una microcentrífuga se deben identificar sus partes para su correcto
funcionamiento:
 Figura 2.Microcentrífuga.

Señalamientos:
1. Botón para abrir tapa.
2. Botón Stop.
3. Botón Play.
4. Botón para decantar.
5. Botón de velocidad en revoluciones por minuto o Hertz.
6. Botón para cambiar las revoluciones a Hertz o viceversa.
7. Botón para programar el tiempo.
La microcentrífuga tiene espacio para 24 tubos, los cuales deben ser colocados de forma
estratégica y cuidando que tengan aproximadamente el mismo volumen.
El botón de stop solo debe ser usado en caso de emergencia, es decir, cuando exista un
desbalance o se escucha un algún ruido raro.
Al abrir la tapa existe otra tapa interna que asegura la microcentrífuga, dicha tapa se abre
con cuidado presionando un botón rojo que se encuentra en su parte central, la tapa interna
se retira hasta escuchar un pequeño ruido al presionar el botón(clic) para evitar con ello
que ésta se rompa por ser forzada.
 c) Cámara de electroforesis horizontal:

Polo
Negativo
Polo
positivo

Figura 3.Cámara de electroforesis horizontal.

El correcto manejo de la cámara incluye mantenerla siempre sobre una superficie fija y lisa
como la mesa.
La cámara cuenta con:


Tapa: Al estar abierta impide el paso de la corriente.

Polos: Señalados como polo negativo (polo negro) y polo positivo (polo rojo),
los cuales son conectados a una fuente de corriente.
 Topes: Dan forma al gel y evitan que se derrame.
 Peines: Funcionan para la formación de los pocillos.
d) Fuente de poder

Figura 4.Fuente de poder.

En la figura 4 se muestra la fuente de poder a la cual es conectada la cámara de

electroforesis, necesaria para desarrollar la corrida electroforética, la fuente servirá para
controlar el voltaje ya que de él dependerá la intensidad de la corriente eléctrica y su
amperaje la resistencia a la corriente.
Es importante cerciorase de que la cámara esté bien cerrada antes de conectarla a la fuente
de poder para evitar accidentes. Así mismo también es de importancia no rebasar más de
treinta minutos para evitar que el gel se funda.
DISCUSIÓN
Es de suma importancia conocer y familiarizarse con los materiales y equipos de cualquier
laboratorio, para así obtener resultados, precisos y a menor tiempo posible con el menor
margen de error, según como dice Sara Gutiérrez y Elzbieta Szklarz en el 2001 (“En el
laboratorio de química y cualquier rama de ésta es muy importante conocer muy bien los
materiales, su clasificación y su uso. El saber cómo manejar los utensilios y equipos que se
encuentran en el laboratorio es vital para poder llevar a cabo las técnicas
correspondientes.”).
En un laboratorio de biología es mucho más importante conocer este equipo y material, ya
que en los cursos anteriores no se manejan estos materiales y equipos, los cuales son más
delicados y costosos, además lo que se desea obtener o sintetizar es más delicado, y
cualquier mínimo error influye en el resultado final dando un resultado erróneo. Debido a
que “la biología molecular estudia la composición, estructura y función de las moléculas
importantes para la vida manteniendo estrechas relaciones con diversas disciplinas en las
que destacan la bioquímica y la genética; El estudio de los seres vivos es complejo y para
hacerlo utilizamos conocimientos aportados por disciplinas tan diversas como la física, la
química o la estadística. Las moléculas no funcionan independientemente unas de otras,
igual que tampoco lo hacen las células o los organismos. Por ello se relacionan temas con
el estudio de ADN (Orengo,2013).
La micropipeta es un instrumento de laboratorio empleado para absorber y transferir
pequeños volúmenes de líquidos y permitir su manejo en las distintas técnicas científicas.
Los volúmenes captables por estos instrumentos varían según el modelo los más
habituales, denominados p12, p122 y pB222, admiten un máximo de 12, 122 y B222 Kl,
respectivamente (John R. Holum, 2007).
Se usaron las micropipetas adecuadas para medir los diferentes volúmenes de agua para
después colocarlos en los microtubos graduados. Es de destacar que el uso de
micropipetas permite emplear distintos líquidos sin tener que lavar el aparato para ello, se
emplean puntas desechables, de plástico que habitualmente son estériles.
Por otra parte, las centrifugas son muy útiles para precipitar células y moléculas. Vienen en
distintos tamaños y con distintas capacidades en el manejo de muestras. Este aparato
somete la muestra a fuerzas de aceleración que obligan a las moléculas a concentrarse en
el fondo del envase utilizado, separándolas del medio en que se encuentran. Así mismo
una microcentrifuga es una centrífuga de muy reducidas dimensiones diseñada para la
centrifugación de tubos y viales pequeños. Con la centrifugación se consigue separar los
elementos sólidos dispersos en el líquido. La separación se basa en las distintas
velocidades de rotación de los elementos sólidos y líquidos.
La cámara de electroforesis es ideal para preparaciones rutinarias de técnicas de
electroforesis, para la separación de proteínas y ácidos nucleídos, técnicas de
secuenciación de ADN, patrones de bandas y análisis de oligonucleótidos, es una solución
para los estudios e investigaciones sobre mutaciones y polimorfismos de ADN, disponibles
en diferentes tamaños según las necesidades del usuario (Rubén E. Zapata, 2005).
Los factores que pueden afectar el desarrollo del experimento en la cámara de
electroforesis es no colocar debidamente el ánodo (positivo) y el cátodo (negativo), los
cuales proporcionan el campo eléctrico mediante dos electrodos, entre los que se establece
una diferencia de potencial; si la muestra no se coloca debidamente, esta se correrá en
sentido contrario y se saldrá la misma del gel. También se debe tener especial cuidado en
preparar el gel de agarosa con las medidas necesarias en su preparación.
La electroforesis en gel es una de las más importantes herramientas en biología molecular
y es de valor crítico en muchos aspectos de la manipulación y estudio genético, pero como
todas las técnicas tiene sus ventajas y desventajas, las cuales son que el gel es fácilmente
vertido, no desnaturaliza las muestras y las muestras pueden ser también recuperadas.
Pero, por otra parte, las desventajas son que el gel puede fundirse durante la electroforesis
debido a un descuido en el tiempo de corrida o puede ser debido a el voltaje usado, también
el buffer puede agotarse, y diferentes formas de material genético pueden tratarse cuando
su forma no es predecible.

CONCLUSIÓN
1- Se dio a conocer los materiales y los equipos básicos en el laboratorio de biología
molecular, como lo fue la cámara de electroforesis, la microcentrifugadora y las
micropipetas, así como también el uso de estos, cumpliendo el objetivo de la practica
realizada.
2- Se aprendió el concepto y el uso de una de las técnicas más usadas en biología
molecular; la electroforesis es la separación de partículas cargadas bajo la influencia
de un campo eléctrico.
3- La electroforesis de gel de agarosa es una de las metodologías más utilizadas en el
laboratorio en todo lo relacionado con el trabajo de ácidos nucleicos. Mediante esta
técnica se puede separar fragmentos de ADN y ARN en función de su tamaño y
poder visualizarlos mediante una sencilla técnica de tinción y de esta forma
determinar el contendió de ácidos nucleicos de una muestra a observar.

CUESTIONARIO
1- Explica detalladamente los efectos que tiene el bromuro de etidio en la salud
humana, y qué medidas se deben tomar para evitarlos.
La principal vía de entrada del bromuro de etidio en el organismo es la vía inhalatoria. Por
vía digestiva es nocivo, aunque la ingestión accidental es muy poco probable.

 El bromuro de etidio en forma de polvo es muy tóxico por inhalación.

 Está clasificado como mutágeno de categoría 2 según el Reglamento CLP
(Reglamento 1272/2008), lo que significa que se sospecha que la exposición crónica
a bromuro de etidio puede provocar daños hereditarios.
 La inhalación de polvo puede irritar las vías respiratorias.
 El contacto con la piel puede provocar irritaciones, dermatitis, decoloración de la piel
y manchas de color púrpura.
 Puede provocar irritación, enrojecimiento y dolor ocular.
Para trabajar con bromuro de etidio (EtBr), los usuarios deberán estar previamente
formados en los procedimientos de seguridad establecidos en cada laboratorio para la
manipulación, descontaminación y eliminación de dicho agente químico. Se documentará
la formación y adiestramiento del personal, así como la entrega de la ficha de datos de
seguridad.
2- ¿Cuáles son los riesgos al exponerse a la luz ultravioleta? ¿Qué medidas de
seguridad se va a tomar cuando se tenga que hacer uso de ella?
La LUV-A tiene la peculiaridad de que afecta de manera directa e indirecta, esto es, posee
un doble efecto. El daño indirecto consiste en crear radicales libres, moléculas muy
reactivas que producen una serie de cambios que al final también dañan al ADN. El poder
de penetración de esta luz es tan profundo que no produce quemaduras, mientras que la
LUV-B y la LUV-C penetran las capas más superficiales de la piel, haciendo evidente su
daño por la formación de un proceso inflamatorio conocido como eritema o enrojecimiento,
y también bronceado.
También se asocia la exposición a la LUV con la disminución de la respuesta inmunológica,
la foto envejecimiento, el cáncer de piel y el melanoma cutáneo. Por tanto, el conocimiento
de sus efectos sobre las células, y en particular sobre el material genético, resulta de
importancia obvia.
Lo que conocemos como radiación ultravioleta (RUV) es la suma de la LUV-A y la LUV-B,
lo que indica que nos puede dañar de modo directo e indirecto.
Para usar la luz UV es necesario el uso de una adecuada protección personal en particular
la de los ojos. Siempre utilizar pantallas faciales o gafas de seguridad específicamente
diseñadas, ropa de manga larga, guantes etc., También se requiere verificar
periódicamente la intensidad de la radiación que emite la lámpara UV
3- Enlista las medidas de seguridad que se deben tomar cuando se manipule:
Muestras de origen animal y ultivos bacteriológicos.
 Limpiar y desinfectar las superficies de trabajo, antes de comenzar y al finalizar
la sesión práctica.
 Lavar las manos con agua y jabón antes de realizar las actividades
programadas, antes de salir del laboratorio y siempre después de manejar
materiales que se sabe o se sospecha que son contaminantes.
 Trabajar cerca del mesón, adoptando una buena postura y estando físicamente
cómodo.
 Llevar un calzado apropiado, preferiblemente cerrado y de suela antideslizante
en las áreas de laboratorio.
 Evitar llevar en el laboratorio accesorios que podrían ser fuente de
contaminación (por ejemplo, joyas).
 Recoger el cabello largo.
 No comer, beber, fumar, almacenar comida, objetos personales o utensilios,
aplicarse cosméticos ni ponerse o quitarse lentes de contacto en ningún área
del laboratorio.
 Conocer el manejo de todos los equipos y reactivos a emplear
antes de iniciar las actividades indicadas en la práctica. Si usted
tiene alguna duda, diríjase al profesor.
 Mantener el área de trabajo ordenada, libre de libros, cuadernos
u objetos personales, exceptuando aquellos equipos y materiales
 necesarios para la realización del trabajo práctico.
 Tener cuidado con el alcohol cuando manipule el mechero.
 Regresar los reactivos y equipos empleados (microscopio, mechero, etc.),
limpios y de manera ordenada a su respectivo lugar una vez finalizada la
actividad. Reporte cualquier daño de los mismos al profesor.
 Colocar los materiales de vidrio contaminados en los recipientes dispuestos para
tal fin, por ejemplo: las pipetas en los pipeteros, tubos y placas de Petri en las
ollas de desecho, etc.
 No usar ningún reactivo que no esté debidamente identificado, verificar las
etiquetas de los mismos y estar seguro de cómo emplearlo.
 No devolver sustancias a sus envases originales.
 Extremar las precauciones cuando se utilicen agujas y jeringas para evitar la
inoculación accidental y la generación de aerosoles durante su manipulación y
desecho.
 Emplear técnicas asépticas para el manejo de cultivos de microorganismos.

4- ¿Por qué se debe tener especial cuidado al trabajar con microorganismos

manipulados genéticamente?
Se debe tener extremo cuidado en manipular este tipo de organismo para no llegar a
contaminarlos, así como también a quienes los manipulan por eso se deben establecer
procedimientos de trabajo adecuados y utilización de
medidas técnicas apropiadas para evitar o minimizar la liberación de agentes biológicos
en el lugar de trabajo.
5- ¿Qué es el frente de corrida y cuál es su función?
Se usa en termino de electroforesis como la visualización de las líneas y datos que arroja
para su lectura, usando colorante del buffer.

BIBLIOGRAFÍAS
 Barrerá, O., & Valdés, P. (1996). El trabajo practico en la enseñanza de las ciencias:
una revisión. Enseñanza de las Ciencias., 365-379.
 Castro, J. (2011). El modelo del operón Lac1 50 años después. ¿Qué implicaciones
tiene en la enseñanza de la biología hoy? Bio-grafía: Escritos sobre la Biología y su
Enseñanza., 100-110.
 Correa, M. (2012). Estado del arte sobre los trabajos prácticos en la enseñanza de la
biología (2004-2008): un aporte a la formación docente. Bogotá: Universidad
Pedagógica Nacional.
 Córdoba, L. (2012). Valoración de la usabilidad técnica y didáctica de los simuladores
de laboratorio virtual para la Biología Molecular DBI-UPN. Bogotá: Universidad
Pedagógica Nacional.
 Gutiérrez S., Szklarz E. (2002). Prácticas de Química I. 1° edición. Libros de texto
FCE. México.
 John R. Holum. Fundamentos de Química General, Orgánica y Bioquímica para
Ciencias de la Salud. Editorial Limusa Whiley. México, 2007
 Orengo, F. D. J. (2013). Fundamentos de biología molecular. Retrieved from
https://ebookcentral.proquest.com
 Mezarina, W. (2007). Guía de práctica de biología molecular y celular. [online] Issuu.
Available at:
https://issuu.com/williammezarina/docs/guia_de_practica_de_biologia_molecu
[Accessed 23 Aug. 2018].
 Rubén E. Zapata. Química General. Editorial U. de A. Medellín, 2005