Universidad Nacional Mayor de San Marcos

(Universidad del Perú, DECANA DE AMÉRICA)

Facultad de Farmacia y Bioquímica

Proyecto de Tesis de Pregrado

I. Información General de la Tesis

FORMULACIÓN DE BIOPELÍCULAS DE QUITOSANO FUNCIONALIZADAS CON ACEITE
ESENCIAL DE MINTHOSTACHYS MOLLIS "MUÑA" CON PROPIEDAD ANTIOXIDANTE Y
ANTIMICROBIANA

II. Participantes de la Tesis

A. TESISTA

Nombres Apellidos Nº de Matricula

Kaysser Alberto Villar Calero 13040126

Fecha Firma

B. Director de la Tesis.

Nombres Apellidos Categoría Clase

Cesar Maximo Fuertes Ruiton Principal Dedicación

Exclusiva

Código Docente Título profesional Grados Académicos

Químico Farmacéutica Doctor

Especialidad Departamento Académico Firma

Departamento Académico de
Química Básica y Aplicada

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III. Descripción del Estudio

A. Antecedentes y fundamentación científica, técnica o humanística.

Muchas investigaciones a lo largo de esta década, se han enfocado en el desarrollo

y aplicaciones de polímeros biológicos, a partir de una variedad de productos
agrícolas y / o productos de desecho de alimentos 1. Tales biopolímeros incluyen
almidones, derivados de celulosa, quitosano / quitina, gomas, proteínas (animal o
vegetal) y lípidos 2. Estos materiales ofrecen la posibilidad de obtener películas
delgadas para cubrir alimentos frescos o procesados para extender su vida útil. Las
biopelículas comestibles ofrecen ventajas adicionales tales como la comestibilidad,
la biocompatibilidad, la apariencia estética, la barrera a las propiedades de los
gases, la no toxicidad, la no contaminación y su bajo costo 3.
Las películas están siendo investigadas en cuanto a la capacidad preservante, para
lo cual se incluyen agentes antimicrobianos y antioxidantes.
El quitosano es un polisacárido aminado proveniente de la quitina de los
caparazones de los crustáceos, este biopolímero es obtenido a partir de desechos
de crustáceos. El quitosano exhibe actividad antibacteriana y antifúngica y forma
películas sin la adición de plastificantes. Las películas de quitosano se caracterizan
por tener una baja permeabilidad al oxígeno y por presentar excelentes propiedades
mecánicas. Sin embargo, varios investigadores confirmaron variaciones
significativas en las propiedades mecánicas y de barrera de las películas que se
deben principalmente al tipo y la concentración de quitosano y al tipo de disolvente
utilizado. La principal desventaja de las películas de quitosano es su alta
sensibilidad a la humedad. Las propiedades funcionales de las películas de
quitosano se han mejorado cuando se combinan con otros compuestos formadores
de película.4-6
En este contexto la demanda a nivel mundial de agentes biogradables y renovables
que puedan reemplazar a los plásticos convencionales, ha sido de interés en los
últimos años. Siendo específicos, un campo importante a utilizar sería para
cobertura, protección e incremento de la vida útil de alimentos, para ello se está
estudiando compuestos biopolímeros que puedan ser consumidos o eliminados
fácilmente y que a la vez otorguen propiedades mecánicas, adecuado flujo de gases
y eviten la proliferación de microorganismos tales como hongos y bacterias, se
están desarrollando estudios brinden un material pelicular ideal que incorpore
buena parte de las propiedades antes mencionadas4, ello ha motivado el interés del
equipo e investigación con experiencia en química de carbohidratos y productos
naturales en este estudio aprovechando compuestos que tengan sustento en
propiedades previamente estudiadas como es el caso del quitosano y los aceites
esenciales de plantas utilizadas tradicionalmente en nuestro país, así como el uso
de la goma natural como agente base para la formulación de esta propuesta de
biopelícula funcionalizada.

Proyecto de Tesis de Pregrado - Pág. 2

B. Justificación.

La preocupación latente por el impacto ambiental causado por el uso de materiales de

embalaje plásticos, no biodegradables, ha conllevado a la búsqueda de nuevos
materiales que brinden una alternativa ecoamigable. Dando como producto a nuevos
materiales que ofrecen la posibilidad de obtener películas delgadas para cubrir
alimentos frescos o procesados para extender su vida útil.

Las biopelículas comestibles ofrecen ventajas adicionales tales como la comestibilidad,

la biocompatibilidad, la apariencia estética, la barrera a las propiedades de los gases,
la no toxicidad, la no contaminación y su bajo costo. Además, las bipeliculas por sí
mismos o con portadores de aditivos alimentarios (antioxidantes, antimicrobianos), se
han considerado en la conservación de alimentos debido a su capacidad para prolongar
la vida útil.

C. Hipótesis.

La biopelícula, formada a partir de biopolímero de goma de Cercidium praecox y

quitosano, al ser funcionalizada con la incorporación de aceite esencial de
Minthostachys mollis "muña" presenta propiedad antioxidante y antimicrobiana.

D. Objetivos.

OBJETIVO GENERAL

Formular biopelículas de quitosano funcionalizadas con aceite esencial de

Minthostachys mollis "muña" y evidenciar su propiedad antioxidante y antimicrobiana

OBJETIVOS ESPECÍFICOS

- Extraer, purificar y caracterizar el aceite esencial de Minthostachys mollis "muña" y el

quitosano de caparazones de cangrejo.

- Formular biopolímero a partir de quitosano

- Elaborar biopelículas a partir del polímero de quitosano e incorporar el aceite esencial

de Minthostachys mollis "muña".

- Determinar la actividad antioxidante de las biopelículas mediante pruebas de DPPH

- Determinar la actividad antimicrobiana de las biopelículas por el método de difusión

en agar

Proyecto de Tesis de Pregrado - Pág. 3

E. Metodología de trabajo.

RECOLECCIÓN Y CLASIFICACIÓN SISTEMÁTICA

La muña Minthostachys mollis (muña) será recolectado de la sierra central del país. La
colección contará con el permiso de las entidades correspondientes. La identificación
taxonómica se llevará en el Herbario del Museo de Historia Natural de la UNMSM.

OBTENCIÓN DE ACEITES ESENCIALES

El aceite de Minthostachys mollis (muña) se obtendrá por el método por arrastre de

vapor7. El aceite obtenido se desecará con sulfato de sodio anhidro y será guardado en
lugar fresco.

Caracterización química aceite esencial 8,9

Prueba GC masas: El análisis GC se llevará a cabo usando un cromatógrafo de gases

equipado con un detector de ionización de llama y una columna capilar. Los compuestos
se identificaran por comparación de sus índices de retención relativa y con los de la
literatura. Además, la búsqueda en la computadora seguida de la coincidencia de los
datos de los espectros de masas con los almacenados en la biblioteca de la
computadora empleada para este análisis.

OBTENCIÓN DE QUITOSANO 10

Se utilizarán caparazones de cangrejo violaceo, especialmente en la forma de material

de desecho como fuente primaria de quitina. El procedimiento consiste en
desproteinizar con hidróxido de sodio del material previamente desmineralizado en
medio ácido. A partir de la quitina se procederá a desacetilar para obtener quitosano.
Para caracterizar quitina y quitosano se evaluarán los espectros infrarrojos en rango
medio 4000 a 700 cm-1.

PREPARACIÓN DE LAS BIOPELÍCULAS 4-6

Quitosano (g %): Conc.A, Cocn.B, Conc.C

Aceite esencial de Minthostachys mollis (As. Es) % (v/v): 0.5, 2, 5%

Se disolvieran gramos g de polvo de quitosano (Cantidad A, B y C) en 100 ml de

solución acuosa de ácido acético al 1% (vol / vol) para las concentraciones finales de
A%, B% y C%, asimismo posteriormente se añade los aceites esenciales a la
concentración de 0.5, 2 y 5 %.

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El método utilizado para formar las biopelículas será "moldear", verter la formulación en
moldes acrílicos, extendiendo la mezcla con una cuchara y secando a temperatura
ambiente. Las películas se recuperarán manualmente después de 24 horas.

Se obtendrán varias películas que serán evaluadas.

EVALUACIÓN DE PROPIEDADES BIOLÓGICAS ACTIVIDAD ANTIOXIDANTE

a) Método DPPH25 11-12

La actividad antioxidante de las muestras de película se evaluará usando un ensayo de

eliminación de radicales libres DPPH (2, 2-difenil-1-picrilhidrazilo). Se desarrollará
según el método propuesto por Brand-Williams y col. Para evaluar la actividad
antioxidante de compuestos específicos o extractos, estos últimos puede reaccionar
con un radical estable, el 2, 2-difenil-1-picrilhidrazilo (DPPH) en una solución con
metanol. En su forma radical, DPPH se absorbe a 517 nm, pero, al reducirse por un
antioxidante o una especie radical, su absorción disminuye. La disminución de la
absorbancia de la solución DPPH indica un aumento de la actividad de eliminación de
radicales DPPH.

Se pesará 100 mg de muestras de película luego se cortarán en trozos pequeños y se

agitarán en un vortex con 5 ml de etanol durante 3 minutos. La mezcla se dejará en
reposo durante 3 h, a 25ºC, y luego se someterá a agitación vigorosa en el vortex
durante otros 3 min. Una alícuota (100 μL) de la solución diluida de etanol (1/10) luego
se mezclará con 2,9 ml de DPPH 0,1 mM en etanol. La mezcla se agitará vigorosamente
y se mantendrá en la oscuridad a temperatura ambiente durante 30 minutos
aproximadamente. La absorbancia se medirá a 515 nm usando un espectrofotómetro
UV-visible.

Todos los experimentos se llevarán a cabo por triplicado y la capacidad antioxidante de

la película se expresará en % de actividad de eliminación de radicales DPPH / mg de
película.

ACTIVIDAD ANTIMICROBIANA5 11,13-15

Se utilizará agar Mueller Hinton al cual se inoculará en una placa Petri con 0.1 mL 105–
106 UFC/mL de bacteria/hongo. El film preparado se corta en discos de 10 mm de
diámetro para luego ser colocado en cultivos microbianos. Las placas se incubarán a
37°C y una humedad relativa de 50% ± 2% durante 24 horas.

Mediante el uso de la prueba de ensayo de difusión en agar, la intensidad de la actividad

puede verificarse visualmente al evaluar el halo de inhibición local por lo que esta
prueba se debe realizar triplicadamente puesto que los resultados son cualitativos.

Proyecto de Tesis de Pregrado - Pag 5

 Los microorganismos se referencian son certificados ATCC, dos gram (+), gram (-) y
un hongo: Bacillus subtilis, Staphylococcus aureus, Escherichia coli, Pseudomonas
aeruginosa, Candida albicans.

F. Fecha de realización de la Tesis.

a) Inicio: Junio b) Término: Marzo

G. Calendario y actividades.

Jun Jul Ago Sep Oct Nov Dic Ene Feb Mar

1. Recolección de X
información bibliográfica

2 X
Recolección y clasificación
de la muestra.

Obtención de aceites
esenciales y caracterización

3. Obtención de quitosano X X

4. Preparación de X X
biopelículas

5. Evaluación de propiedad X X
antioxidante y
antimicrobiana

6. Elaboración de X X
presentación escrita (tesis)

Proyecto de Tesis de Pregrado - Pag 6

H. Referencias Bibliográficas

1. Vasconez, M., Flores, S., Campos, C., Alvarado, J., Gerschenson, L. Antimicrobial
activity and physical properties of chitosan–tapioca starch based edible films and
coatings. Food Research International.2009; 42(7): 762–769.

2. Cutter, C. Opportunities for bio-based packaging technologies to improve the quality

and safety of fresh and further processed muscle foods. Meat Science Journal 2006:
74(1); 131–142.

3. Barros, J. Antimicrobial Food Packaging. Elsevier Ltd,Academic Press. 2016.

4. Arham, R., Mulyati, M.T., Metusalach, M. Salengke, S. Physical and mechanical

properties of agar based edible film with glicerol plasticizer. International Food Research
Journal 2016; 23(4): 1669-1675

5. Aida Rodriguez-Garcia, Luis J. Galan-Wong, Katiushka Arevalo-Niño. Development

and in vitro evaluation of biopolymers as a delivery system against periodontopathogen
microorganisms. Acta Odontol. Latinoam. 2010; 23 (2): 158-163

6. Yuan G, Hua L, Yan B, Chen X y Sun H. Physical properties, antimicrobial activity of

chitosan films containing carvadol

7. Torrenegra M, Granados C, Duran M, León G, Yáñez X, Mart{inez C, y Pajaro N.

Composición química y actividad antibacteriana del aceite esencial de Minthostachys
mollis. Orinoquía 2016; 20(1):69-74.

8. Van Baren C, Di Leo P, Elechosa M, Molina A, Juárez M, Martínez A, et al. New

insights into the chemical biodiversity of Minthostachys mollis in Argentina. Biochemical
Systematics and Ecology Journal. 2014; 57: 374-383.

9. Sanei– Dehkordi A, Mehdi M, Vatandoost H, Reza M. Chemical Compositions of the

Peel Essential Oil of Citrus aurantium and Its Natural

10 Barros J, Guzmán L., Tarón A. extracción y comparación de la quitina obtenida a

partir de caparazón de callinectes sapidus y Penaeus vannameis. Rev. U.D. C.A
Actualidad & Divulagción Científica 2015; 18(1):227-234.

11. Brand-Williams, W.; Cuvelier, M. E.; Berset, C. Use of a free radical method to
evaluate antioxidant activity. LWT, 1995, 28, 25–30

12. Miliauskas, G.; Venskutonis, P. R.; Van Beek, T. A. Screening of radical scavenging
activity of some medicinal and aromatic plant extracts. Food Chem. 2004, 85, 231–237.

Proyecto de Tesis de Pregrado - Pag 7

13. Arham, R., Mulyati, M.T., Metusalach, M. Salengke, S. Physical and mechanical
properties of agar based edible film with glicerol plasticizer.

14. Kuskoski EM, Asuero AG, Troncosa AM, mancini – Flho y Felt R. aplicación de
diversos métodos químicos para determinar actividad antioxidante de pulpa de frutas
Cienc-Tecnol. Aliment.Campinas 2005; 25(4):726-732.

15. Saker SD, Nahar L, Kumarasamy Y. Microlite plated – based antibacterial assay
incorporating resazurin as indicador of cell growth, and its application in the in vitro
antibacterial screening of phytochemicals. Methods 2007; 42(4):321-324.

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IV. Evaluación

A. Opinión del Director de la Tesis

Fecha Firma

B. Opinión de la Comisión de Evaluación del Proyectos de Tesis:

Fecha Firma

_________ ___________________ ____________________

Firma Firma Firma

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