AÑO DEL DIÁLOGO Y LA RECONCILIACIÓN NACIONAL

UNIVERSIDAD CIENTÍFICA DEL SUR

ESCUELA: CIENCIAS DE LA SALUD

CARRERA: MEDICINA HUMANA

LABORATORIO DE BIOLOGÍA CELULAR

CURSO: BIOLOGÍA CELULAR

INFORME DE PRÁCTICA

PRÁCTICA N°7

TÍTULO: METABOLISMO CELULAR: PROCESO DE RESPIRACIÓN CELULAR

PROFESOR: CÁCERES REY, OMAR ALBERTO

INTEGRANTES:

 COCHACHI SALAZAR, STHEFANY

 DOLORIER ROSADIO, BRAYAM
 SCHEBESTA ZEGARRA, MARIA PAULA
 SESSAREGO PASTOR, CHIARA
 SIERRA DE LA CRUZ, DANA
 SOTELO VARGAS, LINDA

HORARIO DE PRÁCTICAS

HORA: 9:10-11:00

DÍA: MIÉRCOLES

FECHA DE REALIZACIÓN DE LA PRÁCTICA: 16/05/18

FECHA DE ENTREGA DEL INFORME: 23/05/18

 INTRODUCCIÓN

Para subsistir los seres vivos toman sustancias del medio, las transforman en el
interior de las células, utilizan las sustancias resultantes de dichos cambios y
eliminan los desechos, todo este proceso se denomina metabolismo celular.
El metabolismo es el conjunto de procesos químicos que toma lugar en las células,
permite generar energía y obtener materia para el crecimiento, la eliminación de los
desechos y otras funciones fisiológicas.
El metabolismo ocurre en dos fases en anabolismo y catabolismo. El anabolismo es
la fase constructiva en el cual la célula toma materiales recibidos de líquido
extracelular y lo utiliza para formar partes estructurales, incluso sintetiza energía en
ATP. Por otro lado, el catabolismo es un proceso destructivo o de degradación de
macromoléculas que tiene como finalidad la obtención de energía.
Posteriormente a los mecanismos de nutrición y digestión celular, las células usan
las moléculas producto de estos procesos como fuente para la elaboración de energía
que es necesaria para la actividad celular, para lo cual pasan procesos como la
desaminación de los aminoácidos, la beta-oxidación de los ácidos grasos y la
glucólisis que tienen como objetivo la formación de ácido pirúvico y otras moléculas
necesarias para los procesos de respiración celular. El ácido pirúvico obtenido de
estos procesos, principalmente de la glucólisis, puede dependiendo del individuo y
del medio en el cual se encuentra ir a dos rutas metabólicas la anaeróbica y aeróbica.
MARCO TEÓRICO

La respiración celular en presencia de oxígeno se le conoce como respiración

aeróbica denominada también catabolismo aerobio degradándose completamente
hasta CO2 y agua, este mecanismo se realiza en las mitocondrias que actúan como
centrales energéticas de la célula y sintetizan ATP producto de esta degradación.
Este proceso sucede en las mitocondrias y se divide en 5 etapas, la glucólisis,
descarboxilación, Ciclo de Krebs, cadena transportadora de electrones y
fosforilación oxidativa. Produciendo 36 ATP en la mayoría de células, pero en las
células del corazón y hígado llegan a formar hasta 38 ATP.

En este proceso el ciclo de Krebs y la cadena respiratoria se da en las mitocondrias y

la glucólisis en el citosol a diferencia de las procariotas que la glucólisis y el ciclo de
Krebs se da en el citosol y la cadena respiratoria se da en la membrana plasmática de
las bacterias

La otra ruta mencionada es el proceso anaeróbico llamada también catabolismo

anaeróbico, que en ausencia de oxígeno transforma el ácido pirúvico en otras
moléculas degradándose parcialmente, esta ruta tiene dos procesos más estudiados:
el catabolismo láctico que por acción de la lactato deshidrogenasa se transforma en
ácido láctico y la vía alcohólica donde el ácido pirúvico se descarboxila formando
un acetaldehído y éste es reducido por acción del NADH a alcohol etílico esta
respiración se presenta más en bacterias y hongos. Este último tipo de fermentación
la realizan algunas especies de levaduras como la Saccharomyces cerevisae que son
utilizadas en la industria de la panificación y en la industria cervecera, estas
levaduras tienen la capacidad de poder realizar los dos tipos de respiración
dependiendo de la abundancia de nutrientes en el medio, cuando se encuentran en un
medio rico en carbohidratos escogen la ruta anaeróbica. Este proceso consta de dos
rutas:

 Fermentación láctica

Es cuando los microorganismos toman la glucosa presente y la convierten en

ácido láctico, este proceso natural ha sido utilizado por el hombre para
conservar y producir alimentos como queso y yogurt.
A pesar de los desarrollos tecnológicos que han permitido conservar los
alimentos sin que pierdan o transformen sus propiedades, la fermentación
láctica sigue siendo un método de gran uso en todo el mundo.
Esto se debe a sus beneficios económicos y para la salud, pero, sobre todo, a
la variedad de sabores que permite producir.
Las bacterias que producen el ácido láctico son el Lactobacillus,
Lactococcus, Leuconostoc y Streptococcus thermophillus.
Estos microorganismos responsables de la fermentación se encuentran en la leche,
en productos de origen vegetal e inclusive en la tierra.
El ácido láctico, que es la sustancia resultante de la fermentación, transforma
ligeramente la composición de los productos. Estas transformaciones, bien
aplicadas, ayudan a su conservación en inclusive mejoran sus propiedades
nutricionales.

Éste ácido tiene un sabor suave y reduce el PH de los alimentos. Esta transformación
hace que los productos se vuelvan inhabitables para algunos microorganismos que
ocasionan su descomposición.
Gracias a ello es posible alargar la vida de los productos sin necesidad de
refrigeración o procesos químicas.
La presencia del dióxido de carbono también es importante para la conservación de
los alimentos. Esto es posible porque reemplaza el oxígeno y de esta manera
estabiliza sustancias que ayudan en la descomposición y preserva el color de los
productos.

 Fermentación alcohólica: Que es el proceso en el cual los microorganismos

que procesan los hidratos de carbono para obtener como producto final un
alcohol en forma de etanol, dióxido de carbono (CO2) en forma de gas y unas
moléculas de ATP que consumen los propios microorganismos en su
metabolismo celular energético anaeróbico este proceso también es usado por
los humanos para producir vinos y cervezas.

La fermentación alcohólica tiene como finalidad biológica proporcionar energía

anaeróbica a los microorganismos unicelulares (levaduras) en ausencia de oxígeno.
Para ello disocian las moléculas de glucosa y obtienen la energía necesaria para
sobrevivir, produciendo el alcohol y CO2 como desechos consecuencia de la
fermentación.

Una de las principales características de estos microorganismos es que viven en

ambientes completamente carentes de oxígeno (O2), sobre todo durante la reacción
química. Por eso se dice que la fermentación alcohólica es un proceso anaeróbico.
Descubrimiento ancestral.

En la presente práctica, utilizando un espirómetro artesanal, se observará la acción

de diferentes carbohidratos como facilitadores en el proceso de respiración celular
anaeróbica y la acción de una antimetabolito que interferirá en el proceso de
respiración celular inhibiendo una de las etapas de la glucólisis. Para lo cual el
empleo de la levadura es el tipo de experimento en el que se observa de forma más
rápida la demostración de la respiración celular.
La acción del inhibidor sobre la respiración celular: La enzima enolasa cataliza la
reacción que convierte el 2 fosfoglicerato (2PG) en fosfoenolpiruvato (PEP), la
enolasa para reaccionar requiere de la presencia de iones de magnesio que mantiene
su estructura y de iones manganeso como cofactor. En el siguiente experimento se
usará el flúor para precipitar los iones magnesio y así inhibir la reacción. Esta
inhibición se puede detectar como una disminución en la velocidad del proceso
respiratorio, (disminución en la producción del CO2) en las células de levadura.
Debido a que los fluoruros son extremadamente venenosos para los humanos,
maneje las soluciones con sumo cuidado en este ejercicio y asegúrese de lavarse las
manos tan pronto como termine.

OBJETIVOS

 OBJETIVOS GENERALES

 Entender que es la respiración celular, su importancia y los pasos

principales de la misma.

 OBJETIVOS ESPECÍFICOS

 Diferenciar la respiración anaeróbica y aeróbica.

 Reconocer e interpretar las varianzas de la longitud del respirómetro en

relación con las concentraciones del antimetabólico.

 Identificar las consecuencias del antimetabólico NaF en relación

con la producción de CO2.
 PROCEDIMIENTO EXPERIMENTAL

 MATERIALES USADOS:

 9 tubos de ensayo  3ml de NaF 0.10 molar

pequeños  3ml de NaF 0.01 molar
 9 tubos de base grandes  8 pipetas de plástico
 1L de agua destilada  4 gradillas
 3 ml de solución  4 varillas de vidrio
glucosa al 5%  1 plumón marcador para
 3 ml de solución vidrio
fructosa al 5%
 1 incubadora a 37°C
 3 ml de solución
 1 regla milimetrada
sacarosa al 5%
 100 gr de levadura seca
 3 ml de solución
almidón al 5%

 PROCEDIMIENTO (RESPIRÓMETRO ARTESANAL):

1. Nosotros llenamos con agua uno de los pequeños tubos de ensayo (en
el experimento usamos la suspensión de levaduras y las otras sustancias
en lugar de agua).

2. Luego invertimos el tubo de ensayo sobre el tubo de base plana. Lo

hicimos rápidamente, de tal manera que se derrame la menor cantidad
posible de líquido del tubo de ensayo.

3. Posteriormente, si hay burbuja de aire, medimos con la regla graduada

en milímetros, si este contiene células de levadura respirando, el
dióxido de carbono tenderá a acumularse desplazando así más líquido.
Después de un rato, el volumen de la cámara de aire constituye una
medida de la cantidad de respiración que haya tenido lugar.
 PREPARACION DE MUESTRAS UTILIZANDO
ANTIMETABOLITOS
A los tubos de ensayo enumerados del 1 al 5, los llenamos de la siguiente
manera:

REACTIVO 1 2 3 4 5
Levadura 3 ml 3 ml 3 ml 3 ml 3 ml
Agua destilada 5ml - - - -
Glucosa - 5ml 2ml 2ml 2ml
NaF (0,01 M) - - 3 ml - -
NaF (0,05 M) - - - 3 ml -
NaF (0,10 M) - - - - 3 ml

*Llenamos el tubo hasta el borde

 Cada uno de nosotros invertimos cada tubo de ensayo dentro de un

tubo de base plana para armar el respirómetro. Luego medimos la
cámara de aire formada y llevamos los respirometros a la incubadora
37°C durante una hora. Finalizado el tiempo, volvimos a medir la
cámara de gas de cada tubo.
 RESULTADOS

 EXPERIMENTO: Preparación de muestras utilizando

antimetabólicos. Después de haber realizado el procedimiento descrito y
haber observado y medido las longitudes de los respirómetros en cada caso,
estos fueron los resultados:

LONGITUD LONGITUD L. FINAL – L. INICIAL

TUBO INICIAL(mm) FINAL(mm) (Producción de CO2)
TUBO 1 9mm 9mm 9mm – 9mm = 0mm
TUBO 2 7mm 48mm 48mm – 7mm = 41mm
TUBO 3 7mm 20mm 20mm – 7mm = 13mm
TUBO 4 9mm 15mm 15mm – 9mm = 6mm
TUBO 5 8mm 12mm 12mm – 8mm = 4mm
 DISCUSIÓN DE RESULTADOS

 EXPERIMENTO: Preparación de muestras utilizando

antimetabolitos.

La levadura es un hongo unicelular. En este experimento observamos la producción

de CO2 como producto metabólico de la fermentación, esto nos ayuda a entender el
funcionamiento de la respiración celular en la S. cerevisiae. El CO2 evidencia la
cantidad de sustrato fermentado por la levadura, que a su vez nos da información
valiosa sobre el consumo que favorece el crecimiento de este organismo.

En esta oportunidad hemos observado como responde la levadura en cinco

diferentes muestras: 3ml H2O + 3ml levadura (tubo 1), 3ml levadura + 5ml glucosa
(tubo 2), 3ml levadura + 2ml glucosa + 3ml NaF 0.01M (tubo 3), 3ml levadura +
2ml glucosa + 3ml NaF 0.05M (tubo 4), 3ml levadura + 2ml glucosa + 3ml NaF
0.10M (tubo 5).

La función del fluoruro de sodio (NaF) es inhibir la respiración celular y esto se da

porque el flúor precipita los iones de magnesio y manganeso lo que impide que la
respiración celular, ya que el magnesio y el manganeso son necesarios para que la
enolasa funcione adecuadamente, lo que implica la disminución de la producción de
CO2 en la levadura.

Las cinco muestras fueron sometidas a una temperatura de 37°C durante 30 minutos,
esta temperatura fue escogida debido a que las enzimas de la levadura trabajan de
una manera más eficiente, ya que si hubieran estado a temperatura ambiente(22°C)
el proceso de respiración celular hubiera sido mucho más lento y hubiéramos
necesitado más de 30 minutos.
En el tubo 1 observamos que la producción de CO2 es mínima ya que solo se
observa una longitud del respirómetro de CO2 de 0mm y esto se debe a que el agua
no contribuye con fuentes de energía para el proceso de respiración.

En el tubo 2 se obtuvo la mayor producción de CO2, la longitud del respirómetro fue

de 41mm y esto se debe a que las levaduras obtuvieron energía disociando
las moléculas de glucosa y generando productos como el alcohol y CO2. La glucosa
es una de las mejores fuentes de energía para realizar la respiración celular.

En el tubo 3 la producción de CO2 fue baja. La longitud del respirómetro fue de

13mm, aunque hubo presencia de glucosa. Lo que diferencia esta muestra del tubo 2
es que en este hay un inhibidor, que es el NaF (0.01M), y lo mismo ocurre en los
tubos 4 y 5. Pero varía la concentración del NaF de menos a más, provocando así
una mayor inhibición y por ende menos producción de CO2.
En el tubo 4 la longitud del respirómetro fue de 6mm y en el tubo 5 fue de 4 mm,
siendo así el quinto tubo el de menos producción de CO2.

El tubo 5, si bien es cierto que también estuvo en presencia de glucosa, pero el NaF
a una concentración al 0.1 M, causó la inhibición casi completa de la respiración
celular y por eso la poca producción de CO2.

Entre el tubo 2 y el tubo 5 hay una diferencia de longitud de respirómetro de 37mm

y eso se debe, en el caso del tubo 1, a que no hay mejor fuente de energía que la
glucosa lo que hará que la respiración celular sea eficiente y así producir más CO2.
 COCLUSIÓNES

 El agua no es fuente ideal para la respiración de la levadura, lo cual implica

cero producción y liberación de CO2.
 La Glucosa es el sustrato ideal para que la levadura realice una eficiente
respiración, y producción de CO2.
 El fluoruro de sodio(NaF) a una concentración de 0,01 molar no tiene efecto
suficiente en la producción de CO2, por tanto, tampoco en relación a la
longitud del respirómetro, en el caso para el tubo 3.
 El aumento de la concentración del inhibidor del floruro de sodio es
primordial en la producción del CO2; a mayor concentración de fluoruro de
sodio(NaF), menor producción de CO2.
 REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS

1. Alberts B, Bray D, Hopkins K, et al. Introducción a la Biología Celular

Edición: 3ª Ed Panamericana. 2011

2. Gerald Karp. Biología celular y molecular: Conceptos y experimentos.

Edición 7ª. Ed. McGraw Hill. 2014

3. Respiración celular. [online] Available

at:https://mejorconsalud.com/respiración-celular/ [Accessed 19May 2018].

4. Biology-pages. [online]
at: https://quimica.laguia2000.com/general/fermentacion-alcoholica
[Accessed 19May 2018].