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Biodegradación de crudo de petróleo en terrarios.

Escalante
Guzmán, Rocío Miluska.

8. ANEXOS

8.1 COMPOSICION DE MEDIOS DE CULTIVO

CALDO ACETATO MINERAL

Fosfato ácido di sódico dodecahidratado. 2.25 g


Fosfato diácido monopotásico 0.345 g
Sulfato de Magnesio heptahidratado 0.05 g
Cloruro de Amonio 0.25 g
Acetato de Sodio 0.000125 g
Bicloruro de Calcio dihidratado 0.00025 g
Solución de elementos traza 0.75 mL
Carbonato de Sodio al 0.05% 0.11 mL
Agua destilada 250 mL
pH final 7.0
Esterilización a 121 ºC por 15 min.

MEDIO AUXILIAR ( AUX MEDIUM)

Sulfato amoníaco 2g
Base 82.8 mg
Aminoácidos. 250 mg
Vitaminas y sustancias nutritivas 35.9 g
Tampón fosfato 0.04 M pH= 7.1 1000 mL
Agar 1.5 g
pH final 7.0-7.2
Esterilización a 121 ºC por 15 min.

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CETRIMIDE AGAR
Peptona de gelatina 20 g
Cloruro de Magnesio 1.4 g
Sulfato potásico 10 g
N-cetil-N,N,N,-trimetilamoniobromuro(Cetrimide) 0.3 g
Agar-agar 13 g
Glicerina 10 mL
Petróleo al 1 %
Esterilización a 121 ºC por 15 min.
AGAR KING-B
Peptona de carne 4g
Glicerol 2g
Fosfato diácido de Potasio 0.3 g
Sulfato de Magnesio 0.3 g
Agar 3g
Agua destilada 200 mL
pH final 7.0

Esterilización a 121 ºC por 15 min.


MEDIO MINERAL
Cloruro de Sodio 24 g
Cloruro de Potasio 0,7 g
Fosfato diácido de Potasio 2,0 g
Sulfato de Magnesio heptahidratado 1,0 g
Fosfato ácido di sódico 3,0 g
Nitrato de Amonio 1,0 g
Agua destilada 1000
Petróleo crudo mL
pH final 10 mL
7.0
Esterilización a 121ºC por 15 minutos.

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MEDIO MÍNIMO DE GOLDMAN

Fosfato ácido di potásico 18 g


Fosfato diácido de Potasio 6g
Sulfato de Magnesio 0.02 g
Sulfato diamónico 4g
Etanol 20 mL
Agua destilada. 1000 mL
pH final 7.0
Esterilización a 121ºC por 15 minutos.
Extracto de levaduras al 3%.

MEDIO PALLERONI

Fosfato ácido di sódico 9.37 g


Fosfato diácido de Potasio 8.976 g
Cloruro de Sodio 1.7 g
Cloruro de Amonio. 0.2 g
Sulfato de Magnesio heptahidratado 0.1 g
Citrato amónico férrico 0.01 g
Cloruro de Calcio 0.001 g
Agua destilada 200 mL
pH final 6.8

Esterilización a 121 ºC por 15 min., excepto el Citrato amónico férrico y Cloruro de Calcio el cual se
esteriliza por filtración y se adiciona en condiciones estériles a partir de una solución concentrada.

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8.2 CARACTERÍSTICAS DEL DESTILADO DE CRUDO DE PETRÓLEO A 200 ºC

CUADRO Nº 01

Nº Tiempo Componentes Peso Fórmula %


de molecular
retención (PM)
(TR)
1 1.33 n-pentano 76 C5H12 0.49
2 1.55 n-hexano 86 C6H14 0.77
3 2.07 n-heptano 100 C7H16 0.57
4 2.69 2 metil pentano 72 C6H14 0.64
5 3.17 3 metil hexano 100 C7H14 1.82
6 3.87 1,1,2trimetil 126 C9H28 2.18
7 4.28 ciclohexano 84 C6H12 2.14
8 4.43 1-hexeno 86 C7H16 2.05
9 5.09 2 metil hexano 114 C8H18 7.58
10 7.74 2 etil hexano 114 C11H24 9.52
11 8.28 2 metil decano 156 C12H26 0.38
12 10.76 4 metil decano 128 C9H20 13.17
13 15.83 n-nonano 170 C12H26 5.95
14 16.86 2 metil undecano 142 C10H22 9.39
15 17.79 3,5 dimetil octano 170 C12H26 2.55
16 19.64 2 metil undecano 170 C12H26 8.56
17 22.34 dodecano 184 C13H28 7.86
18 24.88 n-tridecano 198 C14H30 5.09
19 24.88 n-tetradecano 198 C14H30 3.48
20 25.90 tetradecano 198 C14H30 3.90
21 27.30 2 metil tridecano 212 C15H32 3.93
22 29.60 n-pentadecano 212 C15H32 1.37
23 31.80 pentadecano 226 C16H34 1.22
24 33.91 n-hexadecano 240 C17H36 0.96
25 35.94 n-heptadecano 254 C18H38 0.85
26 37.87 n-octadecano 254 C18H38 0.77
27 39.73 octadecano 282 C20H42 0.71
28 41.51 n-eicosano 296 C21H44 0.55
29 43.23 n-heneicosano 310 C22H46 0.43
30 44.89 n-dodocosano 352 C25H52 0.37
31 46.47 n-pentacosano 394 C28H58 0.20
32 48.08 n-octacosano 408 C29H60 0.20
33 49.97 n-nonacosano 422 C30H62 0.20
34 52.22 n-triacontano 450 C32H66 0.10
n-dotriacontano

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INTERPRETACIÓN:

Saturados aciclicos 95.77% (37.38% parafínico)


Saturados cíclico 2.18
Insaturados-olefínico 2.05
Aromáticos 0.00
100.00

PROPIEDADES FISICOQUÍMICAS
GRAVEDAD API A 60º F 19.0

DESTILACIÓN %DESTILADO
Hasta 200 ºC 15
Residuo pesado 85

CONDICIONES CROMATÓGRAFO DE GASES: GC/MS

Columna: Medianamente polar SUPELCO 608


T. Horno: 80 ºC (8,5’); 45 ºC/min hasta 150 ºC (1’) 8 ºC/min hasta 280 ºC (12’)
Injector:. 80 ºC (0,2’); 50 ºC/min hasta 100 ºC (5’); 50 ºC/min hasta 300 ºC hasta el final de
Vol.inj: corrida.
Split: 1,5 µl
Gas arrastre: [50:1]
Helio 20.8psi (1,73 mL/min)

NOTAS:
TR: Tiempo de retención, secuencia en que se separan los componentes en el cromatograma.
PM: Peso molecular

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Gráfico Nº 01:Tiempo de retención en la columna y porcentaje de cada componente del


destilado de crudo.

Gráfico Nº 01: Tiempo de retención en la columna y porcentaje de cada componente del


destilado de crudo.

Grafico N° 01:
Tiempo de retención en la columna y porcentaje de cada componente del destilado de crudo.

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8.3 CARACTERISTICAS DEL SUELO DE CULTIVO.

CUADRO Nº 02

Conductivida Análisis Mecánico pH Carbonat Materia Fósforo Óxido Cationes Cambiables


d (C.E) o de Orgánica P dipotásic
Calcio (M.O) o K2O
CaCO3
Ds/m Arena Limo Arcill Textura P.S % % ppm kg/ha Cationes Ca++ Mg++ K+ Na
P.S* % % a% intercambiabl
es (CIC)
Cmol (+)/kg
1.03 69.45 22.3 8.28 Franco 6.4 0.00 2.6 49.45 585.60 13.72 9.60 3.20 0.46 0.17
Arenoso (0.005% (0.49%) (0.038% (0.0077%) (0.0017%) (0.0004%)
) )
P.S*: Pasta Saturada
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INTERPRETACIÓN:

CONDUCTIVIDAD : C.E. (sales). Según respuesta de los cultivos (dS/m)


Muy ligeramente salino: <2
Ligeramente salino: 2-4
Moderadamente salino: 4-8
Fuertemente salino: 8-16
Extremadamente salino: >16
MATERIA ORGANICA (M.O)
Bajo: < 2%
Medio: 2-4%
Alto: >4%
CALCAREO TOTAL CaCO3%
< 1%
Bajo:
1-5%
Medio:
> 5%
Alto:
FÓSFORO P (ppm) < 7%
Bajo: 7-14%
Medio: >14 %
Alto:
POTASIO K2O (kg/ha)
< 300
Bajo:
300-600
Medio:
> 600
Alto:
REACCION DEL SUELO (pH) 5.1-5.5
Fuertemente ácido:
5.6-6.0
Moderadamente ácido:
6.1-6.5
Ligeramente ácido:
6.6-7.3
Neutro:
7.4-7.8
Ligeramente alcalino:
7.9-8.4
Moderadamente alcalino:
EQUIVALENCIAS
1 dS/m
1 mmhos/cm =
1 me/100g
1 cmol (+) kg =

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8.4 BIODEGRADACIÓN DE CRUDO EN TERRARIOS

FOTO Nº 01

CONSORCIO BACTERIANO EXÓGENO CONSORCIO BACTERIANO


NATIVO

CONTROL ABIÓTICO

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8.5 DETERMINACIÓN DE LA REGRESIÓN MÚLTIPLE POR PASOS CON EL


PROGRAMA SPSS 9.0 WINDOWS.

Gráfico Nº 02. Ingreso de datos al SPSS.

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Gráfico Nº 03. Selección de método de regresión lineal múltiple

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Gráfico Nº 04.Selección de variables y del método de regresión lineal múltiple: Stepwise.

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8.6 ESCALA TURBIDIMÉTRICA MC. FARLAND

Tubo Cloruro de Ácido Millones de


Bario (1%) sulfúrico(1%) m.o/mL
1 0.1 9.9 300
2 0.2 9.8 600
3 0.3 9.7 900
4 0.4 9.6 1200
5 0.5 9.5 1500
6 0.6 9.4 1800
7 0.7 9.3 2100
8 0.8 9.2 2400
9 0.9 9.1 2700
10 1.0 9.0 3000

Fuente: Microbiología de laboratorio (Bradshaw, 1976)

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