La MC es una capa muy flexible y delgada.

Por sí sola no puede, usualmente, sostener a la célula y

necesita una capa adicional más sólida: la Pared Celular (PC). Esta pared es una capa
relativamente rígida que envuelve a la MC, la protege y le da firmeza a la célula.

Lo común es observar bacterias teñidas y secas con una lente de inmersión (100X). En estos
casos usamos aceite de inmersión sobre la preparación a observar. Otro tipo de tinciones son
las Diferenciales. En estos casos usamos procedimientos mediante los cuales no se tiñen del
mismo modo todas las clases de células que conocemos. La tinción de GRAM es un ejemplo de
tinción diferencial. Mediante la misma clasificamos a las bacterias en Gram positivas (violetas)
y Gram negativas (rosadas o rojas). Esta diferencia es debido a que tienen distinta
composición en la Pared Celular.

Tabla l. Características de las células

Característica Procariota Eucariota

Tamaño Pequeño, 0,5 - 2,0 μm Mayor, 2 - 200 μm
Cuerpo Nuclear Sin membrana nuclear, Núcleo Verdadero;
sin mitosis membrana nuclear; mitosis
DNA Molécula única Algunos cromosomas
Organelos Ninguno Mitocondrias, vacuolas
Pared Celular Delgada (péptidoglucano) Gruesa o ausente; dife- rente
químicamente

El proceso de Osmosis permite el paso del agua hacia el interior de la célula; si no fuera por la
resistencia de la pared celular, reventaría el microorganismo. Cuando el medio exterior es
superior en concentración salina, la célula se deshidrata y tenemos el fenómeno de
Plasmólisis.

Pared Celular (PC). Eubacterias.

E. coli tiene una presión interna aproximada de 75 libras/pulgada 2. Para resistir este tipo
de presiones, las bacterias tienen paredes celulares, que también contribuyen a dar forma y
rigidez celular. En el laboratorio usamos la tinción de Gram para clasificar bacterias. La
existencia de Gram positivas y Gram negativas es debido a las diferencias entre estructuras de
las paredes de esos dos grupos (Fig 4 y 5). Las Gram negativas tienen una PC de capas
múltiples bastante compleja, en tanto que la pared en las Gram positivas es más simple, tiene
un solo tipo de molécula y suele ser mucho más gruesa.
Respecto a las Arqueobacterias, pueden ser Gram positivas o Gram negativas; la química
de las paredes celulares difiere en forma importante de las Eubacterias.
En las paredes celulares de las Eubacterias existe una capa que es la responsable principal
de la resistencia de la pared. Esta capa se denomina de PEPTIDOGLUCANOS. Es una
delgada lámina, compuesta de dos derivados de carbohidratos: la N-acetilglucosamina y el
ácido N-acetilmuramíco. Existe también un pequeño número de aminoácidos que constan
fundamentalmente de L-alanina, D-alanina, D-ácido glutámico y ya sea Lisina o ácido
diaminopimélico (DAP). Todos estos constituyentes se conectan entre si para formar lo que se
conoce como una ESTRUCTURA REPETITIVA: EL TETRAPEPTIDO GLUCANO.
La estructura básica es en realidad una delgada lámina en la cual las cadenas de Glucanos,
formadas por los carbohidratos, están conectadas por enlaces peptídicos cruzados formados por
los aminoácidos. Esos cruzamientos le dan resistencia a la estructura. Esos cruzamientos se
presentan de forma diferente en las distintas bacterias y tienen más rigidez cuanto más
completo sea el entrecruzamiento.
La forma de una célula esta determinada por la LONGITUD DE LAS CADENAS DE
PEPTIDOGLUCANO, así como por la forma y el grado del entrecruzamiento de las cadenas.
 Fig 4. Pared celular Gram positiva
Fig 5. Pared celular Gram negative.
Diversidad en Peptidoglucanos.
La estructura de peptidoglucanos está presente únicamente en los procariotas y se
encuentra en la pared de casi todas las especies de este grupo. El carbohidrato ácido N-
acetilmurámico nunca se encuentra en Eucariotas, como tampoco el aminoácido, ácido
diaminopimélico (DAP). Sin embargo, no todos los organismos procarióticos tienen DAP en
sus peptidoglucanos. Este aminoácido está presente en todas las bacterias Gram negativas y
en algunas especies de Gram positivas pero la mayoría de los cocos Gram positivos tienen
lisina en lugar de DAP y pocas de las bacterias Gram positivas presentan otros aminoácidos.
La parte glucano es UNIFORME EN EL MUNDO PROCARIOTA.
Los carbohidratos N-acetilglucosamino y el ácido N-acetilmurámico están unidos con
enlace beta-1,4.
El tetrapéptido de la unidad repetitiva muestra únicamente variación en un aminoácido, la
alteración en lisina-ácido diaminopimélico, pero el ácido D-glutámico en la posición puede ser
hidroxilado en algunos organismos.
Se conocen casi 100 tipos distintos de peptidoglucanos y la máxima variación ocurre en los
puentes de conexión. Además, se pueden encontrar otros aminoácidos, pero nunca se
encuentran aminoácidos de cadena ramificada, aromáticos o que contengan azufre.
En las bacterias Gram positivas casi el 90 % de la pared esta constituida por
peptidoglucanos, aunque otro constituyente aparece en pequeñas cantidades: el ácido teicoico.
En las bacterias Gram negativas únicamente del 5 al 20 % de la pared es de
peptidoglucanos; el resto se encuentra en una capa exterior de la pared, fuera de la capa de
peptidoglucano.
Capa Exterior de la Membrana (Lipopolisacáridos).
Las Gram negativas contienen en la PC una capa externa constituida por
LIPOPOLISACARIDOS. Esta capa es una segunda doble capa lipídica, pero no solamente
contiene fosfolípidos, como la PC, sino que contiene además polisacáridos y proteínas. El
lípido y el polisacárido están unidos íntimamente en la capa externa para formar estructuras
específicas de lipopolisacáridos (LPS) y debido a su presencia, la capa externa recibe el nombre
de capa de lipopolisacáridos o capa LPS.
En el lado interno de la membrana exterior, de algunas bacterias Gram negativas, se
encuentra una lipoproteina compleja (PM = 7200) que parece servir como un ancla entre la
membrana externa y el peptidoglucano.
Una propiedad importante de la capa externa de la MC de muchas bacterias es que suele
ser tóxica para los animales. Las bacterias como Salmonella y Shigella son tóxicas debido a las
propiedades de esa parte de la PC.
Se utiliza el término ENDOTOXINA PARA REFERIRSE A ESTE COMPONENTE
TOXICO de la PC.
Permeabilidad en la Célula Gram negativa. Porinas.
En el polisacárido de las bacterias Gram negativas existen proteínas llamadas PORINAS.
Sirven como canales, en la membrana, por donde entran y salen sustancias de bajo peso
molecular. La mayoría son inespecíficas. Por ejemplo, una porina de E. coli permite el paso de
fosfatos, sulfatos y algunos otros compuestos aniónicos. Otra porina en la misma bacteria, es
específica solamente para péptidos pequeños. Las porinas permiten el paso de sustancias de un
peso molecular máximo igual a 5000.
Así, la membrana exterior es relativamente permeable a pequeñas moléculas hidrofílicas.
Sin embargo, no es permeable a las enzimas o moléculas grandes. Puede tener la capacidad de
retener ciertas enzimas que existen fuera del citoplasma de manera que no salgan por difusión
fuera de la célula. Estas enzimas se encuentran en una región llamada Espacio Periplásmico. El
periplasma de las Gram negativas contiene generalmente tres tipos de proteínas: enzimas
hidrolíticas, cuya función es la degradación inicial de las moléculas 16
 alimenticias; proteínas de enlace, que inician el proceso de transporte de sustratos y
quimiorreceptores, que son proteínas que participan en la respuesta quimiotáctica.
2. Relación de la Estructura de la Pared Celular con la Coloración de Gram. Cuando
realizamos una tinción de Gram se forma un complejo cristal violeta-yodo, insoluble dentro de
la célula, y este complejo es extraído por alcohol de las bacterias Gram negativas pero no de las
positivas. Las Gram positivas tienen paredes celulares muy gruesas que se deshidratan con el
alcohol. Esto produce que se cierren los poros de la pared, evitando que los complejos
insolubles cristal violeta-yodo salgan de las células. En las Gram negativas el solvente se
disuelve fácilmente penetrando al interior y atravesando la capa externa; la delgada capa de
peptidoglucanos no evita el paso de dicho solvente. La Estructura Física de la PC de las
bacterias es lo que define si una bacteria es Gram positiva o negativa.
Osmosis, lisis y protoplastos.
La pared confiere forma e integridad a la célula. La mayoría de los ambientes bacterianos
tienen concentraciones de solutos más bajas que la de la célula (que es aproximadamente 10
mM). El agua pasa de los sitios de baja concentración de solutos a los de alta concentración.
Este proceso lo conocemos como Osmosis. En la clara de huevo, las lágrimas y la saliva
tenemos una enzima llamada LISOZIMA que hidroliza el polisacárido de la PC, en
consecuencia el agua entra en la célula y se produce la LISIS celular.
Si agregamos un soluto exterior, que no penetra en la célula (p.e. sacarosa), y que equilibra
la presión interna de la célula tendremos la formación de un Protoplasto. Las células que
pierden su PC, aunque tengan distinta forma (bacilo o coco) siempre producen un protoplasto
cuando pierden su pared en un medio inadecuado. La mayoría de los microbios no viven sin su
PC, pero los Micoplasmas si lo hacen.
La penicilina y la cicloserina, inhiben la síntesis de nuevo material para la pared celular en
las células en proliferación e inducen con ello la lisis de las células.
Pared Celular en Eucariotas.
Las células animales no contienen paredes celulares, pero las de los vegetales y las de las
algas contienen paredes celulares de estructura rígida y de composición química variable. En
estos organismos la celulosa junto a hemicelulosa y pectina son dominantes como parte de la
PC. A veces en las algas calcáreas o coralinas, aparecen en la pared celular depósitos de
carbonato de calcio. Algunas veces encontramos quitina en la PC.
En las diatomeas, la PC esta compuesta por sílice, a la cual se suman proteínas y
polisacáridos. Debido a la gran resistencia a la descomposición, permanecen intactas durante
largos períodos y constituyen parte de los mejores fósiles de algas. La tierra de diatomeas, un
aditamento de filtro industrial, es un material compuesto de células fósiles de diatomeas.
Los hongos también contienen paredes celulares rígidas. Se parecen a las de las plantas en su
estructura, pero no químicamente. La mayoría no tienen celulosa en su PC. La QUITINA, un
polímero de N-acetilglucosamina, es un constituyente común de las paredes fúngicas.
En el laboratorio de microbiología debemos estudiar detalles específicos de una bacteria para
poder identificarla; estos son usualmente determinados con la ayuda del microscopio óptico,
pero en algunos casos se debe recurrir a la microscopia electrónica. Cuando deseamos estudiar
un cultivo puro, y probar que el mismo es axénico, es aconsejable controlarlo realizando una
tinción o coloración del mismo. La coloración de un microorganismo se realiza a partir de un
medio sólido o líquido. En general, se trabaja a partir de colonias microbianas. En la práctica
existen distintos tipos de tinciones: simples (de un solo colorante); diferenciales (dos
colorantes por lo menos); tinciones de estructuras (endosporas, pared celular, flagelos,
cápsulas, otros) y microquímicas para materiales de reserva (glucógeno, lípidos, volutina,
otras). Para realizarlas debemos seguir el protocolo correspondiente; la más utilizada en
bacteriología es la que tiene como base el trabajo realizado por C. Gram en 1884 y que permitió
la clasificación de las bacterias en dos grupos: Gram positivas y Gram negativas. Existen
modificaciones de esa técnica que conocemos como Tinción de Gram pero en general todas
comprenden los pasos esenciales siguientes:
Una extensión de células, fijadas por el calor sobre un portaobjeto, se tiñe sucesivamente con el
colorante básico cristal violeta y con una solución diluida de yodo-yodurada. La preparación se
trata luego, por unos pocos segundos, con un disolvente orgánico (alcohol o acetona). Las
bacterias Gram positivas resisten la decoloración y permanecen teñidas de un color azul
oscuro-negro; las bacterias Gram negativas son rápida y completamente decoloradas. A
continuación y finalizando la coloración, se utiliza un segundo colorante que termina tiñiendo
exclusivamente a las bacterias decoloradas o sea a las Gram negativas. En estos casos se usa
safranina o fucsina fenicada diluida por unos segundos.
Esta coloración diferencial debe realizarse con células en crecimiento o sea con bacterias
jóvenes. El resultado de la reacción de Gram está condicionado, en cierta medida, al estado
fisiológico de la célula.
Hoy por hoy, no se conoce el verdadero mecanismo preciso de la tinción de Gram.
Lo que si se sabe es que debemos trabajar con células intactas jóvenes y que la presencia de la
pared celular es esencial. Esto es reconocido porque si no existe la pared celular se pierde la
Gram positividad. Con los trabajos de Salton se comenzó a elucidar la importancia de la
constitución de la pared celular en la diferenciación de bacterias Gram positivas y Gram 45
negativas. Lo importante de recordar es que esta tinción tiene importancia para clasificar
procariotas que tienen pared celular; no brinda información taxonómica muy útil cuando se
aplica en hongos u otros tipos de microorganismos, p.e. con son los micoplasmas(organismos
unicelulares insensibles a la penicilina que producen enfermedades en vegetales; que
contaminan los cultivos de tejidos y que son muy pequeños, 0,3-0,9 μm, o sea que son los
organismos celulares más pequeños que se conocen, próximos al límite de resolución del
microscopio óptico). Se dividen por fisión binaria y al no tener pared no sintetizan
peptidoglucanos.