Dogma central de la genética molecular

Rutas de información a través de procesos de

replicación, transcripción y traducción.

El termino Dogma no debe considerarse en

sentido estricto
Metabolismo del RNA

Las moléculas de RNA no solo son portadoras y expresan información genética sino
también actúan como catalizadores.

Con la excepción de los genomas de RNA de ciertos virus, todas las moléculas de
RNA se forman a partir de información contenida en el DNA: transcripción.

3 clases principales de RNA:

- RNA mensajero (mRNA): secuencias que codifican para aminoácidos de uno o más
polipéptidos codificados en un gen o conjunto de genes en un cromosoma

- RNA de transferencia (tRNA): adaptador que lee la secuencia codificada en el mRNA

y transfiere el aminoácido adecuado a la cadena polipeptídica en crecimiento durante
la síntesis proteica.

- RNA ribosómico (rRNA): se asocia con proteínas para formar la maquinaria de

síntesis proteica, conjunto denominado ribosoma.

Diferencias entre replicación y transcripción:

Replicación: se copia el cromosoma entero para dar origen al DNA hijo que es
idéntico al DNA parental.

Transcripción: Selectiva; se transcribe sólo el DNA de un gen(es) determinado(s),

correspondiente a la información celular necesaria en un momento cualquiera.
Síntesis de RNA dependiente de DNA

El RNA es sintetizado por RNA polimerasas

dirigidas por DNA

Requiere: DNA templado, ribonucleótidos

(ATP, GTP, UTP y CTP), además de Mg2+ (Zn2+)

No requiere cebador (primer), pero la

transcripción se inicia solo en secuencias
denominadas promotores
Resumen de la
síntesis del RNA en
eucariontes
Síntesis de RNA dependiente de DNA

Formación de superenrollamientos producto de la apertura de la hebra de DNA;

Topoisomerasa

La velocidad de síntesis es -> 50 nucleótidos por segundo

Síntesis de RNA dependiente de DNA

Transcripción de las dos hebras de DNA

Estructura de la RNA polimerasa de E. coli

Única RNA polimerasa que sintetiza todos los

RNAs

Complejo grande de 5 subunidades aabb ’w y

subunidad s (Mr 390.000)

Subunidad s se une transitoriamente al núcleo

y dirige la síntesis de RNA a regiones
específicas

RNA polimerasa carece de actividad

exonucleasa 3’ -> 5’ (un error cada 104 – 105
nucleótidos)

DNA polimerasa un error cada 109 – 1010 nucleótidos.

Si el genoma de E coli = 4.7 x 106 pb => un error por cada 1000 a 10.000 replicaciones
La síntesis del RNA se inicia en promotores

Dos elementos importantes en

promotores procariontes:

UP element: Upstream control

element

Core promoter (-35 a -10)

-10 Region: Caja Pribnow (David

Pribnow, 1975)
La síntesis del RNA se inicia en promotores
La síntesis del RNA termina en región de poli-A

Modelo del término de la trascripción

independiente de r en E. coli

- La región poli-U es sintetizada por la RNA

polimerasa

- El apareamiento intramolecular de
secuencias complementarias forma una
horquilla que destruye parte del híbrido RNA-
DNA

- La región restante (A – U) es relativamente

inestable y permite que el RNA se disocie
completamente

GGGTCGGGCGGATTACTCCGCCCAAAAAAAACTTGTTTT
Los intrones transcritos en el RNA se eliminan
por corte y empalme (splicing)

Definición de la estructura del gen de ovoalbumina

(gallina) mediante hibridización.

Híbrido mRNA maduro con DNA desnaturalizado

que contiene al gen de ovoalbumina.

Note efecto del splicing en regiones no hibridadas.

Horquillas definen la localización y el tamaño de

los intrones (regiones A-G). Exones numerados.
Los intrones transcritos en el RNA se eliminan
por corte y empalme (splicing)

4 clases de intrones:

Grupo I: genes nucleares, mitocondriales y

cloroplastos que codifican rRNA.

Grupo II: Transcritos primarios de mRNA de

mitocondrias y cloroplastos.

Grupos I y II no necesitan cofactores de alta

energía (ej. ATP) -> transesterificacion.

Grupo III: transcritos primarios de mRNA nuclear

(grupo mas numeroso).

Grupo IV: principalmente en tRNA. Requiere de

ATP y de una endonucleasa.
Mecanismo de splicing en intrones del grupo I (requerimiento exógeno
de nucleósido o nucleótido de Guanina: autocorte y empalme)

Grupo I: genes nucleares, mitocondriales

y cloroplastos que codifican rRNA
(transesterificacion utiliza el 3’OH de
guanina).
Mecanismo de splicing en intrones del grupo I (requerimiento exógeno
de nucleósido o nucleótido de Guanina: autocorte y empalme)

Grupo I: genes nucleares, mitocondriales

y cloroplastos que codifican rRNA
(transesterificacion utiliza el 3’OH de
guanina).
Mecanismo de splicing en intrones
del grupo II (adenilato dentro del
intrón: autocorte y empalme)

Grupo II: Transcritos primarios de mRNA

de mitocondrias y cloroplastos.

Estructura de lazo.
Mecanismo de splicing en intrones del grupo III

Grupo III: transcritos primarios de mRNA nuclear (grupo mas numeroso).

Idéntico mecanismo a intrones del grupo II (formación de lazo); sin embargo no experimentan autocorte y empalme.

El splicing (corte y empalme) requiere de la participación de complejos RNA y proteínas especializados que contienen
moléculas de snRNA (small nuclear RNA o RNA nuclear pequeño).

Intervienen 5 snRNA: U1, U2, U4, U5 y U6, los cuales forman complejos con proteínas denominados
ribonucleoproteínas (snRNP).

Utilizan secuencias altamente conservadas en el limite intrón - exón.

Spliceosoma: snRNP U1 + snRNP U2, U4, U5, U6

Mecanismo de splicing en intrones del grupo III
Maduración del RNA

Formación del transcrito primario y su

modificación durante la maduración del
mRNA en una célula eucariótica.

El casquete 5’ se añade antes de que

se complete la síntesis del transcrito
primario.

La poliadenilación ocurre
principalmente luego del splicing.

Todos los procesos ocurren en el

núcleo.
 Los mRNA eucarióticos experimentan modificaciones adicionales: casquete 5’ (capping)

Levaduras: carecen del

grupo 2’-metilo.

2do grupo metilo se

encuentra generalmente
solo en vertebrados

adoMet: adenosilMetionina
adoHcy: S-adenosilhomocysteina
Los mRNA eucarióticos experimentan modificaciones adicionales: poliadenilación (poli-A)

Adición de cola poli(A) al transcrito

primario de RNA de eucariotas.

La RNA polimerasa sintetiza más allá del

segmento que contiene la información del
sitio de corte (5’-AAUAAA).

a. Complejo entre endonucleasa y

poliadenilato polimerasa se fijan a esta
secuencia señal.

b. El RNA es cortado de 11 a 30 nt por el

lado 3’ de la señal AAUAAA.

c. La poliadenilato polimerasa sintetiza

una cola de 20 a 250 nt empezando con el
sitio de corte.
Maduración del RNA (resumen)
Maduración diferencial del RNA da origen a múltiples productos a partir de un gen:
Poliadenilacion y/o splicing alternativos
Maduración diferencial del RNA da origen a múltiples productos a partir de un gen:
Poliadenilacion y/o splicing alternativos

Maduración diferencial del

transcrito del gen de
Calcitonina en ratas