EXTRACCIÓN Y SEPARACIÓN POR CROMATOGRAFIA DE LÍPIDOS CAROTENOS

EN LA AUYAMA (CUCURBITA MÁXIMA).

HERRERA, B. O. A.; osaherrerab@correo.udistrital.edu.co
OLAYA, L.K.; klolayal@correo.udistrital.edu.co
PULGARIN, A. A; apulgarina@correo.udistrital.edu.co
Universidad Distrital Francisco José de Caldas
(Septiembre del 2018, Bogotá D. C.)
RESUMEN
En esta práctica se podrá hallar la definición de lípidos, su composición entre otras cosas, incluso
se puede encontrar algunos de los métodos utilizados en el análisis y separación. Podemos
encontrar la definición de terpenos, y más a fondo podremos comprender el objeto de estudio de
este laboratorio cuyos personajes principales son los carotenos, un tipo de tetraterpenos que
constituyen el color de la auyama como su fuente nutrimental de aporte en vitaminas.
Para la extracción y separación de los carotenos en la auyama se utilizaron 10 gramos de auyama
los cuales se picaron y se maceraron, se les extrajeron los pigmentos con alcohol al 95% hasta dejar
la auyama incolora. Después para hacer la separación de carotenos y xantofilas se utilizó un
embudo en el cual se lavó la solución y en la fase acuosa quedaron las xantofilas y en la orgánica
los carotenos.
A lo último se utilizó un capilar para cultivarlos en una placa de cromatografía las muestras de
carotenos lo cual nos arrojó dos tipos de carotenos encontrados en la muestra de auyama (Cucúrbita
máxima).
PALABRAS CLAVES: Cromatografía, Lípidos, Carotenos, Auyama.
ABSTRACT
In this practice you can find the definition of lipids, its composition among other things, you can
even find some of the methods used in the analysis and separation. We can find the definition of
terpenes, and more thoroughly we can understand the object of study of this laboratory whose main
characters are the carotenes, a type of tetraterpenes that constitute the color of the pumpkin as its
nutritional source of vitamin contribution.
For the extraction and separation of the carotenes in the pump, 10 grams of pumpkin were used,
which were chopped and macerated, the pigments were extracted with 95% alcohol until the
colorless spike was left. Later to make the separation of carotenoids and xanthophylls, a funnel was
used in which the solution was washed and in the aqueous phase the xanthophylls remained and in
the organic the carotenoids.
At the end, a capillary was used to grow the samples of carotenoids on a chromatography plate,
which yielded two types of carotenes found in the auyama sample (Cucurbit máxima).
KEYWORDS: Chromatography, Lipids, Carotenes, Auyama.
 OBJETIVOS
 Extraer por medio de disolventes orgánicos
los pigmentos naturales de la auyama más
concretamente los carotenos para dar por
ultimo un análisis de los carotenos
encontrados y su identificación, esto con
ayuda de técnicas de cromatografía.
INTRODUCCIÓN
Lípidos
Los lípidos biológicos constituyen un grupo
químicamente diverso de compuestos cuyas
características común y definitoria es su
insolubilidad en agua. Sus funciones son
diversas
Lípidos de almacenamiento: Las grasas y
aceites [ácidos carboxílicos con cadenas
hidrocarbonadas de 4-36 carbonos (en
algunos completamente saturada sin dobles
enlaces y sin ramificar y otros con uno o
varios dobles enlaces); unos cuantos
contienen anillos de 3 carbonos o grupos
hidroxilo] son derivados de los ácidos grasos
y sirven de almacenamiento de energía.1
Las propiedades físicas de los ácidos grasos y
de los compuestos que los contienen vienen
determinadas en gran parte por la longitud y
grado de instauración de la cadena
hidrocarbonada. La cadena hidrocarbonada
apolar explica la poca solubilidad de ácidos
grasos enagua. Cuanto más larga sea la
cadena a cíclica grasa y el menor número de
dobles enlaces, menor es la solubilidad del
agua. El grupo ácido carboxílico es polar (y
ioniza a pH neutro) y justifica la ligera
solubilidad en agua de los ácidos grasos de
cadena corta.
1 2
Química Biológica. (n.d.). In: Química Biológica, 3rd ed.
Argentina: Facultad de Ciencias Naturales.
Triacilgliceroles simples: Mismo tipo de
ácido graso en las 3 posiciones y se
denominan según el ácido graso que
contienen.
Triacilgliceroles mixtos: 2 o más ácidos
grasos diferentes. Se especifica el nombre y
posición de cada ácido graso.
La mayoría de las grasas naturales como los
sencillos y mixtos. Estos últimos contienen
diversos ácidos grasos que difieren en la
longitud de cadena y grado de saturación. Los
aceites vegetales están compuestos
mayoritariamente de triacilgliceroles
conocidos grasos insaturados, por lo que son
líquidos a temperatura ambiente; se
convierten industrialmente engrasas sólidas
por hidrogenación catalítica que reduce
algunos de sus dobles enlaces a sencillos. Los
triacilgliceroles que solo contienen ácidos
grasos saturados son sólidos blancos y grasos
a temperatura ambiente.2
Lípidos estructurales de las membranas: La
característica arquitectónica central de las
membranas biológicas es una doble capa
lipídica que constituye una barrera al paso de
moléculas polares e iones. Los lípidos de las
membranas son antipáticos; la orientación de
sus regiones hidrofóbicas e hidrofílicas dirige
su empaquetamiento hacia la formación de
bicapas membranosas. Tipos generales de
lípidos de las membranas:
• Glicerofosfolípidos: Regiones
hidrofóbicas compuestas por 2 ácidos grasos
unidos al glicerol.
• Esfingolípidos: Se une un solo ácido
graso a una amina grasa, la esfingosina
Losada alvares, L. (2016). Acidos grasos alteraciones e
importancia nutricional. españa.
• Esteroles: Sistema rígido de 4 anillos
hidrocarbonados fusionados3
Los glicerofosfolípidos, esfingolípidos y
esteroles son virtualmente insolubles en agua
ya que cuando se mezclan con ella, estos
compuestos antipáticos forman agregados
lipídicos microscópicos en una fase separada
de su entorno acuoso. Las moléculas lipídicas
se agrupan con sus porciones hidrofóbicas en
contacto entre sí y sus grupos hidrofílicos
interaccionando con el agua circundante. El
agrupamiento de los lípidos reduce la
cantidad de superficie hidrofóbica expuesta al
agua, con lo que se minimiza el número de
moléculas en la capa de agua ordenada en la
interface lípido-agua, lo que se traduce en un
aumento de entropía. Las interacciones
hidrofóbicas entre las moléculas lipídicas
proporcionan la fuerza termodinámica motriz
para la formación y mantenimiento de estas
estructuras.4
Terpenos
Se denominan así a cada uno de los
hidrocarburos saturados o insaturados que se
consideran constituidos formalmente por
unidades sucesivas de isopreno (C5H8), y que
se hallan muy difundidos en los reinos animal
y vegetal, sobre todo en forma de derivados
oxigenados (alcoholes, aldehídos, cetonas,
ácidos carboxílicos y ésteres), denominados
también terpenoides. Las unidades pueden
arreglarse linealmente (como en el escualeno)
o cíclicamente (como en la limonina). Dentro
de los terpenos se clasifica a los carotenoides
que son tetraterpenos muy importantes en los
mamíferos. Los terpenos de bajo peso
molecular se encuentran sobre todo como
3TREJOS TREJOS, M., INFANTE CELY, J. and LOPEZ
ARCILA, C. (2002). La membrana plasmática (La relación
Estructura - Funcion).
componentes de los aceites esenciales, los
que se obtienen de las flores, hojas o frutos,
mediante destilación con vapor de agua;
mientras que los de peso molecular medio o
alto, constituyen el esqueleto de los
esteroides, los carotenoides y el caucho.
Tomando como unidad terpeno la de diez
átomos de carbono, se ha desarrollado la
siguiente clasificación:
• Monoterpenos: formados por dos unidades
de isopreno (diez átomos de carbono).
• Sesquiterpenos: formados por tres unidades
de isopreno (quince átomos de carbono).
• Diterpenos: formados por cuatro unidades
de isopreno (veinte átomos de carbono).
• Triterpenos: formados por seis unidades
deisopreno (treinta átomos de carbono).
• Tetraterpenos: formados por ocho
unidades de isopreno (cuarenta átomos de
carbono).5
Carotenoides
El término carotenoides designa a
compuestos isoprenoides (tetraterpenos)
generalmente de 40 carbonos. Su estructura
básica es lineal, simétrica e invertida en el
centro, y puede estar modificada mediante
hidrogenación, deshidrogenación, ciclación,
isomerización, oxigenación, etc., dando lugar
a una gran variedad de estructuras (figura 1)
Presentan como característica estructural un
sistema con esquema general de la ruta
biosintética de carotenoides jugado de dobles
enlaces. Este grupo cromóforo es el
responsable de que los carotenoides absorban
4 Torres García, J. and Durán Agüero, S. (2018).
Fosfolípidos: propiedades y efectos sobre la salud. Nutr
Hosp. 2015;31(1):76-83.
5 Pasto D.J. y C.R. Jhonson. “Estructuras Orgánicas”. Ed.
Reverté, 1974
energía lumínica en la región visible del
espectro y por tanto de su fuerte capacidad
colorante. La longitud de onda máxima a la
que absorben dependerá, entre otros factores,
del número de dobles enlaces conjugados y de
la existencia de anillos cerrados en la
molécula.6
Figura 1
Son pigmentos liposolubles de origen vegetal
que están presentes en el organismo humano,
el cual no los sintetiza de novo y los obtiene
apartir de la dieta. La principal actividad de
estos compuestos en las plantas es la foto
protección del sistema fotosintético, y en el
organismo humano destaca, entre otras, la
actividad pro vitamínica A. Esta actividad es
la única función reconocida de los
6 Zechmeister, L. Cis-trans isomeric carotenoids and
arylpolyenes. Academic Press, New York, 1962.
7 Institute of Medicine, Food and Nutrition Board. Beta-
carotene and other carotenoids. Dietary reference intakes
for vitamin C, vitamin E, selenium, and carotenoids.
Washington, D.C.: National Academy Press; 2000.
8Rao A, Rao L. Carotenoids and human health. Pharmacol
Res 2007.
carotenoides.7 Siendo el β-caroteno, de entre
los que poseen dicha capacidad, el que por su
estructura tiene un mejor rendimiento en
retinol. Además, estos compuestos pueden
ejercer otras actividades de importancia en la
salud humana, como son la antioxidante.8
Son compuestos presentes en diversas
estructuras de plantas y en gran variedad de
animales, algas, hongos y bacterias. Estos
pigmentos son responsables del color de
flores y frutos (para favorecer la polinización
y dispersión de semillas), o de estructuras
animales como las plumas y picos de algunos
pájaros, el exoesqueleto de crustáceos y el
músculo o la piel de algunos peces.9
Además representan una fuente de
provitamina A, con actividad antioxidante en
la célula al actuar en la neutralización de
especies reactivas de oxígeno y nitrógeno
producidas como parte del metabolismo
celular.10
MATERIAL
 Bisturí
 Probeta
 matraces Erlenmeyer
 1 agitador de vidrio
 1 espátula
 Pinzas de 3 dedos
 Soporte universal
 Vidrio de reloj
 Pipita volumétrica 10 ml
 vasos de precipitado
 Embudo de separación
9 Meléndez-Martínez AJ Vicario I, Heredia FJ, Pigmentos
carotenoides: consideraciones estructurales y
fisicoquímicas, Archivos Latinoamericanos de Nutrición.
10
Carranco Jáuregui ME, Calvo Carrillo MC, Pérez-Gil
Romo F, Carotenoides y su función antioxidante: Revisión.
Archivos Latinoamericanos De Nutrición.
 Pipeta Pasteur B) SEPARACION DE CAROTENOIDES
 Vial ámbar 1) Sembrar con capilar los carotenos en
Reactivos placa de cromatografía.
 Etanol 2) Introducir la placa con carotenos en vaso
 Agua destilada con acetona y éter 95:5 y tapar hasta que
 Éter de petróleo la placa con el sembrado de carotenos
 Alúmina reaccione y muestre la presencia de
carotenos.
 Acetona
3) Observación de carotenos y análisis de
Material biológico RF.
 10 gramos de auyama RESULTADOS
Equipo A) Extracción y separación de carotenos
 Parrilla de calentamiento
 Bascula
METODOLOGÍA
A) EXTRACCION Y SEPARACION DE
CAROTENOS
1) Picar 10 gramos de Auyama
perfectamente, extraer los pigmentos con
25 ml de alcohol al 95%, caliente en un
matraz de 100 ml (la muestra debe quedar
incolora). Y calentarlo a 78° C.
1. Picado de 10 gramos de Auyama.
2) Re extraer con otros 25 ml de alcohol y
reunir los extractos.
3) Calentar la solución amarilla y diluir
aproximadamente al 85% de alcohol con
H₂O, enfriar a temperatura ambiente
(agregar 9 ml de H₂O).
4) Agitar la solución en un embudo de
separación con25 ml de éter de petróleo,
permitir reposo para que se separe en 2
capas, la superior de éter que lleva los
carotenos y la inferior las xantofilas.
5) Separar y guardar la capa superior.
6) Volver la capa inferior al embudo y lavar 1. Auyama casi incolora luego de extraer en
con 2 porciones sucesivas de 10 ml c/u de alcohol.
éter de petróleo.
7) Combinar los extractos de éter de petróleo
y lávalos con 10 ml de alcohol al 85%
para quitar las xantofilas.
1. Extracción de pigmentos
3. Calentamiento de la solución amarilla.

4. Agitado de la solución y agregado de éter

de petróleo hasta conseguir una solución
heterogénea.

2. Re extracción de pigmentos con papel

embudo.

4. Separación de carotenos y xantofilas, capa

superior carotenos, inferior xantofilas.
 1) Sembrado con capilar de carotenos en
5. Separación y guardado de capas. columna de cromatografía.

2) Introducción de la columna de
6. recombinación para una completa
cromatografía con carotenos sembrados
extracción.
en vaso con solución de éter y acetona
95:5 para identificar presencia de
carotenos.

7. Combinación de extractos de éter de

petróleo con lavados con 10 ml de alcohol al
85% para quitado completo de xantofilas.
B) Separación de carotenoides
3) Observación de carotenos
 formación de dos capas, en la que la capa
superior contiene el éter de petróleo con los
=C
carotenos, puesto que estos al ser de tipo no
=B polar se combinaron con el éter para lograr su
separación, y por medio de lavados se logró
=A
la separación de xantofilas y posterior a esto
la eliminación de estas, pues el producto de
interés son los carotenos.
La temperatura afecta la volatilidad y la
3) Análisis de RF. solubilidad de los solventes, por lo tanto debe
DISCUSIÓN DE RESULTADOS mantenerse constante a lo largo de la
operación y debe ser homogénea en todo el
Todas las sustancias utilizadas en la proceso.12
extracción tienen un grado de solubilidad
diferente en solvente apolares, debido a esta Durante la realización del laboratorio se
situación es posible realizar la extracción. omitio un paso, el cual consistia en
calentamiento de la solución eter-carotenos,
por peticion de la directora de clase, por lo
Compuesto Polaridad
cual se discurre que pudo haber sido un
motivo para que la tinción de los carotenos en
Eter de petroleo No polar la columna no sea lo bastante notable.
Basándonos en los resultados concretos
Alcohol Polar obtenidos comprendemos que la extracción
de estos carotenos tuvo éxito, ya que se logró
el objetivo final.13
Solución con carotenos de No Polar
auyama
CONCLUSIONES
Tabla 1. Polaridad de compuestos Por medio de esta práctica logramos extraer
utilizados. los carotenos de la auyama, estos junto con
Inicialmente se debe proceder a agregar un las xantofilas son los encargados de brindarle
solvente no polar como el eter de petróleo un color naranja a las auyamas ya que son los
para lograr una efectiva elución y que se pigmentos vegetales que las constituyen. Sin
puedan remover compuestos relativamente embargo para esta práctica solo buscamos
poco polares.11 sacar los carotenos para su análisis, entonces
Por lo demostrado en la tabla 1 podemos por ayuda de las técnicas de cromatografía
analizar la forma en la que se efectúa la buscamos encontrar los tipos de carotenos
obtención de los carotenos, pues cuando se le que se encuentran en las auyamas, y así dar
agregó el éter de petróleo a la solución con un análisis a estos.
carotenos de auyama macerada se notó la
11Farmacognosia 2017 – FCN - UNPSJB - Dra. María
Luján Flores – Unidad 2 – Cromatografía 13Farmacognosia 2017 – FCN - UNPSJB - Dra. María
Luján Flores – Unidad 2 – Cromatografía
12Farmacognosia 2017 – FCN - UNPSJB - Dra. María
Luján Flores – Unidad 2 – Cromatografía
En la muestra de auyama pudimos encontrar y los diferentes tejidos (hígado, riñón,
dos tipos de carotenoides β-caroteno (0,21) y glándulas renales, testículos, ovarios y
Licopeno (0.57), encargados de darle esa próstata).17
coloración a la auyama. Pudimos llegar a esta
conclusión tomando los dos puntos de
referencia que se mostraron en la placa de
cromatografía y dividiéndolos por la longitud
final de la muestra, es decir la línea roja.
𝐴 𝐵
&
𝐶 𝐶

Cuyos resultados fueron:

𝐴 0.7
= = 0.21 (𝛽 − 𝑐𝑎𝑟𝑜𝑡𝑒𝑛𝑜)
𝐶 3.3
𝐵 1.9
= = 0.57 (𝐿𝑖𝑐𝑜𝑝𝑒𝑛𝑜)
𝐶 3.3

Β-caroteno es la principal fuente de vitamina

A segura, esencial para el crecimiento y
desarrollo del funcionamiento de sistema
inmunitario y la vista,14 tiene propiedades
antioxidantes que pueden ayudar a neutralizar
los radicales libres, moléculas reactivas del
oxígeno que pueden dañar los lípidos de las
membranas celulares y el material genético,
lo cual puede conducir al desarrollo de
enfermedades cardiovasculares y cáncer.15
Una de las funciones del licopeno y otros
compuestos relacionados con los
carotenoides es la de absorber la luz durante
la fotosíntesis, protegiendo a la planta contra
la fotosensibilización.16 Además de estar
presente en los alimentos, el licopeno es uno
de los carotenoides que se encuentra
distribuido en mayores cantidades en el suero
humano (21- 43% de los carotenoides totales)
14 16
Institute of Medicine, Food and Nutrition Board. Beta- Vitale A, Bernatene E, Pomilio A. Carotenoides en
carotene and other carotenoids. Dietary reference intakes quimioprevención: licopeno. Acta Bioquim Clin Latinoam
for vitamin C, vitamin E, selenium, and carotenoids. 2010.
Washington, D.C.: National Academy Press; 2000
15Pavia SA, Russell RM. Beta-carotene and other 17 Waliszewski K, Blasco G. Propiedades nutracéuticas del
carotenoids as antioxidants. J Am Coll Nutr 1999. licopeno. Salud Pública Mex 2010.