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Historia de la microbiología
En 1676 Antón van Leeuwenhoek, el cual usando un microscopio de una sola lente que él
mismo había construido basado en el modelo creado por el erudito Robert Hooke en su libro
“Micrografía", Leeuwenhoek fue capaz de realizar la primera observación microbiológica en
gotas de agua sucia, observó gran cantidad de microorganismos con movimiento a los que
llamo "animáculos“.
Beneficios de la microbiología
Algunas aplicaciones de la biotecnología para la mejora del medio ambiente son las siguientes:
Los seres vivos presentan una serie de características comunes y una enorme diversidad
de formas.
Su composición química, su organización celular y sus funciones de nutrición, relación y
reproducción son características comunes a todos ellos, si bien para llevarlas a cabo
disponen de gran diversidad de estructuras que son resultado de otra característica
común, su capacidad de adaptación y por tanto de evolución. Es decir, la diversidad, es
una característica más de la materia viva, como lo es su unidad.
El estudio de los seres vivos se puede basar en sus características (composición,
organización y funciones), pero también en considerar los niveles de organización de la
materia viva que se corresponden con los grados de complejidad creciente: molecular,
celular, pluricelular y de poblaciones
NIVELES DE ORGANIZACIÓN DE LOS SERES VIVOS
Molécula inorgánica binaria, compuesta por dos átomos de hidrógeno y uno de oxígeno
por medio de 2 enlaces covalentes. El ángulo entre los enlaces H-O-H es de 104.5 ° la
molécula de agua tiene una carga total neutra. El término agua, se refiere a la sustancia
en su estado líquido, pero la misma puede hallarse en su forma sólida llamada hielo, y
en forma gaseosa denominada vapor.
El agua en la atmosfera
El agua cubre el 71% de la superficie de la corteza terrestre. Se localiza en los océanos donde
se concentra el 96,5% de agua salada, solo el 3.5 % es dulce. De este ultimo porcentaje solo es
consumible el 1 %, los glaciares y casquetes polares poseen el 1,74%, los depósitos
subterráneos (acuíferos) los glaciares continentales suponen el 1,72% y el restante 0,04% se
reparte en orden decreciente entre lagos, humedad del suelo, embalses, ríos y seres vivos.El
agua en la atmosfera se encuentra formando nubes en un 0.001%
Ciclo del agua: De los diversos ciclos de la materia, el del agua es el de mayor cantidad de
materia y consta de 4 partes: Evaporación, Condensación, Precipitación, Escurrimiento.
Condensación: Una vez que el agua en estado gaseoso se eleva, se encuentra con corrientes
frías de aire y se condensa formando pequeñas gotas de agua.
Poder disolvente. El agua es el líquido que más sustancias disuelve, razón por lo que se dice
disolvente universal, esta propiedad es la más importante para la vida, se debe a su capacidad
para formar puentes de hidrogeno. En el caso de las disoluciones iónicas los iones de las sales
son atraídos por los dipolos del agua, quedando atrapados y recubiertas de moléculas de agua
en forma de iones hidratados o solvatados. Las sustancias que se mezclan y se disuelven en el
agua como sales, azucares se llaman hidrófilas y las que no se combinan bien con el agua son
hidrófobas como lípidos y grasas.
Debido a la existencia de puentes de hidrógeno.
Elevada tensión superficial. Esto quiere decir que la superficie ofrece resistencia a romperse
y actúa como una membrana elástica.
Elevado calor específico. Cuando se aplica calor al agua, parte de la energía comunicada se
emplea en romper los puentes de hidrógeno. El agua tiene una función termorreguladora, es
decir, mantiene estable la temperatura corporal.
Elevado calor de vaporización. Para pasar del estado líquido al gaseoso es necesario que los
puentes de hidrógeno se rompan, luego dotar a las moléculas de agua de energía cinética. Para
evaporar un gramo de agua se precisan 540 calorías, a una temperatura de 20 °C y presión de
una atmosfera.
CARBOHIDRATOS
Son moléculas orgánicas compuestos por átomos de carbono e hidrogeno y en menor cantidad
de oxigeno unidos por enlaces químicos covalentes que son difíciles de romper. Los
carbohidratos son los compuestos orgánicos más abundantes de la biosfera y a su vez los más
diversos. Se encuentra en las partes estructurales de los vegetales y también en los tejidos
animales, como glucosa o glucógeno. Estos sirven como fuente de energía para todas las
actividades celulares vitales.
Energética. Los carbohidratos aportan 4 K Cal gramo de peso seco, esto es, sin considerar el
contenido de agua que pueda tener el alimento en el cual se encuentra el carbohidrato.
Cubiertas las necesidades energéticas, una pequeña parte se almacena en el hígado y músculos
como glucógeno (normalmente no más de 0,5% del peso del individuo), el resto se transforma
en grasas y se acumula en el organismo como tejido adiposo.
Los carbohidratos simples: son los monosacáridos, entre los cuales podemos mencionar la
glucosa, la fructosa, galactosa que son los responsables del sabor dulce de muchos frutos y los
disacáridos como la sacarosa, lactosa y maltosa.
Los carbohidratos complejos: son los polisacáridos; formas complejas de múltiples molécula,
entre ellos se encuentran la celulosa que forma la pared y el sostén de los vegetales; el almidón
presente en tubérculos como la patata y el glucógeno en los músculos e hígado de animales.
Disacáridos. Los disacáridos son glúcidos formados por dos moléculas de monosacáridos y se
unen mediante un enlace covalente conocido como glucosidico, por tanto al hidrolizarse
producen 2 monosacáridos libres. Cuya fórmula es: C12H22O11 y se clasifica en:
Sacarosa: Glucosa + fructosa.
Lactosa: Glucosa + galactosa.
Maltosa: Glucosa + glucosa.
Celobiosa: Glucosa + glucosa se obtiene por hidrólisis de la celulosa, no se encuentra en la
naturaleza.
Polisacáridos. Son polímeros, cuyos monómeros constituyentes son monosacáridos, los cuales
se unen repetitivamente mediante enlaces glucosídicos. Estos compuestos llegan a tener un
peso molecular muy elevado, que depende del número de residuos o unidades de
monosacáridos que participen en su estructura. Los polisacáridos pueden descomponerse, por
hidrólisis de los enlaces glucosídicos, en polisacáridos más pequeños, así como en disacáridos
y monosacáridos. Las glucosidasas que digieren los polisacáridos, que pueden llamarse
polisacarasas, rompen en general uno de cada dos enlaces, liberando así disacáridos y dejando
que otras enzimas completen luego el trabajo.
Almacenamiento y de estructura.
LIPIDOS
Los lípidos son biomoléculas muy diversas; unos están formados por cadenas
alifáticas saturadas o insaturadas, en general lineales, pero algunos tienen anillos
(aromáticos).
Algunos son flexibles, mientras que otros son rígidos o semiflexibles.
La mayoría de los lípidos tiene algún tipo de carácter polar, además de poseer una
gran parte apolar o hidrofóbico ("que le teme al agua" o "rechaza al agua"), lo que
significa que no interactúa bien con solventes polares como el agua.
Otra parte de su estructura es polar o hidrofílica ("que ama el agua" o "que tiene
afinidad por el agua") y tenderá a asociarse con solventes polares como el agua;
cuando una molécula tiene una región hidrófoba y otra hidrófila se dice que tiene
carácter anfipático.
La región hidrófoba de los lípidos es la que
presenta solo átomos de carbono unidos a
átomos de hidrógeno, como la larga "cola"
alifática de los ácidos grasos o los anillos de
esterano del colesterol; la región hidrófila es
la que posee grupos polares o con cargas
eléctricas, como el hidroxilo (–OH) del
colesterol, el carboxilo (–COO–) de los ácidos
grasos, el fosfato (–PO4–) de los fosfolípidos.
Lípidos saponificables: Los lípidos saponificables son los lípidos que contienen ácidos grasos en
su molécula y producen reacciones químicas de saponificación.
LÍPIDOS SIMPLES. Son lípidos saponificables en cuya composición química sólo intervienen
carbono, hidrógeno y oxígeno.
LÍPIDOS COMPLEJOS. Son los lípidos que, además de contener en su molécula carbono,
hidrógeno y oxígeno, contienen otros elementos como nitrógeno, fósforo, azufre u otra
biomolécula como un glúcido. A los lípidos complejos también se les llama lípidos de
membrana pues son las principales moléculas que forman las membranas celulares. Son
moléculas anfipáticas.
Esteroides: los esteroides son lípidos que derivan del esterano. Comprenden dos grandes
grupos de sustancias:
Esteroles: Como el colesterol y las vitaminas D (antirraquítica), rayos solares, lácteos.
Hormonas esteroideas: Como las hormonas suprarrenales y las hormonas sexuales.
El colesterol forma parte estructural de las membranas a las que confiere estabilidad. Es la
molécula base que sirve para la síntesis de casi todos los esteroides.
Hormonas sexuales: entre las hormonas sexuales se encuentran la progesterona que prepara
los órganos sexuales femeninos para la gestación y la testosterona responsable de los
caracteres sexuales masculinos. Hormonas suprarrenales: entre las hormonas suprarrenales
se encuentra la cortisona, que actúa en el metabolismo de los glúcidos, regulando la síntesis
de glucógeno.
Prostaglandinas: las prostaglandinas son lípidos cuya molécula básica está constituida por 20
átomos de carbono que forman un anillo ciclo pentano y dos cadenas alifáticas.
Las funciones son diversas. Entre ellas destaca la producción de sustancias que regulan la
coagulación de la sangre y cierre de las heridas; la aparición de la fiebre como defensa de las
infecciones; la reducción de la secreción de jugos gástricos. Funcionan como hormonas
locales.
Feromonas. Son partículas químicas de origen natural secretadas por los insectos, los
animales y las personas cuya única finalidad es la de atraer la atención del sexo opuesto. En
el caso de los animales, estos utilizan a las feromonas para demarcar territorio, como fuerte
efecto llamada al sexo opuesto con el fin de manifestar su disposición sexual y aparearse. El
efecto que tiene es tan fuerte, que incluso se han utilizado feromonas sintéticas como
trampa en agricultura para atraer y cazar a insectos sin contaminar a los vegetales. Es un
método efectivo y seguro para el medio ambiente.
Un aminoácido es una molécula orgánica con un grupo amino (-NH2) y un grupo carboxílico (-
COOH; ácido). Son nutrientes que forman la base o materia prima de las proteínas. Los
aminoácidos más frecuentes y de mayor interés son aquellos que forman parte de las proteínas.
Aminoácidos esenciales.
Aminoácidos no esenciales.
Aminoácidos esenciales. son los aminoácidos que necesitan ser ingeridos por el cuerpo; la
carencia de estos aminoácidos en la dieta limita el desarrollo del organismo, ya que no es
posible reponer las células de los tejidos que mueren o crear tejidos nuevos, en el caso del
crecimiento. Los aminoácidos esenciales son: Valina (Val), Leucina (Leu), Treonina (Thr), Lisina
(Lys), Triptófano (Trp), Histidina (His), Fenilalanina (Phe), Isoleucina (Ile), Arginina (Arg),
Metionina (Met)
Aminoácidos no esenciales: son los aminoácidos que pueden ser sintetizados por el cuerpo y
son: Alanina (Ala), Prolina (Pro), Glicina (Gly), Serina (Ser), Cisteína (Cys), Asparagina (Asn),
Glutamina (Gln), Tirosina (Tyr), Ácido aspártico (Asp), Ácido glutámico (Glu).
PROTEINAS
Las proteínas son biomoléculas formadas por cadenas lineales de aminoácidos; el nombre
proteína proviene de la palabra griega ("proteios"), que significa "primario" o del dios Proteo,
por la cantidad de formas que pueden tomar.
Características de las proteínas. Los prótidos o proteínas son biopolímeros es decir, están
formadas por gran número de unidades estructurales simples repetitivas (monómeros) de
aminoácidos, son imprescindibles para el crecimiento del organismo. Debido a su gran
tamaño, cuando estas moléculas se dispersan en un disolvente adecuado, forman siempre
dispersiones coloidales, con características que las diferencian de las disoluciones de moléculas
más pequeñas. Por hidrólisis, las moléculas de proteínas se dividen en numerosos compuestos
relativamente simples, de masa molecular pequeña, que son las unidades fundamentales
constituyentes de la macromolécula. Estas unidades son los aminoácidos de los cuales existen
veinte especies diferentes y que se unen entre sí mediante enlaces peptídicos, cientos y miles
de estos aminoácidos pueden participar en la formación de la gran molécula polimérica de
una proteína. Todas las proteínas tienen carbono, hidrógeno, oxígeno y nitrógeno, y casi todas
poseen también azufre. La síntesis proteica es un proceso complejo cumplido por las células
según las directrices de la información suministrada por los genes. Las proteínas son largas
cadenas de aminoácidos unidas por enlaces peptídicos entre el grupo carboxilo (-COOH) y el
grupo amino (-NH2) de residuos de aminoácido adyacentes. La secuencia de aminoácidos en
una proteína está codificada en su gen (una porción de ADN) mediante el código genético.
Aunque este código genético especifica los 20 aminoácidos "estándar" más la selenocisteína y
—en ciertos Archaea— la pirro lisina.
Las proteínas de todos los seres vivos están determinadas mayoritariamente por su genética
(con excepción de algunos péptidos antimicrobianos de síntesis no ribosomal), es decir, la
información genética determina en gran medida qué proteínas tiene una célula, un tejido y un
organismo. Las proteínas se sintetizan dependiendo de cómo se encuentren regulados los
genes que las codifican. Por lo tanto, son susceptibles a señales o factores externos. El
conjunto de las proteínas expresadas en una circunstancia determinada es denominado
proteoma.
ESTRUCTURA DE LAS PROTEÍNAS. La organización de una proteína viene definida por cuatro
niveles estructurales denominados: estructura primaria, estructura secundaria, estructura
terciaria y estructura cuaternaria. Cada una de estas estructuras informa de la disposición de
la anterior en el espacio.
La (alfa)-hélice.
La conformación beta o lámina plegada.
En esta disposición los aminoácidos, no forman una hélice sino una cadena en forma de zigzag,
denominada disposición en lámina plegada. Presentan esta estructura secundaria la queratina
de la seda o fibroína.
Función CONTRACTIL. Generar movimientos en las células y tejidos ej. La actina y la miosina
constituyen las miofibrillas responsables de la contracción muscular.
Según su forma
Fibrosas: presentan cadenas polipeptídicas largas y una estructura secundaria atípica. Son
insolubles en agua y en disoluciones acuosas. Algunos ejemplos de éstas son queratina, colágeno
y fibrina
Globulares: se caracterizan por doblar sus cadenas en una forma esférica apretada o compacta
dejando grupos hidrófobos hacia adentro de la proteína y grupos hidrófilos hacia afuera, lo
que hace que sean solubles en disolventes polares como el agua. La mayoría de las enzimas,
anticuerpos, algunas hormonas y proteínas de transporte, son ejemplos de proteínas
globulares. Mixtas: posee una
parte fibrilar (comúnmente en el centro de la proteína) y otra parte globular (en los extremos).
Simples: su hidrólisis sólo produce aminoácidos. Ejemplos de estas son la insulina y el colágeno
(globulares y fibrosas).
Conjugadas o heteroproteínas: su hidrólisis produce aminoácidos y otras sustancias no
proteicas con un grupo prostético.
Fuentes de proteínas. Las fuentes dietéticas de proteínas incluyen carne, huevos, soya, granos,
leguminosas y productos lácteos tales como queso o yogurt. Las fuentes animales de proteínas
poseen los 20 aminoácidos. Las fuentes vegetales son deficientes en aminoácidos y se dice que
sus proteínas son incompletas. Por ejemplo, la mayoría de las leguminosas típicamente
carecen de cuatro aminoácidos incluyendo el aminoácido esencial metionina, mientras los
granos carecen de dos, tres o cuatro aminoácidos incluyendo el aminoácido esencial lisina.
ACIDOS NUCLEICOS
Los ácidos nucleícos son macromoléculas, polímeros formados por la repetición de monómeros llamados
nucleótidos, unidos mediante enlaces fosfodiéster. Se forman así largas cadenas de poli nucleótidos, lo
que hace que algunas de estas moléculas lleguen a alcanzar tamaños gigantes (de millones de
nucleótidos de largo).Tanto la molécula de ARN como la molécula de ADN tienen una estructura de forma
helicoidal, cada nucleótido a su vez, está formado por tres tipos de compuestos:
1. Una pentosa o azúcar de cinco carbonos: se conocen dos tipos de pentosas que forman parte
de los nucleótidos, la ribosa y la desoxirribosa, esta última se diferencia de la primera por que
le falta un oxígeno y de allí su nombre. El ADN sólo tiene desoxirribosa y el ARN tiene sólo
ribosa, y de la pentosa que llevan se ha derivado su nombre, ácido desoxirribonucleico y ácido
ribonucleico, respectivamente.
2. Una base nitrogenada: que son compuestos anillados que contienen nitrógeno. Se pueden
identificar cinco de ellas: adenina, guanina, citosina, uracilo y timina.
La secuencia de los nucleótidos determina el código de cada ácido nucleico particular. A su vez,
este código indica a la célula cómo reproducir un duplicado de sí misma o las proteínas que necesita
para su supervivencia.
El grupo fosfato sirve de enlace entre nucleótidos, uniéndose al carbono 3' del siguiente
nucleótido; se denomina nucleótido-mono fosfato (como el AMP) cuando hay un solo grupo
fosfato, nucleótido-di fosfato (como el ADP) si lleva dos y nucleótido-trifosfato (como el ATP) si
lleva tres.
Los nucleótidos se unen para formar el poli nucleótido por uniones fosfodiester entre el
carbono 5' de un nucleótido y el carbono 3' del siguiente.
Existen dos tipos de ácidos nucleícos: ADN (ácido desoxirribonucleico) y ARN (ácido
ribonucleico), que se diferencian:
por el glúcido (pentosa) que contienen: la desoxirribosa en el ADN y la ribosa en el ARN;
por las bases nitrogenadas que contienen: adenina, guanina, citosina y timina, en el ADN;
adenina, guanina, citosina y uracilo, en el ARN; en los organismos eucariotas, la estructura del
ADN es de doble cadena, mientras que la estructura del ARN es mono catenaria, aunque puede
presentarse en forma extendida, como el ARNm, o en forma plegada, como el ARNt y el ARNr, y
en la masa molecular: la del ADN es generalmente mayor que la del ARN.
El ADN es bicatenario, está constituido por dos cadenas de poli nucleótidos unidas entre sí
formando una doble hélice. La unión es a través de las bases nitrogenadas mediante puentes
de hidrogeno y este apareamiento está condicionada químicamente de forma que la adenina
A solo se puede unir con la timina T y la guanina G con la citocina C en toda su longitud. En la
secuencia de bases nitrogenadas reside la información genética del ADN, porta la información
de las características biológicas de un individuo y contiene los mensajes e instrucciones para
que las células realicen sus funciones. Conocida la secuencia de bases de una cadena se deduce
la secuencia de la cadena complementaria. Esta doble cadena puede disponerse en forma
lineal (ADN del núcleo de las células eucarioticas) o en forma circular (ADN de las células
procarioticas, así como de las mitocondrias y cloroplastos eucarióticos). Excepcionalmente, el
ADN de algunos virus es mono catenario, es decir, está formado por un solo poli nucleótido,
sin cadena complementaria.
Las dos cadenas se encuentran arregladas en una estructura helicoidal alrededor de un eje
común por lo que recibe el nombre de doble hélice. Las bases se encuentran acomodadas hacia
el eje de la doble hélice, mientras que el azúcar y los fosfatos se encuentran orientados hacia
el exterior de la molécula.
Una molécula de ADN de un milímetro de longitud estará formado de 3 mil kb o sea tres
millones de bases.
Así pues la molécula de ADN es un largo filamento de 20 Angstrom de diámetro cuya longitud
depende del número de kb, el cual a su vez depende de la especie. El rango de tamaño va
desde 2 micras (5 kb) en el virus SV40, hasta casi un metro (3 x 106 kb) en cromosomas
humanos. El genoma de E. coli, no tiene extremos, o sea forma un círculo, y el perímetro tiene
una longitud de 1.4 mm (4000kb). El genoma de los animales superiores no forma círculos, es
una estructura lineal abierta.
En los cromosomas estas moléculas se arreglan en estructuras más compactas en las que la
doble hélice se enrolla sobre sí misma. En el caso de las bacterias, la molécula de ADN de más
de un milímetro de longitud se arregla dentro de la bacteria que sólo tiene una longitud de una
micra (o sea es una longitud mil veces menor). Cada especie viviente tiene su propio ADN y
en los humanos es esta cadena la que determina las características individuales, desde el color
de los ojos y el talento musical hasta la propensión a determinadas enfermedades. Es como el
código de barra de todos los organismos vivos que existen en la tierra, que está formado por
segmentos llamados genes. La combinación de genes es específica para cada organismo y
permite individualizarnos. Estos genes provienen de la herencia de nuestros padres y por ello
se utiliza los tests de ADN para determinar el parentesco de alguna persona. Además, se utiliza
el ADN para identificar a sospechosos en crímenes (siempre y cuando se cuente con una
muestra que los relacione). Actualmente se ha determinado la composición del genoma
humano que permite identificar y hacer terapias para las enfermedades que se trasmiten
genéticamente como: enanismo, albinismo, hemofilia, daltonismo, sordera, fibrosis quística,
etc.
Agentes mutagénicos y las diferentes alteraciones que pueden producir en el ADN
Las mutaciones pueden surgir de forma espontánea (mutaciones naturales) o ser inducidas de
manera artificial (mutaciones inducidas) mediante radiaciones y determinadas sustancias químicas
a las que llamamos agentes mutágenos. Estos agentes aumentan significativamente la frecuencia
normal de mutación. Así pues, distinguimos:
1) Radiaciones, que, según sus efectos, pueden ser:
a) No ionizantes, como los rayos ultravioleta (UV) que son muy absorbidas por el ADN y favorecen
la formación de enlaces covalentes entre pirimidinas contiguas (dímeros de timina, por ejemplo) y la
aparición de formas tautómeras que originan mutaciones génicas.
b) Ionizantes, como los rayos X y los rayos gamma, que son mucho más energéticos que los UV;
pueden originar formas tautoméricas, romper los anillos de las bases nitrogenadas o los enlaces
fosfodiéster con la correspondiente rotura del ADN y, por consiguiente, de los cromosomas.
2) Sustancias químicas que reaccionan con el ADN y que pueden provocar las alteraciones
siguientes:
a) Modificación de bases nitrogenadas. Así, el HNO2 las desamina, la hidroxilamina les adiciona
grupos hidroxilo, el gas mostaza añade grupos metilo, etilo.
b) Sustitución de una base por otra análoga. Esto provoca emparejamientos entre bases distintas
de las complementarias.
c) Intercalación de moléculas. Se trata de moléculas parecidas a un par de bases enlazadas,
capaces de alojarse entre los pares de bases del ADN. Cuando se produce la duplicación pueden
surgir inserciones o deleciones de un par de bases con el correspondiente desplazamiento en la
pauta de lectura.
El ARN es un filamento de una sola cadena (es mono catenario), formado por nucleótidos en los
que el azúcar es ribosa, la presencia de un oxígeno en la posición 2' de la ribosa impide que se
forme la doble cadena de la manera en que se forma en el ADN. Las bases nitrogenadas son
adenina, uracilo, citosina y guanina, actúa como intermediario y complemento de las instrucciones
genéticas codificadas en el ADN.
El ARN hace de ayudante del ADN en la utilización de esta información; por eso en una célula
eucariótica (que contiene membrana nuclear) al ADN se le encuentra sólo en el núcleo, ya sea
formando a los genes, en cambio, al ARN se le puede encontrar tanto en el núcleo como en el
citoplasma.
ADN-------->ARN---------------->PROTEINAS
replicación --> transcripción --> traducción
El ARN ribosómico es el más abundante (80 por ciento del total del ARN), se encuentra en los
ribosomas y forma parte de ellos, aunque también existen proteínas ribosómicas. El ARN
ribosómico recién sintetizado es empaquetado inmediatamente con proteínas ribosómicas,
dando lugar a las subunidades del ribosoma.
Estructura celular microbiana. La gran variedad de células que existen manifiesta diferentes
niveles de complejidad, todas poseen una masa coloidal llamada citoplasma, rodeada de una
capa que las aísla del entorno y a través de la cual se vinculan con el exterior la membrana
citoplasmática. A partir de su estructura, es posible distinguir dos categorías: procariotas y
eucariotas.
LA CELULA PROCARIOTA. Las células procariotas son pequeñas y menos complejas que las
eucariotas. Las bacterias son organismos relativamente sencillos, de dimensiones muy
reducidas, de apenas unas micras en la mayoría de los casos. Los procariotas sustentan un
metabolismo complejo, en algunos casos exclusivo de ciertos taxa, como algunos grupos de
bacterias. Los procariotas se clasifican, según Carl Woese, en arqueas y eubacterias.
Tamaño de las bacterias. Las bacterias presentan una amplia variedad de tamaños y formas.
La mayoría presentan un tamaño diez veces menor que el de las células eucariotas, es decir,
entre 0,5 y 5 μm. Sin embargo, algunas especies como Thiomargarita namibiensis y
Epulopiscium fishelsoni llegan a alcanzar los 0,5 mm, lo cual las hace visibles al ojo desnudo.
En el otro extremo se encuentran bacterias más pequeñas conocidas, entre las que cabe
destacar las pertenecientes al género Mycoplasma, las cuales llegan a medir solo 0,3 μm, es
decir, tan pequeñas como los virus más grandes
Gram positivas
La pared celular de las Gram positivas es más gruesa que la de los Gram negativos. Poseen
peptidoglicano, ácidos teicoicos y lipoteicoicos. El componente fundamental es la mureína, un
peptidoglicano que solo se encuentra en los procariontes. La mureína consiste en una cadena
lineal de dos azúcares alternados N-acetil glucosamina y ácido acetilmurámico.
La pared celular es biológicamente estable, resiste al ataque de las enzimas de los mamíferos,
excepto de la lisozima que la degrada. La síntesis de la pared puede ser afectada por
antibióticos como la penicilina.
Esquema de la pared celular de una bacteria Gram positiva
Gram negativas. El espesor de la pared celular de una bacteria Gram negativa es
considerablemente menor que el de una Gram positiva. La cantidad de mureína es mucho
menor en los Gram negativas. A ambos lados de la fina pared de mureína se encuentra un gel
periplásmico, que define al llamado peri plasma (antes llamado espacio peri plasmático). Por
fuera del peri plasma se encuentra una estructura exclusiva de las Gram negativas, la
denominada membrana externa. Esta bicapa es muy asimétrica, la semicapa interna está
compuesta por fosfolípidos, pero la semicapa externa está compuesta por lipoproteína,
lipopolisacáridos (LPS), altamente tóxico para el ser humano (endotoxina). Para obtener
nutrientes las bacterias Gram negativas, poseen porinas que son proteínas que forman poros
en la membrana externa.
Carboxisomas.
vacuolas de gas.
clorosomas o vacuolas fotosintéticas.
magnetosomas.
VACUOLAS DE GAS. Son orgánulos muy refringentes, con una estructura a base de
agrupaciones regulares de vesículas de gas. Cada vesícula tiene una forma de cilindro bicónico,
rodeado de una mono capa de unidades globulares de proteína ensambladas helicoidalmente
que dan un aspecto a bandas (“costillas”). Estas es impermeable al agua y solutos, pero
permeable a los gases, por lo que la composición y concentración del gas dentro de la vesícula
depende de las que existan en el medio. Las vesículas
de gas están constituidas por dos tipos de proteína: la mayoritaria GvpA es una pequeña
proteína rígida y muy hidrófoba. La proteína minoritaria GvpC tiene como función reforzar las
vesículas de gas. La función es mantener un grado de flotabilidad óptimo en los hábitats
acuáticos a las bacterias que las poseen, Permite motilidad hacia arriba y hacia abajo, lo que
les permite buscar el lugar idóneo en la columna de agua en respuesta a cambios ambientales
(ej. Cianobacterias que se encuentran flotando en los lagos, bacterias foto tróficas verdes,
purpureas y violeta y algunas Archaea).
CRECIMIENTO MICROBIANO
Cuando se siembran microorganismos en un medio de cultivo apropiado, los mismos
comienzan a dividirse activamente empleando los nutrientes que le aporta el medio de
cultivo para “fabricar” nuevos microorganismos. Este proceso continúa hasta que algún
nutriente del medio de cultivo se agota (sustrato limitante) y el crecimiento se detiene.
También puede detenerse el crecimiento por acumulación de alguna substancia inhibidora
formada por los mismos microorganismos.
Luego hay dos aspectos claramente diferenciables que hacen al crecimiento microbiano: uno
estequiométrico, por el cual la concentración final de microorganismos obtenidos dependerá
de la concentración y composición del medio de cultivo, y el otro cinético, el que dirá con qué
velocidad se lleva a cabo el proceso.
El crecimiento microbiano se define como un aumento de los constituyentes celulares que
puede dar como resultado:
Un aumento en el número de células ej. Cuando el microorganismos se reproduce por
gemación o fisión binaria -aumento en el tamaño de la célula.
El crecimiento se consigue por una doble acción: un aumento en el tamaño de las células del
cuerpo, y un aumento en su número real.
Tanto el crecimiento como la división celular dependen de la capacidad de las mismas para
asimilar los nutrientes que encuentran en el ambiente en que se desarrollan.
T 2n T 3n T 4n T 5n
T= tiempo de generación.
n= número de generaciones.
Fase estacionaria. Los microorganismos entran en fase estacionaria porque se agota algún
nutriente esencial del medio, porque los productos de desecho que han liberado durante la
fase de crecimiento exponencial hacen que el medio sea inhóspito para el crecimiento
microbiano. La fase estacionaria
tiene gran importancia porque probablemente represente con mayor fidelidad el estado
metabólico real de los microorganismos en muchos ambientes naturales. En ella no se
incrementa el número de bacterias (ni la masa u otros parámetros del cultivo), se mantiene
más o menos estable. Las células desarrollan un metabolismo diferente al de la fase
exponencial y durante ella se produce una acumulación y liberación de meta bolitos
secundarios que pueden tener importancia en el curso de las infecciones o intoxicaciones
producidas por bacterias.
Es una técnica común, rápida y barata que consiste en contar con un microscopio la cantidad
de células presentes en un volumen determinado. Para estos recuentos se utilizan
generalmente cámaras de recuentos (cámara de Neubaver). Una de las mayores ventajas del
recuento microscópico es brindar información adicional sobre el tamaño y la morfología de los
objetos contados. La muestra puede utilizarse tal cual, (leche, o cultivos puros en medio
líquido), o puede prepararse una dilución.
Materiales para el recuento de células
Para hacer el conteo se procede de la siguiente manera. Si se posee una cámara dividida en 25
cuadrados. El área de los 25 cuadrados es conocida, como también el volumen de muestra que
esta área admite. Contando el número de bacterias presentes en los cuadrados (o algunos de
ellos) se puede conocer cuanto hay en volumen conocido. Suponiendo 50 bacterias en 25
cuadrados, y sabiendo que los 25 cuadrados corresponden a 0,02 mm3.
0,02 mm3
En un medio sólido cada bacteria se multiplicará formando una colonia visible a simple vista
que puede ser contada. Como las colonias pueden originarse tanto de una célula como de un
grupo de células, se utiliza el término: UNIDADES FORMADORAS DE COLONIAS (u.f.c.), y esto
puede constituir una desventaja ya que si dos bacterias no se separan darán una sola colonia.
Técnica para la realización de cultivo puro
Se establece que las condiciones óptimas de conteo se dan cuando desarrollan entre 30 y 300
colonias. Algunas bacterias son difíciles de contar en medios sólidos (Nitritadores) y se requiere
de conteos en medios líquidos. Para ello se recurre a la técnica de determinación del número
más probable (NMP) de microorganismos. Se basa en la determinación de la presencia o
ausencia de un determinado tipo de microorganismo en diferentes cantidades de muestra.
Para poder determinar el NMP de microorganismo se debe diluir hasta tener una densidad que
sea menor a 1 célula por cada mililitro de diluyente. Por ejemplo, para hacer diluciones hasta
obtener 3 células en 5 ml se siembra 1 ml en cada uno de 5 tubos con medio líquido adecuado,
esperando que en 3 tubos haya crecimiento de microorganismos y en 2 no (si las células no se
distribuyen 1 en cada ml se pueden obtener otros resultados: 2 positivos y 3 negativos, o 1
positivo y 4 negativos). Los resultados posibles son al azar.
Es una técnica en la que se mide la masa de microorganismos en una suspensión. Para ello se
utiliza un espectrofotómetro y se mide la cantidad de luz que atraviesa en una suspensión de
microorganismos, en comparación con un blanco que es el medio esterilizado y sin sembrar.
Cuanto mayor es el número de células en suspensión, tanto menor es el porcentaje de luz que
atraviesa el medio. Para relacionar la transmitancia con al densidad bacteriana se requiere de
hacer curvas patrón de densidad conocidas.
Un quimiostato simple
Debido a su pequeño tamaño y a su estilo de vida individual, las células procarióticas sufren
los cambios ambientales de un modo mucho más directo e inmediato que las células de los
organismos pluricelulares. Actualmente, las únicas formas de vida existentes en ambientes
extremos son exclusivamente procarióticas. Desafiando a nuestras ideas de lo que es la vida
“normal”, encontramos extraordinarios seres vivos unicelulares viviendo “cómodamente” a
pHs muy ácidos o muy alcalinos, o reproduciéndose a temperaturas de más de 100ºC y a
grandes presiones. Este tipo de microorganismos que habitan en medios que los humanos
consideramos como “extremos” reciben el calificativo de extremófilos.
Clasificación de temperatura
Acidez y alcalinidad: cada microorganismo tiene un rango de pH dentro del que se puede
desarrollar el pH óptimo de desarrollo suele ser un valor muy bien definido para cada
microorganismo. Acidófilos. Son los microorganismos que viven a valores
de pH por debajo de 2. En general los hongos tienden a tolerar valores de pH más ácidos que
las eubacterias. Alcalófilos. Son aquellos microorganismos
que viven a valores de pH superiores a 10. Neutrófilos. Son aquellos microorganismos que
viven a valores de pH cercano a la neutralidad (pH 6.0 a 8.0). independiente del pH del
ambiente, el interior de la célula debe estar cercano a un valor 7.
EFECTO DE LOS NUTRIENTES. Los microorganismos que son patógenos son considerados
HETERÓTROFOS. Esto significa que al igual que un ser humano, ellos requieren de: Carbono,
Nitrógeno, Azufre, Fosforo y los micro elementos. Todos estos elementos están disponibles
para ellos en nuestros alimentos al igual que para nosotros.
Métodos de esterilización.
A) Agentes físicos:
Calor. Calor seco: se utiliza estufa, flameado.
Calor húmedo: se utiliza autoclave, Tindalización.
Radiaciones: Ionizantes, rayos UV, rayos gamma.
Filtración.
B) Agentes químicos:
Oxido de etileno.
Glutaraldehído.
Aldehídos
Gas -plasma de Peróxido de Hidrogeno.
Gas inflamable.
Agentes físicos.
Calor: La utilización de este método y su eficacia depende de dos factores: el tiempo de
exposición y la temperatura. Todos los microorganismos son susceptibles, en distinto
grado, a la acción del calor. El calor provoca desnaturalización de proteínas, fusión y
desorganización de las membranas y/o procesos oxidantes irreversibles en los
microorganismos.
Calor seco: El calor seco produce desecación de la célula, es tóxico por niveles elevados
de electrolitos, fusión de membranas. Estos efectos se deben a la transferencia de calor
desde los materiales a los microorganismos que están en contacto con éstos. La acción
destructiva del calor sobre proteínas y lípidos requiere mayor temperatura cuando el
material está seco o la actividad de agua del medio es baja.
Estufas: a t° de 180º C por 2 h. Eficaz para esterilizar material de vidrio y metales (ej.
instrumental odontológico), y a 140º C para el contenido de los tambores.
Ventajas del calor seco: no es corrosivo para metales e instrumentos. Permite la
esterilización de sustancias en polvo y no acuosas, y de sustancias viscosas no volátiles.
Calor Húmedo: El calor húmedo produce desnaturalización y coagulación de proteínas.
Estos efectos se debe principalmente a dos razones:
* El agua es una especie química muy reactiva y muchas estructuras biológicas son
producidas por reacciones que eliminan agua.
*El vapor de agua posee un coeficiente de transferencia de calor mucho más elevado que
el aire.
Autoclave: Se realiza la esterilización por el vapor de agua a presión.
Esteriliza a 120º a una atmósfera de presión y se deja el material durante 20 a 30 minutos.
Tyndalización: Esterilización por acción discontinua del vapor de agua. Las bacterias que
resisten una sesión de calefacción, hecha en determinadas condiciones, pueden ser
destruidas cuando la misma operación se repite con intervalos separados y en varias
sesiones.
Ventajas del calor húmedo:
• Rápido calentamiento y penetración.
• Destrucción de bacterias y esporas en corto tiempo.
• No deja residuos tóxicos.
• Hay un bajo deterioro del material expuesto.
• Económico.
• Desventaja: no se esteriliza soluciones que formen emulsiones con el agua, es corrosivo
sobre ciertos instrumentos metálicos.
Flameado. Exposición de un objeto pequeño al efecto de una llama hasta incandescencia
(ej. asa de cultivo a la llama del mechero).
Radiaciones: Su acción depende de: el tipo de radiación, el tiempo de exposición, la dosis.
Ionizantes: Producen iones y radicales libres que alteran las bases de los ácidos nucleícos,
estructuras proteicas y lipídicas, y componentes esenciales para la viabilidad de los
microorganismos. Tienen gran penetrabilidad y se las utiliza para esterilizar materiales
termolábiles (termo sensibles) como jeringas descartables, sondas, guantes, etc. Se
utilizan a escala industrial por sus costos.
Rayos Ultravioletas: Afectan a las moléculas de DNA de los microorganismos. Se utilizan
para superficies, útil en la preparación de vacunas, esterilización de áreas hospitalarias
críticas (quirófanos, salas de prematuros, etc.)
Rayos Gamma: Se basa en los conocimientos sobre la energía atómica. Se aplica a
productos o materiales termolábiles y de gran importancia en el campo industrial. Puede
esterilizar antibióticos, vacunas, alimentos, etc.
Filtración: Se usan membranas filtrantes con poros de un tamaño determinado. El tamaño
del poro dependerá del uso al que se va a someter la muestra. Los filtros que se utilizan
no retienen virus ni mico plasmas, estos últimos están en el límite de separación según el
diámetro de poro que se utilice.
La filtración se utiliza para emulsiones oleosas o soluciones termolábiles. Se usa para
esterilizar aceites, algunos tipos de pomadas, soluciones oftálmicas, soluciones
intravenosas, drogas diagnósticas, radiofármacos, medios para cultivos celulares, y
soluciones de antibióticos y vitaminas.
CONTROL DE VIRUS. Como los virus son parásitos intracelulares obligados, los agentes
antivirales deben ser capaces de inhibir de manera selectiva las funciones virales sin
lesionar al huésped.
Los agentes antivirales atacan la maquinaria celular de su hospedador, inhibiendo la
síntesis de ácidos nucleícos.
CONTROL DE HONGOS. El agente anti fúngico o antimicótico engloba cualquier sustancia
capaz de producir una alteración en las estructuras de una célula fúngica que consiga
inhibir su desarrollo, alterando su viabilidad o capacidad de supervivencia, bien directa o
indirectamente, lo que facilita el funcionamiento de los sistemas de defensa del huésped.
El mecanismo de acción de los anti fúngicos, depende del lugar en el que actúen. Sobre la
membrana celular del hongo: la membrana celular de los hongos, desempeña una
importante función en la división celular y en el metabolismo. alteran la permeabilidad de
la membrana lo que permite una pérdida de proteínas, glúcidos y cationes monovalentes
y divalentes, causando la muerte celular. Sobre la pared celular del hongo: inhibiendo la
síntesis de los glucanos a través de la inactivación de la enzima 1,3-beta-glucano sintetasa.
Sobre el núcleo de la célula fúngica: inhibe la mitosis, al destruir el huso mitótico,
necesario para efectuar la división celular.
RESISTENCIA DE LOS ANTIBIÓTICOS. La resistencia antibiótica es la capacidad de un
microorganismo para resistir los efectos de un antibiótico. La resistencia se produce
naturalmente por selección natural a través de mutaciones producidas por azar. Una vez
que se genera la información genética, las bacterias pueden transmitirse los nuevos genes
a través de transferencia horizontal (entre individuos) por intercambio de plásmidos. Si
una bacteria porta varios genes de resistencia, se le denomina multirresistente o,
informalmente, superbacteria.
Las bacterias adquieren los genes de resistencia por tres mecanismos principales.
Los genes de resistencia se encuentran en el cromosoma bacteriano o en los plásmidos:
Unos se heredan
Otros aparecen por mutaciones aleatorias del ADN bacteriano.
Otros provienen de otras bacterias.
Mecanismos de las bacterias para resistir a un antibiótico
Los genes de las bacterias resistentes les permiten actuar como:
Bombas de expulsión por donde expulsan al antibiótico
Enzimas que lo degradan al antibiótico
Enzimas que lo modifican (alteran o inactiven) al antibiótico.