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Microbiología en Neumología
N. Avisbal Portillo, Mª V. Hidalgo Sanjuán, J.L. Velasco Garrido, M. Vidal Díaz
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28 N. Avisbal Portillo, Mª V. Hidalgo Sanjuán, J.L Velasco Garrido, M. Vidal Díaz
Tabla I. Tipos de muestras para diagnóstico micro- agente etiológico responsable de la neumonía
biológico en Neumología1. adquirida en la comunidad. Su utilidad es limi-
tada en el caso del neumococo3.
1. No invasivas:
- Cultivo de M. tuberculosis: permite el diag-
- esputo
nóstico de confirmación de la enfermedad,es
- sangre
un procedimiento mucho más sensible que la
- suero
microscopía, y consigue mayor rentabilidad en
- orina
- líquido pleural
caso de muestras paucibacilares (son suficientes
2. Invasivas 10 BAAR / ml de esputo). Pueden utilizarse
- Punción transtraqueal tanto medios sólidos como líquidos. Los medios
- Fibrobroncoscopia: sólidos son los más conocidos como el de
• Broncoaspirado Lowenstein-Jensen (medio con base de huevo),
• Catéter telescopado con cepillo protegido o el cultivo 7H10-7H11 de Midelbrook (semi-
• Lavado broncoalveolar sintético con base de ágar). Algunas micobac-
• Biopsia transbronquial terias requieren suplementar los medios de cul-
• Punción transbronquial espirativa tivo con factores de crecimiento especiales (san-
- Punción aspiración transtorácica gre, citrato amónico, hemina…)
- Biopsia pulmonar El tiempo de crecimiento del bacilo una vez
sembrado, oscila entre 3-6 semanas de ahí que
se hallan desarrollado sistemas de detección
más rápidos como los radiométricos (BACTEC)
- Tinción de Zhiehl-Neelsen: debe realizarse ante que permiten determinar la actividad metabó-
sospecha de etiología tuberculosa, su rentabi- lica del mycobacterium entre 15- 20 días, pre-
lidad aumenta con el número de muestras reco- senta mayor sensibilidad que los cultivos tra-
gidas (por regla general tres)2,3. dicionales así como la posibilidad de identifi-
Se requieren al menos 10.000 BAAR / ml para car M. tuberculosis en 4-5 días y realizar anti-
que puedan ser visualizados poresta técnica. biograna en 3-6 días2,3.
No permite diferenciar M.tuberculosis de otras Su principal inconveniente es que el sistema
micobacterias. BACTEC requiere trabajar con 14 C por lo que
Es una técnica fácil y rápida de realizar. necesita permisos especiales para su manipu-
- Tinción de auramina: permite la visión directa lación.
del mycobacterium mediante un microscopio Se han investigado métodos de cultivo no radio-
de fluorescencia utilizando como colorante un métricos como los bifásicos (MB-Septi- Check®)
fluorocromo como la auramina, tiene una efi- como alternativa pero presentan la desventaja
cacia similar a la tinción de Zhiehl – Neelsen de ser más lentos que BACTEC®.
aunque su principal ventaja es su mayor rapi- - Inmunofluorescencia directa (IFD): demuestra
dez, por lo que su utilización está justificada en la presencia de antígenos mediante anticuer-
aquellos laboratorios que realicen más de 10 pos específicos marcados con fluoresceína, con
exámenes microscópicos diarios. el empleo de anticuerpos monoclonales ha
- Blanco de calcofluor: para hongos mejorado la especificidad de la técnica que de
- Tinta china: análisis en fresco para criptococos. por sí es elevada, la sensibilidad varía según el
- Cultivo de esputo: su rentabilidad depende de tipo de muestra utilizada, siendo más alta cuan-
la calidad de la muestra obtenida. Tiene una do se utiliza una técnica invasiva.
sensibilidad entre 45-60% cuando se realiza Es útil para la detección de L. pneumophila,
conjuntamente con la tinción de GRAM y un Chlamydia pneumoniae y virus respiratorios
60% de especificidad en el diagnóstico del entre otros3.
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1.2 Hemocultivo para virus por mala reproductibilidad así como fal-
De uso obligado en pacientes diagnosticados sos positivos y negativos. Su mayor utilidad radica
de neumonía que requieran ingreso hospitalario. en el diagnóstico de Micplasma pneumoniae y
Suele ser positivo tan sólo en un 15-25% de los Coxiella burnetti, tanto para detectar IgG como Ig
casos ya que por regla general los pacientes han M(2,3).
recibido terapia antibiótica previamente y las bac-
teriemias en las neumonías son transitorias. 1.4 Orina: determinación de antigenuria
Los hemocultivos deben realizarse lo más pre- - Antígeno neumocócico urinario: detecta antí-
cozmente posible y durante un pico febril, la can- genos capsulares por técnicas de coaglutina-
tidad mínima de sangre requerida es de 10cc y la ción, aglutinación con partículas de látex (LA),
siembra debe realizarse tanto en medio aerobio radioinmunoensayo (RIA), fluorescencia direc-
como anaerobio. ta, enzimoinmunoensayo (EIA)…
Se han desarrollado, así mismo, técnicas que La prueba tiene una alta especificidad pero baja
permiten la detección de micobacterias en sangre, sensibilidad (0-58%).
las más eficaces son las de lisis –centrifugación y Estos inconvenientes se obvian con una técni-
las radiométricas. Son más útiles en caso de pacien- ca más reciente, la inmunocromatografía de
tes inmunodeprimidos. membrana que detecta el antígeno polisacá-
rido C de membrana neumocócico, con resul-
1.3 Técnicas serologicas tados disponibles en unos 15 minutos.
Consisten en la detección de Anticuerpos espe- La técnica es cara y puede dar falsos positi-
cíficos en el suero del paciente. vos en EPOC, por lo que en la actualidad es
Tienen gran valor epidemiológico, pero son complementaria pero no de primera línea en
poco útiles como orientación terapeúticaya que son el diagnóstico de la neumonía neumocócica4.
técnicas de resultado tardío; se requieren dos mues- - Antígeno urinario de Legionella: Legionella es
tras, una en la fase aguda y otra en la de convale- un patógeno obligado que no coloniza la vía
cencia (a los 14 -21 días), siendo necesario detec- aérea por lo que su aislamiento es sinónimo
tar seroconversión entre una y otra. de infección.
Se considera positiva cuando el título de la fase El cultivo de esputo tiene una sensibilidad entre
de convalecencia es cuatro veces superior al de el 50-80% y una especificidad del 100% pero
la fase aguda. presenta como principal inconveniente que su
Las técnicas más utilizadas son: fijación del máximo rendimiento no se obtiene hasta los
complemento, inmunofluorescencia indirecta y Enzi- 7-9 días, por lo que no se considera una buena
moinmunoensayo (ELISA). técnica para diagnóstico rápido.
La técnica de fijación del complemento ha sido Al menos el 80% de los pacientes con legio-
la más utilizada en el serodiagnóstico de infeccio- nellosis excretan antígenos por orina, de ellos
nes respiratorias sin embargo es poco sensible y el 70-80% es producida por L. pneumophila
requiere altas concentraciones de antígenos, es una serogrupo 1. La antigenuria aparece dentro de
técnica larga con resultados inespecíficos con mucha los 3 días desde el comienzo de los síntomas
frecuencia. y puede mantenerse hasta 60 días después de
Ha sido el diagnóstico más establecido en labo- su aparición.
ratorios de referencia para el diagnóstico de neu- Los técnicas más empleadas son radioinmu-
monías víricas, se utiliza para el diagnóstico, con noensayo (RIA) y enzimoinmunoensayo (EIA),
fines epidemiológicos de gérmenes como Myco- ambas con una buena sensibilidad y una espe-
plasma, Legionella, Chlamydia y Coxiella. cificidad que se acerca al 100%, así como alto
La técnica de ELISA presenta mejor sensibili- valor predictivo positivo, sin embargo EIA no
dad y especificidad. La prueba es menos efectiva tiene riesgo de radiación, es más barato y más
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sencillo. Como principales inconvenientes están cadenas de DNA presentes en la muestra y com-
diseñados sólo para la detección del serogru- plementarias a los iniciadores sufrirán el proceso
po 1 de L. pneumophila y la antigenuria per- de amplificación. El número final de cadenas de
sistente puede dificultar el diagnóstico de las DNA se incrementará exponencialmente en cada
recurrencias. ciclo en función al número de ciclos realizados.
En los últimos años se ha introducido un test La técnica es altamente sensible y suministra resul-
de inmunocromatografía de membrana para tados de forma muy precoz, en tan sólo unas
el serotipo 1, el test es rápido y sencillo pero horas, pero presenta falsos positivos en pacien-
parece tener una menor sensibilidad que el tes no infectados sino colonizados y como resul-
EIA4,5. tado de contaminación de la muestra durante su
manipulación.
1.5 Técnicas de amplificación genética Las muestras para estudio pueden obtenerse del
Todos los microorganismos poseen en sus áci- esputo, lo que conlleva un alto riesgo de conta-
dos nucleicos secuencias de nucleótidos propias minación por flora saprofita, por lo que se consi-
que les permiten distinguirlos de los demás, la detec- deran más útiles las muestras sanguíneas y las
ción de estas secuencias de DNA o RNA específi- respiratorias obtenidas por técnicas invasivas.
cas permite realizar el diagnóstico de una enfer- Se han realizando estudios para valorar su efi-
medad infecciosa. cacia en el diagnóstico de la neumonía adqui-
- Sondas genéticas: se comercializaron en la déca- rida en la comunidad tanto neumocócica como
da de los 80, consisten en un fragmento de ácido no neumocócica, con una sensibilidad del 73%
nucleico marcado (con isótopos radiactivos o sus- para las neumonías neumocócicas bacteriémi-
tratos cromógenos) que poseee una secuencia cas, frente al 48% para las no bacteriémicas6.
de bases complementaria a la del genoma del Las técnicas de amplificación genética más des-
microorganismo. Presentan muy buena especi- arrolladas en los últimos años han sido las desti-
ficidad pero baja sensibilidad nadas a detección de Mycobacterium tubercu-
Se han utilizado para identificación de micobac- losis7.
terias, L: pneumophila, virus… Entre ellas destacan el sistema Amplicor TB R de
En la actualidad han sido superadas por otras téc- Roche con una sensibilidad, especificidad y valor
nicas. predictivo positivo y negativo de 97,6%, 100%,
- Reacción en cadena de la polimerasa (PCR)6: Per- 100% y 90,9% respectivamente para muestras
mite sintetizar por vía enzimática millones de copias con cultivo positivo.
de un fragmento específico de DNA. El método Posteriormente se han creado técnicas de segun-
consta de 3 etapas: extracción del DNA, amplifi- da generación como el Gen Probe
cación y análisis del producto final. En la primera Amplified MTDR que utiliza la amplificación del
etapa mediante métodos preferentemente enzi- RNA ribosomal que ha mejorado su sensibilidad
máticos selibera el ADN que contienen todas las con respecto al cultivo manteniendo una exce-
células presentes en la muestra, posteriormente lente especificidad para el diagnóstico de M.
se incorpora a la muestra una enzima, la polime- tuberculosis; no requiere instrumental muy sofis-
rasa, y unos fragmentos de DNA denominados ticado y puede llevarse a cabo de rutina en la
iniciadores o primers que son específicos y com- mayoría de los laboratorios clínicos, permitien-
plementarios de un segmento de DNA del ger- do la realización de 50 muestras en 5 horas8,9.
men a estudio (DNA diana) y se instauran unos
ciclos térmicos predefinidos. En cada ciclo se pro- 2. Técnicas invasivas
duce la separación de las cadenas de DNA, el aco- Están indicadas en situaciones de gravedad o
plamiento con los iniciadores, si existe DNA diana, en ausencia de respuesta a tratamiento empírico
y la duplicación de las cadenas. Unicamente las correcto.
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