INSTITUTO POLITÉCNICO NACIONAL

ESCUELA NACIONAL DE CIENCIAS BIOLÓGICAS

“PRECIPITACION, SEPARACION Y PUNTO ISOELECTRICO DE

PROTEINAS”

Alumna: Alvarado Recillas Natalia

Alumno: Castillo Flores Sael Sección: 2 Grupo: 2OV1
Introducción Objetivos
La solubilidad de una proteína esta influenciada por  Analizar el efecto que produce la
su composición de aminoácidos y como está modificación de factores fisicoquímicos
estructurada tridimensionalmente. (Una proteína sobre la solubilidad de las proteínas.
rica en aminoácidos polares es en general más  Determinar el punto isoeléctrico de la
soluble que una rica en aminoácidos hidrofobicos y insulina, basándose en sus propiedades de
en el caso de su estructura tridimensional, las solubilidad a diferentes valores de pH.
proteínas globulares son más solubles que las  Realizar correctamente la práctica de
proteínas fibrosas). acuerdo a los parámetros establecidos en
Además de que existen factores externos que laboratorio.
pueden afectar la solubilidad de la proteína, los
principales factores son la temperatura, la fuerza Resultados
iónica, el pH y la constante dieléctrica del
disolvente. Biuret. Interpretación.
Sobrenadante. Positivo. Presencia de
La modificación de estos factores a soluciones proteínas en el
proteicas heterogéneas permite la purificación en sobrenadante.
virtud de su diferente solubilidad, para lo Precipitado 1. Positivo. Presencia de
anteriormente mencionado se van a emplear una proteínas en el
diversidad de métodos. (Salting out, precipitación primer
por efecto del pH, precipitación por metales precipitado
pesados, precipitación por modificación de formado.
constante dieléctrica). Filtrado. Positivo. Filtrado con
presencia de
En la mayoría de las proteínas su solubilidad va a proteínas.
depender de la interacción hidrofilica de las Precipitado 2. Positivo. Presencia de
moléculas polares del agua y los grupos ionizados proteínas en el
de las proteínas. La solubilidad de una proteína en segundo
solución acuosa es sensible a las concentraciones precipitado
de sales disueltas (fuerza iónica), en el caso de formado.
que la solubilidad de una proteína se encuentre en
concentración con baja fuerza iónica esta va
aumentar al agregar a medida en que se le
agregan sales a este fenómeno se le conoce como
(Salting in), aunque si se agrega demasiada sal la
solubilidad de la proteína tiende a disminuir a este
fenómeno se la conoce como (Salting out).
Las proteínas van a poseer cargas positivas o
negativas esto va a depender del pH de la solución
en la que se encuentren, cuando la proteína se
encuentre en una carga total de cero a este se le
conoce como punto isoeléctrico.(mínima
solubilidad de las proteínas).

Fotografía 1: Reacción de Salting out.

Tubo. 1 2 3 4 Tubo. 1 2 3 4 5
Clara de 3.0 3.0 3.0 3.0 Clara de 1.00 1.00 1.00 1.00 1.00
huevo (mL) huevo
HCL 0.1 N 1.0 (mL)
(mL) HgCl2 0.25
NaOH 0.1 N 1.0 5% (mL)
(mL) AgNO3 0.25
Regulador 1.0 5% (mL)
(pH 4.7) (mL) Pb(CH3CO 0.25
Agua. 1.0 O)2
Observacion La proteína No La No 5% (mL)
se precipito, proteína precipi
es. precipito, la la proteína se to NaCl 5% 0.25
solución se se volvió precipito, (mL)
pone turbia. soluble se
(blanco) (solución observa Agua. 0.25
Transparen ligeros Observaci La La La La No
te) precipitad proteína proteín proteín proteína preci
os. ones. se a se a se se pito
precipito, precipit precipit solubilizo
se o, se o, Fue (solución
observa pone la Transpar
ligeros turbia. menos ente)
precipita Fue la precipit
dos.( Fue segund ada de
la más a más los
precipita precipit tres.
da) ada

Fotografía 2: Precipitación por efecto del pH.

Tubo. 1 2
Clara de 2.0 2.0
huevo
(mL)
Fotografía 4: Precipitación por metales pesados.
Etanol. (mL) 1.0
Agua. 1.0 Tubo Acido Acetat Insulina pH Observaciones
Observaciones La proteína se No acetic o de .
precipito, la precipito o sodio
.
solución se pone 1 0.23 0.02 0.06m 3.67 No se
turbia.(blanco) L Precipito
(6 U)
2 0.15 0.10 0.06m 4.56 No se
L Precipito
(6 U)
3 0.05 0.20 0.06m 5.34 No se
L Precipito
(6 U)
4 0.01 0.24 0.06m 6.12 Precipitado
L
(6 U)
5 0.00 0.25 0.06m 9.06 Precipitado
Fotografía 3: Precipitación por modificación de la
constante dieléctrica. L
(6 U)
 qué el resultado no fue el esperado, la
explicación podría ser que se realizó una mala
filtración por nuestra parte y esto explicaría el
por qué las proteínas no se quedaron
suspendidas en el papel filtro y esto justificaría
el porqué de nuestro resultado.
Fotografía 5: Determinación del punto isoeléctrico de la En la prueba de precipitación por efecto del pH
insulina.
se buscó como finalidad explicar de manera
práctica como va intervenir el pH de una
Cálculos. solución en su solubilidad esto dependerá a la
misma vez lo cerca o lejos que se encuentren
pH =pka+log [A+]/[HA] del punto isoeléctrico, cual la práctica resulto
Únicamente para la concentración de sal: como se tenía esperada , en los tubos 1 y 3
respectivamente que contenían ácido
pH = 7+1/2 pka+1/2 log [A] clohidrico y regulador de acetatos las proteínas
Tubo 1: se precipitaron esto debido a que el pH bajo
de las soluciones se encuentra cerca del punto
pH =4.74+log [0.02]/[0.23] isoeléctrico de la proteína de la clara de huevo
pH=3.67 (albumina)(aproximadamente tiene un punto
isoeléctrico de 4.9) mientras que el hidróxido
Tubo 2: de sodio se solubilizó completamente esto
pH =4.74+log [0.10]/[0.15] dado que el punto iselectrico de la albumina se
encuentran lejos en un pH básico. Aunque los
pH=4.56 precipitados que se formaron en los tubos 1 y
Tubo 3: 3 se esperaban que los tubos tuvieran un poco
más de turbidez, en el cual se discutió el
pH =4.74+log [0.20]/[0.05]
porqué de la tonalidad, podríamos suponer
pH=5.34 que se debe a la concentración en la que se
diluyo la clara de huevo, en la cual se diluyo
Tubo 4:
más con respecto a la que estaba establecida
pH =4.74+log [0.24]/[0.01] en la práctica, por lo tanto la concentración de
la proteína fue menor y por lo tanto podríamos
pH=6.12
suponer que por eso la turbidez de la
Tubo 5: precipitación no fue la que se esperaba.
pH = 7+1/2 (4.74)+1/2 log [0.25] En el caso de la prueba de precipitación por
pH=9.06 metales pesados fue positiva en los tubos que
contenían cloruro mercúrico, nitrato de plata y
Discusión acetato de plomo esto se explica que al haber
Al realizar la separación de proteínas por iones positivos y negativos en las sales
precipitación con sales (salting out) y realizar metálicas estas van a reaccionar con las
biuret en el sobrenadante y al agregarle el moléculas de proteínas formando complejos
sulfato de amonio solido hasta la saturación y que aumentan su tamaño molecular
agitarla, se suponía que la prueba resultara (precipitados), en el cual respectivamente se
negativa dado que se esperaba que la proteína pudo observar que los tres tubos tenían
se precipitara por la presencia de la sal, ante la diferentes concentraciones de precipitado
situación generada anteriormente surgen (tonalidades distintas), el tubo que tenía una
planteamientos para tratar de explicar el por mayor precipitación fue el cloruro mercúrico,
el segundo tubo con mayor concentración fue
el nitrato de plato y el que tenía menos
concentración de precipitado fue el acetato de
plomo en el cual nos preguntamos el por qué
se formaron diferentes concentraciones de
precipitado a pesar que los tres son sales
metálicas, a lo que nos plantemos que
dependiendo la solución ,la fuerza iónica que
se ejerce va a ser distinta y entre mayor
contacto tenga los iones con las moléculas de
las proteínas se van a formar complejos
mucho mayores y por lo tanto mayores
concentraciones de precipitación. En el caso
del sodio y el agua no presentaron
precipitación, el sodio no es un metal pesado
sino un metal alcalino.
En la prueba que se realizó del punto
isoeléctrico de la insulina haciendo cambios en
pH de la sustancia reguladora se pudo
observar presencia de precipitado en el tubo 4
y 5 que se encontraban a un pH respectivo de
6.12 y 9.06 ante la situación generada
anteriormente surgen el planteamiento en
que el punto isoeléctrico se encuentra en un
punto medio entre esos dos pH debido a que
respectivamente esos dos tubos se
precipitaron y aplicando lo visto en clase y
laboratorio sabemos que entre más cerca
estén del punto isoeléctrico se va a precipitar
las soluciones , eso nos hace suponer que el
punto isoeléctrico de la insulina se encuentra
en una rango medio entre esos dos pH.
Conclusión
 Llegamos a la conclusión en que debido
a una mala filtración realizada por
nuestra parte la prueba de salting out no
nos arrojó los resultados esperados.
 La prueba de (salting out) y (salting in)
van a ser pruebas viables para
comprobar la solubilidad de las
proteínas ya que si se realizan
correctamente sirven eficazmente en su
manejo.
 El manejo del pH va a ser una factor de
gran importancia en la solubilidad de
soluciones que contengan proteínas, ya
que a partir de su pH podemos conocer
el punto isoeléctrico de una sustancia y
sabemos que entre más cercano se
encuentre del punto isoeléctrico la
sustancia se va a precipitar mientras
que si se encuentra más alejado del
punto isoeléctrico va a ser más soluble
la sustancia.
 El manejo de sales metálicas con una
densidad mayor (sales de metales
pesados) sirven para la
desnaturalización de las proteínas cual
al estar en contacto producen
precipitados, aunque si se emplean en
cuerpos de agua (membrana o tejidos)
pueden ser peligrosos, ya que las
proteínas desempeñan un papel
biológico importante en los seres vivos.
 El punto isoeléctrico de una proteína va
a ser de gran importancia en su estudio
ya que el manejarlo nos permitirá la
extracción de sustancias o llevar a cabo
procesos de gran importancia como son
la purificación.
Bibliografía
‫ ﺶ‬Campbell, M., Farrel, S., (2016),
Bioquímica, Vol. 1, 8va. Edición, CENGAGE
Learning, México.
‫ ﺶ‬Fonaguera J. y G. Gómez (2004),
“BIOQUIMICA: LACIENCIA DE LA VIDA”,
Editorial de la Universidad Estatal a
Distancia (2004).
‫ ﺶ‬Nelson, D.L. y Cox, M.M. (2005). Lehninger
“Principios de Bioquímica” 4ª Edición. Ed.
Omega.