AMINOÁCIDOS Y PROTEÍNAS

Leidy Mayerli Zambrano

Jhon ibarguen

Entregado: abril 06 de 2011

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RESUMEN

En la practica aminoácidos y proteínas se demostraron 2 aspectos básicamente, el primero de ellos

como haciendo uso de las propiedades físicas y químicas de los aminoácidos como son el caso de la
carga eléctrica podemos separar los aminoácidos por medio de la electroforesis, pues estos
emigraran hacia el electrodo opuesto a su carga, en este punto se utilizaron la alanina, la leucina y el
acido aspártico, utilizando la cromatografía los podemos separar de acuerdo a la distancia de
migración que cada uno realice con respecto a la distancia de migración efectuado por el disolvente
utilizado, se obtuvo que la alanina tiene un Rf de 0.52, el acido aspartico uno de 0.2 y la leucina un
Rf de 0.74, otro aspecto también importante que se demostró es como estas mismas propiedades nos
ayudan a identificarlas como en el caso de la ninhidrina que reacciona con ellos para dar
compuestos purpura con excesión de la prolina y la hidroxiprolina, otras técnicas de identificación
son la prueba de biuret y la xantoproteica que se basan en presencia de enlaces peptídicos y
aminoacidos con anillos aromáticos en su estructura respectivamente, un aspecto igualmente
estudiado fue la coagulación de las proteínas que puede ocasionarse por la desnaturalización de las
mismas si por ejemplo son calentadas, a reaccionan con acidos fuertes, o pueden deberse a una
disminución de la solubilidad con el agua como ocurre con el sulfato de amonio, También se
estudio el efecto salting in.

Palabras Claves:

Cromatografía, electroforesis, Albúmina, Insolubilización, Reacciones colorimétricas, aminoácidos

INTRODUCCIÓN

Las proteínas son las biomoléculas que desempeñan uno de los papeles más importantes para la
vida, son muy diversas y versátiles. Por un lado, tienen un gran número de funciones en las células
de todos los seres vivos, formando parte de la estructura básica de los tejidos; por el otro, son
demasiado importantes en las funciones metabólicas y reguladoras, participando en funciones
vitales para el crecimiento y desarrollo de los organismos. Igualmente, hacen parte del código
genético de cada individuo. Su abundancia es enorme, están constituidas por muchas unidades
estructurales simples que forman cadenas. Estas macromoléculas se componen principalmente de C,
O, H y N, muchas de ellas además, contienen S y P; son complejas y de alto peso molecular (Hart,
2007).

Las proteínas se componen esencialmente de aminoácidos, estos se unen en un número pequeño

para dar lugar a un péptido; cuando hay hasta 10 de estos encadenados, se considera que se tiene un
oligopéptido, si el número es mayor, se tiene un polipéptido, y si se cuenta con más de 50 péptidos,
se está hablando de una proteína. En el medio, existen muchas proteínas formadas por varios miles
de péptidos (Hart, et al. 2007).

Los aminoácidos, las moléculas esenciales de las proteínas, se caracterizan por poseer un grupo
carboxilo y uno amino. La principal función de estos es la regeneración constante de las proteínas,
las cuales son consumidas en el metabolismo normal de los seres vivos. Se encuentran en los
alimentos, pero no de manera individual sino en cadenas de péptidos, formando proteínas. Muchas
sustancias las captan y las desdoblan por hidrólisis, facilitando la absorción de estas en la digestión.
Para el ser humano hay 8 aminoácidos indispensables, si alguno de estos falta, no será posible la
síntesis de proteínas en la que se requiere dicho aminoácido y esto causa trastornos en el organismo
(Garrido et al, 2005). Los aminoácidos pueden clasificarse según la naturaleza de su grupo R, y por
lo tanto, de acuerdo a esta clasificación, las reacciones que dan son distintivas de los ácidos
carboxílicos y de aminas, debido a la presencia en su estructura de dichos grupos funcionales. Las
diferentes pruebas, como la reacción con ninhidrina, la de Biuret y la xantoproteica, permiten
identificar, la primera, la determinación cuantitativa de aminiácidos, la segunda, la presencia de
enlaces peptídicos y la última, identificar anillos aromáticos (Hart, et al, 2007)

La cromatografía sobre papel permite la separación e identificación de aminoácidos gracias a la

migración que realizan por medio de un solvente. Fundamentalmente, este es un proceso de
distribución entre una fase acuosa estacionaria: agua del solvente más celulosa y, una fase orgánica
móvil: pasa por encima a través de la celulosa impregnada de agua. El método ascendente es aquel
en que la muestra se coloca en la parte baja del papel, que se sumerge en el solvente revelador del
fondo del recipiente. Para ello, se usa papel filtro Whatman #1, el cual se compone de celulosa a
base de “linters” de algodón, sin cola ni agregados solubles (tampoco solubles en solventes
orgánicos). Es homogéneo y corre con lentitud, es decir que se necesita una hora o más para lograr
la ascendencia del solvente (Cramer, 1958; Ayres, 1968). La ninhidrina es muy sensible e ideal para
la detección de aminoácidos en cromatogramas y su determinación cuantitativa en fracciones de
columnas debido a su coloreada reacción morada con -aminoácidos (Plummer, 1978).

La mayoría de las moléculas biológicas poseen una carga eléctrica determinada, y esta depende de
la magnitud de la molécula, del pH y de la composición del medio en el cual se halle. Si a una
solución de moléculas cargadas se le aplica un campo eléctrico, estas moléculas migraran hacia los
electrodos de polaridad opuesta a la suya. Este principio se usa en electroforesis para separar
moléculas que poseen cargas diferentes. La base para llevar a cabo este experimento fue también el
papel Whatman, humedecido totalmente en la solución tampón y dispuesto hacia los polos del
aparato de electroforesis (Bohinski, 2001).
El objetivo principal de la practica fue separar aminoácidos experimentalmente por medio de la
aplicación de técnicas como la electroforesis y la cromatografía, y conocer el fundamento de
dichas técnicas, también identificar aminoácidos haciendo uso de sus propiedades físicas y
químicas. A nivel de proteínas determinar y fundamentar cuando una proteína puede
desnaturalizarse.

MATERIALES Y MÉTODOS

Los materiales y el procedimiento de la práctica de laboratorio corresponde con el indicado en:

Guía de Laboratorio de Biología Celular y Bioquímica I, Aminoácidos y proteínas; Universidad del

Valle, Cali.

RESULTADOS

En la practica de laboratorio se realizaron experimentos que permitieron la identificación y

separación de aminoácidos, y otros donde se evidencio la coagulación o desnaturalización de las
proteínas.

Separación de aminoácidos por medio de la cromatografía de papel: en este punto se utilizo

papel Whatman # 1, con el fin de observar que desplazamiento de la alanina, el acido aspártico, la
leucina y una mezcla entre los 3 aminoácidos. Se mide la distancia de migración del disolvente y la
distancia de migración de cada uno de los aminoácidos se tomo desde el centro de la mancha y se
encuentra el Rf para cada uno de ellos, en la tabla N° 1 se muestran el valor de Rf para cada
aminoácido y en la figura N° 2 el desplazamiento realizado por los mismos.

𝑑𝑖𝑠𝑡𝑎𝑛𝑐𝑖𝑎 𝑑𝑒 𝑚𝑖𝑔𝑟𝑎𝑐𝑖𝑜𝑛 𝑑𝑒𝑙 𝑎𝑚𝑖𝑛𝑜𝑎𝑐𝑖𝑑𝑜

𝑅𝑓 =
𝑑𝑖𝑠𝑡𝑎𝑛𝑐𝑖𝑎 𝑑𝑒 𝑚𝑖𝑔𝑟𝑎𝑐𝑖𝑜𝑛 𝑑𝑒𝑙 𝑠𝑜𝑙𝑣𝑒𝑛𝑡𝑒

La distancia de migración del solvente fue de 8.5 Cm.

Tabla N° 1: distancia de migración y Rf de los aminoácidos alanina, leucina y acido aspártico.

MIGRACION
AMINOACIDO (Cm) Rf
Alanina 4,5 0,52
A. aspartico 1,7 0,2
Leucina 6,3 0,74
Figura N° 2. Migración realizada por los aminoácidos estudiados.

Separación de aminoácidos por medio de electroforesis: para este procedimiento nuevamente se

utilizo el papel Whatman # 1, y con la ayuda del aparato de electroforesis se determino la carga
electrica de 3 aminoácidos (alanina, ácido aspártico y lisina), de a cuerdo a su desplazamiento pues
cada una migro hacia su electrodo de su polaridad opuesta, los resultados se muestran en la tabla N°
3 y en la figura N° 4 se muestra el desplazamiento sufrido por cada aminoácido.

Tabla N° 3: aminoácidos y la determinación de su carga eléctrica.

CARGA
AMINOACIDO ELECTRICA
acido aspartico negativa
Alanina neutra
Lisina positiva

Figura N° 4: imagen de la ubicación de los aminoácidos, en el campo eléctrico presente en el papel

Whatman. Parte derecha polo positivo con el acido aspártico en el, parte izquierda polo negativo
con la lisina y la alanina en el.
Reacción de los aminoácidos con la ninhidrina: es este punto se evaluó la reacción de 3
aminoácidos con el reactivo de ninhidrina, en un principio el compuesto contenido en los tubos de
ensayos era translucido, pero una vez se calentaron estos cambiaron de color. Los resultados
obtenidos se muestran en la tabla N° 5 y gráficamente en la figura N° 6.

Tabla N° 5: coloración presentada por los tubos después de haber sido calentados.

AMINOACIDO +
COLORORACION
NINHIDRINA
Arginina azul oscuro
Glicina azul oscuro intenso
Prolina amarilla

Figura N° 6: apariencia de los aminoácidos mezclados con ninhidrina, después de haber sido
calentados.

Coagulación de una proteína: para este punto se dispuso de 5 tubos de ensayo con 3 ml de
solución de albumina al 2%. El primer tubo de ensayo se calentó hasta que la albumina comenzó a
coagularse este momento se pudo identificar porque la albumina comenzó a espesarse y a formar
pequeñas partículas gelatinosas, esto ocurrió a una temperatura de 44°C.

Al segundo tubo de ensayo se le agrego 4 ml de acetona y se observo la formación de 2 fases, la

primera de color blanco y predominante (sedimento), la segunda translucida opaca (sobrenadante),
con el paso del tiempo se formo una tercera capa en la parte superior translucida. Esto se muestra en
la figura N° 7.

Figura N° 7: imagen que muestra apariencia de la albumina mezclada con acetona.

Al tercer tubo de ensayo se le añadió 1 ml de HCl 9N y se evidencio la formación de una solución
homogénea de color blanco, muy espumosa y densa, como se muestra en la figura N° 8.

Figura N° 8: imagen que muestra la apariencia de la albumina mezclada con HCl.

Al cuarto tubo de ensayo se le agrego 2 ml de NaCl al 20% y se noto que el contenido del tubo de
ensayo permaneció con una sola fase translucida pero mas opaca, esto se muestra en la figura N° 9

Imagen N° 9: imagen que muestra la apariencia de la albumina mezclada con NaCl.

El quinto tubo se utilizo como control para determinar si con los tubos restantes había o no ocurrido
algún tipo de reacción.

Insolubilización reversible e irreversible: se tomaron 2 tubos de ensayo con 5 ml de solución de

albumina cada uno.

Al primer tubo de ensayo se le agregaron 2.5 g de sulfato de amonio, la manera de hacerlo fue en
pequeñas porciones y agitando constantemente, el procedimiento seguido y los resultados de dicho
procedimiento se muestran en la tabla N° 11.

Figura N° 10: imagen de la apariencia presentada por la álbumina mezclada con sulfato de amonio.
Tabla N° 11 resultados de una insolubilización reversible con sulfato de amonio.

PROCEDIMIENTO RELIZADO A 5
RESULTADO OBTENIDO
ML DE SOLUCION DE ALBUMINA
Paso de ser una solución translucida turbia, a una
Agregar 2,5 g de sulfato de amonio. mezcla homogénea color blanco con espuma y
densa.
se formo un sedimento de color blanco, con
Centrifugar a 3000 r.p.m por 10
apariencia gelatinosa pues aunque era compacto no
minutos
era muy solido
El sedimento se diluyo en el agua y se torno
Agregar 4 ml de agua destilada al
translucida turbia, es decir no hay diferencia entre la
sedimento
solución original de albumina y esta.

Al tubo N° 2 se le agrego 1 ml de acido tricloroacetico al 50%, el procedimiento seguido y los

resultados obtenidos se tabulan en la tabla N° 12.

Tabla N° 12 resultados de una insolubilización irreversible con acido tricloroacetico.

PROCEDIMIENTO RELIZADO A 5
ML DE SOLUCION DE RESULTADO OBTENIDO
ALBUMINA
se evidencio la formacion de 2 capas, un
Agregar 1 ml de acido tricloro acetico sobrenadante trnaslucido y un precipitado que
contiene la proteina de color blanco muy compacto.
Centrifugar a 3000 r.p.m por 10
se formo un sedimento de color blanco, solido
minutos
el sedimento se disolvio en el agua, quedando de un
Agregar 4 ml de agua destilada al
color blanco, espeso. En comparacion con la
sedimento
solucion original no son iguales

Figura N° 13: imagen de la apariencia presentada por la albumina mezclada con acido
tricloroacetico.

Algunas reacciones colorimétricas de las proteínas: en este punto se llevaron a cabo 2 reacciones
la de biuret y la xantoproteica.
La reacción de biuret es una prueba colorimétrica utilizada para evidenciar la presencia de
proteínas, para determinar si la prueba es positiva o no el compuesto pasa de un color azul a violeta
en presencia de proteínas y a rosa en presencia de polipéptidos de cadena corta.

Para esta prueba se utilizaron 2 tubos de ensayo, el primero con 3 ml de solución de albumina y el
segundo con 3 ml de agua destilada. Los resultados obtenidos se muestran en la tabla N° 14.

Tabla N° 14 resultados obtenidos cuando se llevo a cabo la reacción de biuret en albumina y agua
destilada.

TUBO DE ENSAYO 3 ml de NaOH al 20% 1 ml de sulfato cúprico

Solución translucida turbia, es

La solución se torno de un
decir que no ocurrió ningún
3 ml de solución de albumina color violeta intenso
cambio con respecto a la solución
homogénea.
de albumina original.
La solución se torno de un
3 ml de agua destilada solución translucida color azul claro con la
presencia de una fase.

En la imagen N° 15 se muestra la coloración obtenida en los tubos de ensayo.

Figura N° 15: coloración obtenida con la reacción de biuret. Parte derecha agua destilada, parte
izquierda solución de albumina.

La reacción xantoproteica es una prueba cualitativa que determina si una proteína contiene en su
estructura aminoácidos con anillos aromáticos, si la prueba es neutralizada la solución se torna de
un color amarillo.

En esta prueba se utilizaron 2 tubos de ensayo, uno con 3 ml de solución de albumina y el segundo
con 3 ml de agua destilada. Los resultados obtenidos se muestran al la tabla N° 16.
Tabla N° 16 resultados obtenidos cuando se llevo a cabo la reacción xantoproteica en albumina y
agua destilada.

3 ml de acido
TUBO DE ENSAYO calentar 3 ml de hidroxido de amonio
nitrico
sedimento de color amarillo pálido,
seguido de una fase acuosa
la solución se torna
translucida, continua el mismo
solución muy densa, y se
3 ml de solución de sedimento de color amarillo ,
homogénea de forman pequeños
albumina posteriormente una fase de un
color blanco grumos de color
color amarrillo mas intenso y por
amarrillo
ultimo un sobrenadante translucido
con grumos amarillos en el.
3 ml de agua permanece
no ocurre nada no ocurre nada
destilada translucida

Figura N° 17: apariencia del tubo de ensayo que contenía originalmente la solución de albumina y
fue sometida a la reacción xantoproteica.

DISCUSIÓN

Para llevar a cabo la separación de los aminoácidos alanina, leucina y acido aspártico, se utilizo la
cromatografía ascendente de papel, en la cual la celulosa que conforma las hojas de papel constituye
un medio de soporte muy útil pues este polisacárido absorbe el agua en medio de sus fibras,
formando de esta manera la fase hidrofilica estacionaria (Plummer, 1981). Para identificar los
aminoácidos que intervinieron en la cromatografía se tiene en cuenta la razón entre la distancia que
ha migrado el compuesto y la recorrida por el solvente (Rf), pues este valor es mas o menos
constante para un compuesto, sistema de solventes y clase de papel determinados si se controlan
condiciones como concentración de soluto, temperatura y pH. ( Plummer, 1981). La cromatografía
ascendente tiene la ventaja de que la separación se pueda hacer en 2 dimensiones.

La cromatografía en papel se utiliza principalmente para separar solutos hidrofilicos, el papel

permite que los disolventes polares como el agua se adhieran a los grupos hidroxilos terminales
presentes en el polímero formado mediante puentes de oxigeno entre unidades de glucosa anhidra,
lo que hace que la celulosa sea un alcohol polihidroxilado (Varcancel, 1988), el papel al contener
pequeñas cantidades de grupos carboxílicos, lo que confieren al papel un cierto carácter de
cambiador catiónico que puede provocar la retención de solutos macromoleculares. El disolvente
utilizado como fase móvil depende de las características de los solutos a separar, este disolvente
sube por capilaridad a través del papel, desplazando a los solutos a distintas alturas. (Varcancel,
1988). Los aminoácidos más pesados se quedaban abajo debido a que el solvente no los podía
arrastrar, los más livianos fueron hacia la parte superior del papel, siendo así el más pesado, el ácido
aspártico y el más liviano la leucina. La alanina fue término medio.

Otro método que se uso para la separación de aminoácidos fue la electroforesis, con la cual se
separaron e identificaron la alanina, el acido aspártico y la lisina. Esta técnica se basa en la carga
eléctrica de las moléculas biológicas que se desean separar, sometidas a un campo eléctrico, las
cuales migraran hacia los electrodos de polaridad opuesta, en donde la movilidad de la molécula
dependerá de la viscosidad del medio, del tamaño, de la forma y de la carga de la molécula,
mientras que la movilidad electroforética depende de los grupos ionizables presentes en la
superficie de la partícula, mientras que el signo y la magnitud de la carga que poseen los grupos
ionizables dependen de la fuerza ionica y el pH del medio. (Plummer, 1981). En la electroforesis el
pH es de suma importancia en la separación electroforética, en el punto isoeléctrico el aminoácido
esta como “zwitterion”, sin carga neta es decir en forma molecular por lo que carece de movilidad
ionica. (Varcancel, 1988), en la practica se utilizo un pH de 5.0, pues si el pH elegido es cercano a
el PI de alguno de los aminoácidos presente en la muestra este tendrá una menor velocidad de
desplazamiento en comparación a los demás aminoácidos.

La alanina es un aminoácido no polar, de carácter hidrofobico y neutro por lo cual durante la

electroforesis no tubo mayor desplazamiento pues al no estar cargado positiva ni negativamente,
ninguno de los electrodos lo atrajo para que tuviera algún tipo de desplazamiento, este
conocimiento previo permitió su rápida identificación, caso contrario ocurrió con el acido aspártico
que al ser un aminoácido cargado negativamente, acido ya que su grupo R posee una carga negativa
neta de pH 7.0, se desplazo hacia el electrodo positivo debido a la gran fuerza de atracción que
produjo el campo eléctrico, a diferencia del acido aspártico, la lisina que al ser una aminoácido
básico, en el cual su grupo R posee una carga positiva neta a pH 7.0 se desplazo lógicamente hacia
el electrodo negativo por el mismo motivo que lo hizo el aspartato. Esto se evidencio con la
utilización del reactivo de ninhidrina sobre el papel Whatman #1, que por el par de electrodos del
aparato de electroforesis, adquirió un campo electromagnético. Los aminoácidos se observaron
como manchas violetas en el papel y efectivamente se comprobó que los aminoácidos habían
migrado hacia el electrodo opuesto a su carga.

La ninhidrina (hidrato de tricetohidrinceno), es un agente reductor poderoso, el cual reacciona con

todos los α-aminoácidos a un pH entre 4.0 y 8.0 para dar un compuesto color purpura. Para el caso
de la prolina y la hidroxiprolina, ya que al ser iminoacidos la cloración obtenida no es purpura sino
de un color amarillo. (Plummer, 1981), este reactivo un reactivo muy común para visualizar las
manchas o bandas de aminoácidos que se han separado por cromatografía o electroforesis. El color
violeta intenso se debe al anión estabilizado por resonancia denominado purpura de rubermann, y
siempre será la misma coloración independiente de cual sea la estructura del aminoácido utilizado,
pues la cadena lateral del aminoácido se pierde en forma de aldehído. (Wade, 2004)
Figura N° 18: imagen de la reacción de un aminoácido con ninhidrina (Wade, 2004)

Para observar el proceso de coagulación de una proteína se llevaron a cabo 4 experimentos unos de
ellos consistió en calentar la albumina del huevo motivo por el cual sufrió una precipitación
irreversible, conocida comúnmente como desnaturalización, este fenómeno también pudo ser
causada por ácidos o bases fuertes. La desnaturalización produjo un cambio fundamental en la
albumina, pues destruyo toda su actividad fisiológica, es decir cambio su estructura secundaria.
(Morrison, 1959).

La desnaturalización de una proteína se lleva a cabo mediante la alteración del equilibrio de las
fuerzas débiles no enlazantes que mantienen la conformación nativa, una causa de desnaturalización
como se menciono en el párrafo anterior es el calentamiento pues las propiedades pues las
propiedades sensibles desde el punto de vista conformacional, como la rotación óptica, la
viscosidad y la absorción uv presentes en la albumina, sufren cambios abruptos por encima de un
estrecho rango de temperatura. Estos cambios hacen que el polipéptido se despliegue o derrita
cooperativamente. (Voet, 2006).

La disolución de un solvente orgánico, como la acetona o un alcohol, en una solución de proteína en

agua como ocurrió en el segundo experimento, para observar la coagulación de una proteína
disminuye la constante dieléctrica del disolvente, desplaza también algunas de las moléculas de
agua asociados con la proteína y reduce la concentración de agua presente en la solución. Estos
efectos tienden a disminuir la solubilidad de la proteína, y ello se utiliza frecuentemente en la
adición de estos disolventes para precipitar proteínas de sus soluciones. (Garrido, 2005)

El acido clorhídrico al ser un acido muy fuerte ocasiona la precipitación de una proteína, pues la
desnaturaliza como ocurrió cuando fue calentada.

Si se agregan a una solución de proteína en agua pura pequeñas cantidades de sal, disminuye el
coeficiente de actividad de la proteína y su solubilidad aumenta. A este fenómeno se le conoce
como “salting in” y se debe a las fuerzas de atracción entre los iones de la proteína y los iones de la
sal. A concentración baja el aumento en el logaritmo de la solubilidad de la proteína es proporcional
a la fuerza iónica del disolvente. Este fenómeno se aplica por que al añadir una pequeña cantidad de
iones extraños se aumenta el desorden molecular, con ellos la entropía se hace mayor y no habiendo
variación de entalpia, el cambio de energía libre es negativo y esto supone una tendencia espontanea
al aumento de solubilidad. (Garrido, 2005)

La albumina se precipita solo cuando la solución se satura con sulfato de amonio a un pH cercano a
su punto isoeléctrico (Plummer, 1981). A concentraciones elevadas de sales muy solubles como,
sulfato amónico, se observa precipitación salina o “salting out” de las proteínas, la cual depende de
la disminución de la actividad del agua, lo que a su vez disminuye las interacciones solubilizantes
entre el agua y los grupos de la proteína. Es decir, que cuando aumenta mucho la cantidad de iones
extraños, la interacción proteína- proteína se hace mayor que la interacción agua- proteína, baja la
movilidad de las cargas proteicas y las proteínas se precipitan. (Garrido, 2005)

Es por esto que cuando se agrega mas agua a la solución la concentración de sulfato de amonio
disminuye, los que hace que las interacciones agua-proteína sean mayores que las interacciones
proteína- proteína. Este tipo de precipitación es reversible debido a que no se desnaturaliza la
proteína.

Por su parte el acido tricloroacetico, al ser un acido muy fuerte tiene el mismo efecto sobre la
proteína que el acido clorhídrico, o cualquier otro acido fuerte pues la desnaturaliza, causando la
precipitación de la proteína en solución. La coagulación se produce por la disociación del ion de
cloro y su formación en el ion acetato, el cual es ácido; quienes compiten con los grupos cargados
positivamente de las proteínas disueltas en las moléculas de agua disponibles para su solvatación.
Con esto se disminuye la hidratación de la albúmina y causa un aumento en las interacciones de las
proteínas. El cambio a un pH ácido provoca el quiebre de los enlaces de disulfuro, los cuales
determinan la estabilidad de la estructura tridimensional de la albúmina, por lo cual es
desnaturalizada, perdiendo así su propiedad física de solubilidad (Garrido, 2005)

Las proteínas reflejan las propiedades químicas de los aminoácidos presentes en ellas, por lo que
algunas reacciones alteran los enlaces peptídicos presentes en estas; esto fue lo que sucedió con la
reacción xantoprotéica. Los resultados de diferentes reacciones permiten identificar, que de acuerdo
a la naturaleza de algunos reactivos se puede reconocer algunos aminoácidos presentes en algunas
proteínas, esto se debe a la composición, estructura, pH, etc. Sin embargo, no solo hay pruebas que
reconocen la presencia o ausencia de determinados aminoácidos, hay otras, como la reacción de
Biuret, que identifica en una solución la concentración de una proteína, tiñendose la coloración de
acuerdo a la concentración de las mismas.

En la reacción de Biuret, se observo la aparición de una coloración violeta, la cual resulta cuando
los iones Cu+2 en medio alcalino se complejan con los electrones desapareados de los átomos de
nitrógeno y oxígeno presentes en los enlaces de las proteínas. Esta reacción está dada por aquellas
sustancias cuyas moléculas contienen dos grupos carbamino (-CO.NH) unidos directamente o a
través de un solo átomo de carbono o nitrógeno. El reactivo de Biuret contiene Cu2SO4 en solución
acuosa alcalina, gracias a la presencia de NaOH. La reacción se basa en la formación de un
complejo de coordinación entre los iones Cu+2 y los pares de electrones no compartidos del
nitrógeno que forma parte de los enlaces peptídicos (Campbell, 2007).

En la reacción Xantoproteica, se observó que la coloración de la solución pasa de incolora a un

color amarillo. Esta prueba sirve para caracterizar a los aminoácidos aromáticos, debido a que se
produce la nitración del anillo bencílico presente en los aminoácidos prolina y triptófano presentes
en la albúmina, obteniéndose nitrocompuestos de color amarillo, que se vuelven anaranjados en un
medio fuertemente alcalino (Smith y Cristol, 1972). La adición de ácido nítrico concentrado a
soluciones que contienen proteína, generalmente causa la formación de un precipitado blanco que
cambia a amarillo al calentarlo. El color se empieza a convertir en anaranjado cuando la solución se
vuelve básica por la formación de sales, en el caso de la práctica, al agregar hidróxido de sodio se
observa que el color amarillo inicial cambió gradualmente a anaranjado, obteniendo un resultado
positivo para esta reacción.

Para concluir podemos decir que los aminoácidos al poseer en su estructura un grupo amino y un
grupo carboxilo, lo cual les confiere la capacidad de actuar bien sea como ácidos o como bases,
dependiendo de las condiciones en las cuales se encuentre es un factor muy importante en el
momento de separarlos o de identificarlos, esto se demuestra perfectamente en la electroforesis pues
donde debido a la carga eléctrica que posee cada aminoácido migraran a los electrodos de su polo
opuesto permitiendo identificarlos si están en una mezcla o separados. Esta característica de los
aminoácidos los hace muy reactivos permitiendo el desarrollo de numerosas reacciones que nos
permiten identificarlos basándose en la estructura que poseen, como en el caso de la reacción
xantoproteica en la cual se puede identificar si los aminoácidos que conforman una proteína poseen
en sus estructuras anillos aromáticos, o si forman entre ellos enlaces peptídicos como ocurre con la
reacción de biuret. Se observo que la desnaturalización es el fenómeno por el cual una proteína
pierde su actividad fisiológica debido al cambio abrupto de sus propiedades y que esta puede darse
por el calentamiento o por la reacción con ácidos fuertes, mientras que la solubilidad de las
proteínas pueden se reversibles o irreversibles, el primero se puede mencionar el fenómeno
presentado cuando interactúan con grandes concentraciones de sal y el segunda se debe a la
desnaturalización.

BIBLIOGRAFIA

-Campbell, P. 2007. Bioquímica ilustrada: Bioquímica y biología molecular en la era posgenómica.

Editorial Elsevier, España, pp. 242.

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