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TRABAJO DE GRADO
Investigador principal
Hugo Diez Ortega
correo electronico: hugo.diez@javeriana.edu.co
numero de telefono:3143326309
Adriana Rodriguez
correo electronico: aciodaro@gmail.com
numero de telefono :3123053867
Coinvestigadores
Yuri Valeria Delgado S
correo electronico: Delgadosyv@javeriana.edu.co
numero de teléfono: 3153347190
Gianella Priscila Calero O
correo electronico: Giacalero@javeriana.edu.co
numero de teléfono: 3176353413
Alexandra Castillo G
correo electronico: Alexandracastillo@javeriana.edu.co
numero de teléfono: 3178519290
Pregunta de investigación
1
¿Cuáles son los patrones de presencia de los genes considerados blancos terapéuticos Esp,
Asa 373, gelE, Cyl A y Efa A y los perfiles de susceptibilidad antibiótica de Enterococcus
faecalis aislados de muestras relacionadas con el tratamiento de endodoncia?
Justificación:
Los Enterococcus son bacterias grampositivas que habitan en el interior del tracto
gastrointestinal y también pueden ser encontrados en la saliva. Han sido identificados en
endodoncia por su capacidad de persistir en los túbulos dentinarios por largos periodos de
tiempo y ser el principal causante de reinfección y por ende del fracaso endodóntico. Por
ello es importante comprender el rol que juegan los factores de virulencia del Enterococcus
faecalis ya que estos promueven la adaptación y supervivencia en condiciones ambientales
adversas y por ende generan una resistencia frente a todos los antimicrobianos disponibles.
Debido a esto es importante definir el perfil de susceptibilidad a antibióticos de esta
bacteria para poder diseñar en un futuro, estrategias terapéuticas para eliminarla.
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investigando. Este ítem será utilizado para la discusión en el artículo final.
Abordajes de técnicas q vamos a usar
E faecalis
Resumir los artículos, estado del arte
Objetivos específicos
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probabilístico, intencional, a partir de 50 muestras aisladas de Enterococcus faecalis
provenientes de pacientes que acudieron a consulta de endodoncia en la Facultad de
Odontología de la Pontificia Universidad Javeriana. Obtenidos de trabajos previos de
investigación y de los cuales se cuenta con el respectivo consentimiento informado por
parte de los pacientes y del aval del comité de investigación y ética.
Criterios de inclusión:
La cepa identificada en trabajos previos de investigación como E. Faecalis, mediante
MALDI-TOF siguiendo la metodología de Clark, y colaboradores 2013, que conserven un
100% de pureza y viabilidad al ser sometidas al descongelamiento.
Muestras:
Las muestras de Enterococos faecalis proveniente del cepario del laboratorio de
microbiología de Ciencias Básicas de la Pontificia Universidad Javeriana, serán
recuperadas mediante el proceso de descongelamiento gradual propuesto por Daryousb,
2010. Conservadas en caldo BHI con 30 % de glicerol/oxacilina suplementada se
descongelarán 15-20ºC por 30 minutos y posteriormente a temperatura ambiente por 30
minutos. Previa homogenización se sembrarán en medio altamente selectivo, Caldo
Enterococos (Becton Dickinson Microbiology Systems, Cockeysville, MD, USA) e
incubará de 24-48 horas a 37ªC y posterior pase e incubación en Agar Chromocult
Enterococci 37ºC por 24-48 horas. A partir del medio sólido se usarán colonias puras,
aisladas y libres de contaminación para efectuar el proceso.
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PRV Piruvato Pozos internos de
control
Para el perfil de susceptibilidad el panel utiliza un set de pozos con antibióticos marcadores
para Gram positivos
Para el cumplimiento del segundo objetivo se buscará evaluar en todos los aislados la
presencia de genes de virulencia en cada uno de los aislados. Las colonias seleccionadas se
someterán a preenriquecimiento en BHI incubado por dos horas hasta alcanzar el tubo 0,5
de MacFarland.
A partir del caldo enriquecido se extraerá el ADN mediante el kit de aislamiento kit
Promega Wizard Genomic DNA Purification Kit™ (Cat # A1125) siguiendo las
instrucciones recomendadas por el fabricante. La concentración del ADN genómico se
determinará espectrofotométricamente a 260/280nm (Nanodrop 2000; thermo Scientific,
Wilmintong, DE, USA). Para la amplificación de los genes se usarán primers específicos
para
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Asa/Asa373 (producto de sustancia de agregación).
Esp (proteína de superficie).
Ace (Antígeno de unión a colágeno).
gelE (gelatinasa).
Cada detección seguirá los protocolos previamente establecidos por otros autores utilizando
las secuencias y referencias qué a continuación se nombran:
8. Cronograma de Actividades:
El cuadro de cronograma de actividades debe reflejar en forma muy concreta el
proyecto, con sus tiempos, secuencia y duración de cada actividad. El tiempo
máximo de duración del proyecto se establece en los términos de referencia de la
convocatoria a la cual aplica.
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Meses
Actividad a desarrollar
1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18
Repique de las sepas
Cultivo de sepas
Extracción de ADN
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9. TABLAS DE PRESUPUESTO
FUENTES
RUBROS TOTAL
Investigadores PUJ
PERSONAL 0 19.940.000 19.940.000
USO DE EQUIPOS 0 6.179.666 6.179.666
SOFTWARE 0 0
MATERIALES Y
0 8.000.000 8.000.000
SUMINISTROS
SERVICIOS TÉCNICOS
1.400.000 0 1.400.000
(Microscopia electrónica)
SALIDAS DE CAMPO 0 0 0
MATERIAL
0 0 0
BIBLIOGRÁFICO
PUBLICACIONES Y
0 0 0
PATENTES
TOTAL
TOTAL
* Agregar una columna para cada fuente de financiación diferente de la entidad que presenta
el proyecto.
TOTAL
TOTAL
Pueden agruparse por categorías, ej: vidriería, reactivos, papelería, etc., suscripciones a revistas,
libros, etc.
TOTAL