Capítulo 1.

Fundamentos bioquímicos

1. Conceptos previos
Las enzimas son catalizadores químicos que aceleran las reacciones químicas a
temperaturas fisiológicas al reducir su energía de activación. Son generalmente
proteínas que consisten en una o más cadenas polipeptídicas. Tienen un sitio activo que
proporciona un entorno químico único, formado por ciertos grupos de aminoácidos R
(residuos). Este entorno único es perfectamente adecuado para convertir reactivos
químicos particulares para esa enzima, llamados sustratos, en intermedios inestables
llamados estados de transición. (1)

Se cree que las enzimas y los sustratos se unen con un ajuste inducido, lo que significa
que las enzimas sufren ligeros ajustes conformacionales al contacto del sustrato, lo que
conduce a una unión óptima y completa. Las enzimas se unen a los sustratos y catalizan
las reacciones de cuatro maneras diferentes: uniendo los sustratos en una orientación
óptima, comprometiendo las estructuras de enlace de los sustratos para que los enlaces
se puedan romper más fácilmente, proporcionando condiciones ambientales óptimas
para que se produzca una reacción, o participando directamente en su reacción química
formando enlaces covalentes transitorios con los sustratos. (2)

Las enzimas pueden clasificarse, según la reacción que catalizan en:

Fig 0. Clasificación clásica de las enzimas (2)

 2. Regulación enzimática. Fosforilación
La acción enzimática debe regularse de modo que en una célula dada en un momento
dado, las reacciones deseadas se catalicen y las reacciones indeseadas no se
catalicen. Las enzimas están reguladas por condiciones celulares, como la temperatura
y el pH. También están reguladas a través de su ubicación dentro de una célula, a veces
compartimentados de modo que solo pueden catalizar reacciones en determinadas
circunstancias. La inhibición y activación de enzimas a través de otras moléculas son
otras formas importantes en que las enzimas están reguladas. Los inhibidores pueden
actuar de manera competitiva, no competitiva o alostéricamente. En general, la
regulación alostérica, es solo cualquier forma de regulación donde la molécula
reguladora (un activador o un inhibidor) se une a una enzima en algún lugar diferente al
sitio activo. El lugar de unión del regulador se conoce como sitio alostérico. (3)

La fosforilación-desfosforilación de proteínas es un proceso muy versátil y selectivo. No

todas las proteínas están sujetas a fosforilación; esta última solo se dirige a uno, o un
pequeño grupo de los grupos hidroxilos sobre la superficie de una proteína.

La fosforilación reversible de proteínas es un mecanismo regulador importante que se

produce en organismos tanto procariotas como eucariotas. Se estima que existen
230,000, 156,000 y 40,000 sitios de fosforilación en humanos, ratones y levaduras,
respectivamente. Las quinasas fosforilan las proteínas y las fosfatasas defosforilan las
proteínas. Muchas enzimas y receptores se activan o desactivan mediante la
fosforilación y la desfosforilación. La fosforilación reversible produce un cambio
conformacional en la estructura de muchas enzimas y receptores, haciendo que se
activen o desactiven. La fosforilación generalmente ocurre en residuos de serina ,
treonina , tirosina e histidina en proteínas eucarióticas. La adición de un fosfato (PO 4)
la molécula a un grupo R no polar de un residuo de aminoácido puede convertir una
porción hidrofóbica de una proteína en una porción polar y extremadamente hidrófila
de una molécula. De esta forma, la dinámica de las proteínas puede inducir un cambio
conformacional en la estructura de la proteína a través de la alostería de largo alcance
con otros residuos hidrofóbicos e hidrofílicos en la proteína. (2)

Uno de esos ejemplos del papel regulador que desempeña la fosforilación es la proteína
supresora de tumores p53 . La proteína p53 está muy regulada y contiene más de 18
sitios de fosforilación diferentes. Su activación provocar la detención del ciclo celular,
que puede revertirse en algunas circunstancias, o la muerte celular apoptótica. Esta
actividad ocurre solo en situaciones en las que la célula está dañada.
Tras la señal de desactivación, la proteína se defosforila de nuevo y deja de funcionar.
Este es el mecanismo en muchas formas de transducción de señales, por ejemplo, la
forma en que la luz entrante se procesa en las células sensibles a la luz de la retina.

La interrelación entre proteínas kinasas y fosfatasas, entre las consecuencias funcionales

de la fosforilación en diferentes sitios, entre sitios de fosforilación y sitios alostéricos, o
entre sitios de fosforilación y otros sitios de modificación covalente, proporciona la base
para redes reguladoras que integran múltiples informes de entrada ambientales para
desencadenar una respuesta celular coordinada apropiada. (3)

Las funciones reguladoras de la fosforilación incluyen:

Termodinámica biológica de las reacciones que requieren energía. Fosforilación de

Na+/ K+ -ATPasa durante el transporte de iones de sodio (Na+) y potasio (K+) a través
de la membrana celular en la osmorregulación para mantener la homeostasis del
contenido de agua del cuerpo.

Media la inhibición de la enzima. Fosforilación de la enzima GSK-3 por AKT (proteína

quinasa B) como parte de la ruta de señalización de la insulina.

Importante para la interacción proteína-proteína a través de " dominios de

reconocimiento ".
La fosforilación de los componentes citosólicos de la NADPH oxidasa , una gran enzima
multi-proteína unida a la membrana presente en las células fagocíticas , desempeña un
papel importante en la regulación de las interacciones proteína-proteína en la enzima.

Importante en la degradación de proteínas. A finales de la década de 1990, se reconoció

que la fosforilación de algunas proteínas provoca su degradación por la ruta ubiquitina
/ proteasoma dependiente de ATP . Estas proteínas diana se convierten en sustratos
para ubiquitin ligasas E3 particulares solo cuando están fosforiladas. (5)
 3. Creatinfosfoquinasa (CPK)
La creatina quinasa (CK), también conocida como creatina fosfoquinasa (CPK) o
fosfocreatina quinasa , es una enzima transferasa expresada por diversos tejidos y tipos
de células. CK cataliza la conversión de creatina y utiliza adenosina trifosfato (ATP) para
crear fosfocreatina (PCr) y adenosina difosfato (ADP). Esta reacción de la enzima CK es
reversible y, por lo tanto, se puede generar ATP a partir de PCr y ADP. (6)

En los tejidos y células que consumen ATP rápidamente, especialmente el músculo

esquelético , pero también el cerebro, las células fotorreceptoras de la retina , las células
ciliadas del oído interno , los espermatozoides y el músculo liso , el PCr sirve como
reservorio de energía para la amortiguación y regeneración rápida del ATP en situ , así
como para el transporte de energía intracelular por el transbordador o circuito PCr. Por
lo tanto, la creatina quinasa es una enzima importante en dichos tejidos. (7)

Isoformas
La CK es una enzima compacta de alrededor de 82 kDa que se encuentra tanto en el
citosol como en la mitocondria de los tejidos donde la demanda de energía es alta. En
el citosol, CK se compone de dos subunidades polipeptídicas de alrededor de 42 kDa, y
se encuentran dos tipos de subunidades: M (tipo muscular) y B (tipo cerebral). Estas
subunidades permiten la formación de tres isoenzimas específicas de tejido: CK-MB
(músculo cardíaco), CK-MM (músculo esquelético) y CK-BB (cerebro). Típicamente, la
proporción de subunidades varía con el tipo de músculo: músculo esquelético: 98% MM
y 2% MB y músculo cardíaco: 70-80% MM y 20-30% MB, mientras que el cerebro tiene
predominantemente BB. En las mitocondrias hay dos formas específicas de CK
mitocondrial (Mt-CK): un tipo no sarcomérico llamado Mt-CK ubicuo expresado en varios
tejidos como cerebro, músculo liso y esperma, y un Mt-CK sarcomérico expresado en
músculo cardíaco y esquelético. (8)

La creatina cinasa de tipo cerebral también conocida como CK-BB es una creatina
quinasa que en los humanos está codificada por el gen CKB . Consiste en un homodímero
de dos subunidades idénticas de tipo cerebral CK-B. BB-CK es una enzima citoplasmática
involucrada en la homeostasis de la energía celular, con ciertas fracciones de la enzima
que se unen a las membranas celulares, ATPasas, y una variedad de enzimas que
requieren ATP en la célula. Allí, CK-BB forma microcompartimentos estrechamente
acoplados para la regeneración in situ de ATP que se ha agotado. La proteína codificada
reversiblemente cataliza la transferencia de fosfato "rico en energía" entre ATP y
creatina o entre fosfo-creatina (PCr) y ADP. Su entidad funcional es un homodímero (CK-
BB) en el cerebro y el músculo lisoasí como en otros tejidos y células tales como células
neuronales, retina, riñón, hueso, etc. En el corazón, un heterodímero (CK-MB) shahil que
consiste en una subunidad CK de tipo cerebral CK-B y una músculo CK-M la subunidad
tipo CK se expresa de manera prominente. Las proteínas codificadas CK-BB y CK-MB son
miembros de la familia de proteínas ATP: guanido fosfotransferasa . (9)

Niveles de CPK-BB más altos de lo normal:

Debido a que CPK-BB se encuentra principalmente en el cerebro y los pulmones, las

lesiones en cualquiera de estas áreas pueden aumentar los niveles de CPK-BB. El
aumento de los niveles de CPK-BB puede deberse a:

 Cáncer de cerebro
 Lesión cerebral (debido a cualquier tipo de lesión, incluido un accidente
cerebrovascular o hemorragia en el cerebro)
 Terapia electroconvulsiva
 Infarto pulmonar
 Incautación

Las lesiones del corazón, por ejemplo, un infarto de miocardio, conducen a daños de las
células musculares de corazón. Como las llamadas enzimas cardíacas creatina-quinasa
MB y troponina T están presentes en los músculos del corazón son adecuadas para
detectar daños en los músculos del corazón. En caso de enfermedad cardíaca se
encuentran aumentadas en el torrente sanguíneo y pueden detectarse mediante un
simple análisis de sangre. Además de las enzimas troponina T y CK-MB, hay también
enzimas cardiacas inespecíficas, lo que significa que aumentan en algunas otras
enfermedades y por tanto no facilitan una prueba clara de daño del músculo cardíaco.

Un daño cardíaco, como por ejemplo un infarto cardíaco, conduce a un aumento de

troponina T y CK-MB, pero su aumento varía a lo largo del tiempo tras el daño cardíaco.
La troponina T sube después de tres horas y la CK-MB después de unas cuatro a ocho
horas después del daño del músculo cardíaco, por ejemplo en un infarto de miocardio.

El médico evalúa la troponina T y la creatina quinasa MB siempre en relación con la

creatina quinasa total, porque existe otro tipo de creatinin-quinasa relacionada con los
músculos. Una parte mayor de cinco por ciento de CK-MB de la creatina quinasa total
indica daño del músculo cardíaco.

Hasta mediados de la década de 1990, la determinación de los niveles séricos de CK fue

una herramienta clave en el diagnóstico de infarto de miocardio (IM) en pacientes con
dolor torácico en los servicios de urgencias. Posteriormente, la función de diagnóstico
ha sido reemplazada, hasta cierto punto, por la troponina de proteína muscular. Sin
embargo, los niveles elevados de CK en suero todavía están estrechamente asociados
con el daño celular, la disrupción de las células musculares o la enfermedad. Estas
alteraciones celulares pueden causar que la CK se filtre de las células al suero
sanguíneo. La medición de la actividad CK en suero y la determinación de perfiles de
isoenzimas siguen siendo un indicador importante de la aparición de necrosis de células
musculares y daño tisular debido a enfermedad o trauma.

Ha habido una amplia discusión en la literatura sobre la importancia de los niveles

elevados de CK sérica después del ejercicio físico en relación con los grados de daño o
alteración de las células musculares. Si bien la razón de la liberación de CK en la
circulación es clara en casos como el infarto de miocardio, está menos claro por qué el
ejercicio físico de intensidad baja a moderada también debería dar como resultado la
liberación de CK al suero sanguíneo. (10)

Sin duda es confuso que el entrenamiento de resistencia provoca la mayor liberación

de CK y al mismo tiempo proporciona la mejor ruta para la hipertrofia muscular. La CK-
MM miofibrilar está unida a la línea M del retículo sarcoplásmico de las miofibrillas y
también se encuentra en el espacio de los sarcómeros de la banda I que brindan soporte
para los requerimientos de energía muscular. Por lo tanto, la enzima normalmente se
limita a la célula muscular, por lo que surge la pregunta: ¿aumentan los niveles de CK
después de un período de ejercicio representan un grado de daño muscular real y la
pérdida de la integridad de la célula muscular, o hay alguna otra explicación molecular
que no es daño celular permanente, pero una perturbación temporal o interrupción de
los procesos musculares? Una mayor comprensión de este tema podría tener
implicaciones significativas para la estrategia de ejercicio y el diseño del programa de
entrenamiento (rendimiento y recuperación). Esto es cierto, no solo para las
poblaciones atléticas sino también para las personas que participan en ejercicios
extenuantes como parte de su estilo de vida. En este artículo, examinamos la evidencia
y la opinión actuales relacionadas con la liberación de CK del tejido muscular esquelético
al suero sanguíneo en respuesta al ejercicio muscular.

Figura 1: Circuito de fosfocreatina

(PCr) que muestra la
refosforilación de la creatina (Cr)
en las mitocondrias utilizando ATP
derivado de la fosforilación
oxidativa (fosfato) y posterior uso
de PCr mitocondrial mediante la
creatina cinasa citosólica (CK)
para reabastecer el ATP de la
actividad muscular, adaptada de
Saks. (9)
Creatinquinasa mitocondrial. La creatina quinasa tipo U, mitocondrial, también llamada
creatina quinasa mitocondrial ubicua (uMtCK), está en humanos codificados por el gen
CKMT1A y B. Está presente en el espacio intermembrana mitocondrial, donde regenera
la fosfocreatina (PCr) a partir de ATP y creatina generadas mitocondrialmente.(Cr)
importado del citosol. (11)

CKMT1A. Existen cuatro tipos distintos de subunidades CK en el tejido de los mamíferos

, que son especies expresadas específicamente, etapa de desarrollo específicamente, y
tejido específico. Expresión ubicua, CKMT1A se encuentra en el espacio intermembrana
mitocondrial y forma moléculas homodiméricas y homooctaméricas que son fácilmente
interconvertibles. Como todas las otras isoenzimas CK, CKMT1A cataliza la transferencia
reversible del grupo γ-fosfato de ATP al grupo guanidino de Cr para producir ADP y PCr.
De acuerdo con la hipótesis de "transporte" ("shuttle") para el sistema CK, después de
la síntesis dentro de la matriz mitocondrial, el grupo γ-fosfato de ATP es transferido por
CKMT1A en el espacio intermembrana mitocondrial a Cr para producir ADP más PCr.
(Figura 1)

Como una enzima central para la energía de las células, CKMT1A a menudo se ve
afectada en situaciones patológicas. CKMT1A es conocido como un objetivo primario de
daño molecular oxidativo y inducido por radicales; y el deterioro de CKMT1A se ha
informado en isquemia, miocardiopatía y trastornos neurodegenerativos debido a la
falla en el mantenimiento de la homeostasis metabólica . Se ha informado
sobreexpresión de uMtCK para varios tumores con pronóstico precario y esta puede ser
la adaptación de las células cancerosas para mantener la alta tasa de crecimiento. (10)

Macroenzimas
Macro-CK tipo 1 es un complejo de CK
(la mayoría de las veces CK-BB) e
inmunoglobulina (la mayoría de las
veces IgG) y típicamente tiene un
tamaño superior a 200 kDa. Macro-CK
tipo 2 es un polímero de Mt-CK con
una masa molecular de más de 300
kDa. Estas formas de CK se expresan
durante la enfermedad y / o la
disfunción, por ejemplo, macro-CK 1
se asocia con enfermedad
cardiovascular y autoinmune y macro-
CK 2 con cáncer. (4)
La macrocreatincinasa tipo 1 es un complejo constituido por inmunoglobulinas IgG
dirigidas frente a la isoenzima BB de la creatincinasa. Su presencia en el plasma interfiere
las técnicas de inmunoinhibición utilizadas en los laboratorios de los servicios de
urgencias dando lugar a falsas elevaciones de la isoenzima CK-MB, lo que puede
ocasionar malas interpretaciones en la valoración de pacientes con sospecha de
cardiopatía isquémica. Pacientes y método. Se han estudiado 7 pacientes que, con esta
técnica, presentaron cifras elevadas de isoenzima CK-MB con valores normales de
creatincinasa total. A todos ellos se les realizó electroforesis de isoenzimas de
creatincinasa. Resultados. La electroforesis mostró, en todos los casos, la presencia de
una banda atípica de macrocreatincinasa tipo 1 responsable de dicha interferencia. La
evolución clínica, analítica, radiológica y electrocardiográfica de los pacientes no
evidenció enfermedad coronaria aguda. Conclusiones. La macrocreatincinasa tipo 1 ha
sido relacionada con la presencia de patología cardiovascular subyacente, dato que se
encontró en tres pacientes. Con las técnicas de inmunoinhibición las
macrocreatincinasas suelen cursar con valores muy altos de isoenzima CK-MB
(habitualmente superiores al 50% de la actividad total de la creatincinasa) con cifras de
ésta en rangos normales. Este hecho, aunque sugiere fuertemente su presencia, plantea
la necesidad de métodos más sensibles para evitar estas interferencias. Asimismo, se
recomienda el uso de la electroforesis de isoenzimas de creatincinasa para determinar
la naturaleza de las mismas. (12)

4. Breve alcance sobre la creatinina

Figura 3. Síntesis
de creatinina a
partir de creatina,
que por
fosforilación se
transforma en
fosfato de
creatina y
posteriormente
en creatinina.
La creatinina es el producto final del catabolismo de la creatina (o fosfocreatina). Se trata
de un anhídrido de la creatina que se forma en los músculos por reacción espontánea e
irreversible. La creatinina libre no se reutiliza en el metabolismo del cuerpo y por tanto
funciona únicamente como producto de excreción de la creatina. La formación de
creatinina es razonablemente constante, transformándose cada 24 horas una cantidad
aproximada de un 2% de creatina en creatinina. En consecuencia, la cantidad producida
diariamente esta también relacionada con la masa muscular. La creatinina filtra
libremente por el glomérulo (pequeñas cantidades son reabsorbidas y también
secretadas por los túbulos renales). Finalmente es excretada de forma principal por los
riñones, aunque una pequeña parte con las heces.

Gran parte de la creatina se almacena en todos los músculos del cuerpo (alrededor del
90%), se sabe que un adulto que tenga 70 kg de peso corporal posee cerca de 120 g de
creatina. La finalidad del almacenamiento es la creación junto con el fósforo de la
fosfocreatina (PCr) presente en las células musculares de los vertebrados así como
algunos invertebrados, se encuentra presente con la enzima creatina quinasa. Los
músculos no son capaces de sintetizar la creatina y es por esta razón por la que la toman
del torrente sanguíneo. La creatina constituye la fuente inmediata y directa para
regenerar ATP (Adenosín trifosfato) un constituyente energético de las células
musculares.

Medir la creatinina del suero es una prueba simple y es el indicador más común de la
función renal. Un aumento en los niveles de creatinina de la sangre solamente es
observada cuando hay un marcado daño en las nefronas (RC). Por lo tanto, esta prueba
no es conveniente para detectar estados tempranos de enfermedad del riñón. Una
mejor valoración de la función del riñón es la prueba de aclaramiento de creatinina. (13)
Referencias bibliográficas

1. Khan Academy Medicine. Enzymes, 2016. Ref:

https://es.khanacademy.org/science/biology/energy-and-
enzymes/modal/a/enzymes-and-the-active-site

2. W. Rodwell, A. Bender, V. Botham. “Bioquímica ilustrada”. México, DF. 2016,

pp.69, 94-95.

3. U. Schlattner, M. Tokarska-Schlattner, and T. Wallimann, “Mitochondrial

creatine kinase in human health and disease,” Biochimica et Biophysica Acta—
Molecular Basis of Disease, vol. 1762, no. 2, pp. 164–180, 2006.

4. C. Y. Liu, Y. C. Lai, Y. C. Wu, C. H. Tzeng, and S. D. Lee, “Macroenzyme creatine

kinase in the era of modern laboratory medicine,” Journal of the Chinese Medical
Association, vol. 73, no. 1, pp. 35–39, 2010.

5. Berg, J. M., Tymoczsko, J. L., y Stryer, L. (2002). The Michaelis-Menten model

accounts for the kinetic properties of many enzymes (El modelo de Michaelis-
Menten explica las propiedades cinéticas de muchas enzimas).
En Biochemistry (5a ed., sección 8.4). Nueva York, NY: W. H. Freeman.
Consultado en http://www.ncbi.nlm.nih.gov/books/NBK22430/#_A1063_.

6. Purves, W. K., Sadava, D. E., Orians, G. H. y Heller, H.C. (2003). What are the
chemical events at active sites of enzymes? (¿Cuáles son los eventos químicos
que ocurren en los sitios activos de las enzimas?). En Life: The science of
biology (7a ed., p.p. 115-116 ). Sunderland, MA: Sinauer Associates.

7. Hanks, S. K. & Hunter, T. Protein kinases 6. The eukaryotic protein kinase

superfamily: kinase (catalytic) domain structure and classification. FASEB J., 1995
May, 9(8), 576-596.

8. Mariman CE, Schepens JT, Wieringa B (agosto de 1989). "Secuencia de

nucleótidos completa del gen de la creatina quinasa B humana" . Nucleic Acids
Res . 17 (15): 6385.
9. Stachowiak O, Schlattner U, Dolder M, Wallimann T (julio de 1998). "Estado
oligomérico y comportamiento de unión a membrana de isoenzimas de creatina
quinasa: implicaciones para la función celular y la estructura
mitocondrial". Bioquímica Molecular y Celular .

10. Payne RM, Strauss AW (1995). "Expresión de los genes de la creatina quinasa
mitocondrial". Mol. Celda. Biochem . 133-134: 235-43

11. Qin W, Khuchua Z, Cheng J, Boero J, Payne RM, Strauss AW

(1998). "Caracterización molecular de las creatina quinasas y algunas
perspectivas históricas". Mol. Celda. Biochem . 184 (1-2): 153-67.

12. Gracia MC, Arrese R. Macro creatin kinasas. Rev Diagn Biol 1990;39: 47-50.

13. Libro de la salud cardiovascular del Hospital Clínico San Carlos y la Fundación
BBVA. Fundacion BBVA. 2007.
Índice

Los subtítulos se irán creando conforme el avance de los capítulos

1. Introducción. Objetivos

2. CAPÍTULO I. Fundamentos bioquímicos

2.1. Conceptos previos
2.2. Regulación enzimática. Fosforilación
2.3. Creatinfosfoquinasa (CPK)
- Isoformas
- Macroenzimas
2.4. Breve alcance sobre la creatinina

3. CAPÍTULO II. CPK y mialgias

4. CAPÍTULO III. CPK y empleo de fármacos

5. CAPÍTULO IV. CPK y su aumento en cuadros asintomáticos

6. Conclusiones

7. Bibliografía
Aplicaciones clínicas de la
Creatinfosfoquinasa (CPK)
Presentación del primer avance de la Investigación Científica

Bioquímica
Mesa 2A – Turno: Jueves 4:10 – 9:35

Integrantes:
Herrera Ramos, Jean
Huaripata Páucar, Juan
Lopez Ortiz, Jesús
Machado Nuñez, Alexandra

04/ 10/18