Cromatografía en Columna 

 
Identificación de los componentes de una mezcla 
 
[Mauricio Esteban Tapia]​1​, [Nicolas David Torres Rico]​2 
Grupo 6 
2 de Octubre de 2018 

Resumen 
La  cromatografía  es  un  método  de  separación  que  se  basa  en  diferencia  de  velocidades  con  que  los 
componentes  de  una  mezcla  viajan  por  una  fase  estacionaria  bajo  la  influencia  de  una  fase  móvil,  en  un 
proceso  de  adsorción-desorción.  Existen  varios  tipos  de  cromatografía,  entre  estos,  la  cromatografía  en 
columna,  en  la  cual  se  hace  pasar  el  eluyente  por  acción  de  la  gravedad  por  una  columna  vertical  de la fase 
estacionaria. Para acelerar un poco el proceso se puede impulsar el eluyente con aire de una bomba. 
Se  realizó  la  separación  de  una  mezcla  de  rojo  de  metilo  y  sudán  III  por  el  método  de  la  separación  de 
cromatografía en columna, para lo que se usó diclorometano y acetona como eluyentes. 
Palabras clave:​[]. 
 
 
12
Introducción   pero  este  proceso  puede  ser  bastante  demorado, 
por  lo  que  en  ocasiones  se  usa una bomba de aire 
La  cromatografía  en  columna  es  un  tipo  de 
para  impulsar  el  eluyente  y  que  la  separación  de 
cromatografía,  que  se  destaca  entre  las  demás,  ya 
los  componentes  se  dé  en menor tiempo. En caso 
que  permite  separar  grandes  cantidades  de 
de  ser utilizada la bomba se debe tener cuidado de 
material.  Este  método  separa  los componentes de 
no  hacerlo  a  una  tasa  muy  alta,  ya  que  el  aire 
una  mezcla  con  base  en  la  afinidad  que  tengan 
podría  llegar  hasta  el  adsorbente  y  secarlo,  lo  que 
estos por la fase móvil o por la fase estacionaria. 
causaría errores en la experimentación. 
El  tipo  de  revelado  en  la  cromatografía  en 
Materiales y Método 
columna  es  descendente,  es  decir,  que,  el  líquido 
desciende  por  acción  de  la  gravedad  a  lo  largo  de  Método 
toda  la  columna  y  es  recogido  al  final  del  Para  la  cromatografía  en  columna  se  realizó  el 
recorrido.  procedimiento  descrito  en  el  diagrama  de  flujo  a 
Al  igual  que  en  la  cromatografía  de capa delgada,  continuación (Diagrama de flujo 1). 
también  se  debe  elegir  adecuadamente  la  fase 
estacionaria  y  la  fase  móvil.  Respectivamente,  en 
la  primera  es  importante  el  tipo  de  adsorbente  a 
emplear,  su  solubilidad,  reactividad  y  acidez,  por 
ejemplo,  la  sílica  gel  es  una  sustancia  inerte  y  un 
buen  adsorbente  para  sustancias  polares;  en  la 
segunda,  los  componentes  de  la  mezcla  no deben 
ser  solubles  en  el  eluyente,  además  se  debe 
comparar  su  polaridad  con  el  eluyente  para 
obtener mejores resultados en la separación. 
Como  se  mencionó  anteriormente,  el  líquido 
desciende  por  la  columna  gracias  a  la  gravedad, 

1
  ​Estudiante  de Ingeniería Química, Universidad Nacional de ​Colombia,   
Facultad  de  Ingeniería,  Dpto.  Ingeniería  Química  y  Ambiental. 
Colombia. E-mail: metapiaa@unal.edu.co. 
2
Diagrama de flujo 1. D
​ iagrama de flujo cromatografía en 
  ​Estudiante de Ingeniería Química, Universidad Nacional de ​Colombia. 
columna​. 
Facultad  de  Ingeniería,  Dpto.  Ingeniería  Química  y  Ambiental. 
Colombia. E-mail: nidtorresri@unal.edu.co. 
Durante  la  práctica  se  usaron  dos  eluyentes 
diferentes  por  lo  que  era  necesario  hacer  el 
cambio  de  vaso  recolector,  además  de  ser 
necesario el cambio para recoger los componentes 
de  la  mezcla,  para  el  cambio  de  vaso  únicamente 
se debe cerrar la llave de la columna y cambiarlo. 
 
Materiales y Reactivos 

De  la  evaluación  de  la  mezcla  por  capa  fina  se 
conocía  que  los  componentes  de  la  mezcla  eran 
rojo  de  metilo  y  sudán  III,  por  lo  que  utilizaron 
diclorometano  y  acetona  como  eluyentes.  La fase 
estacionaria utilizada fue silica gel. 
El  montaje  usado  para  la  práctica  se  muestra  en 
seguida en la Figura 1.   
Figura 2. R
​ esultados cromatografía en columna. 
El  punto  a  1.2  cm  que  se  ve  en  la  comprobación 
del  colorante  sudan  III,  es  rojo  de  metilo, 
componente de la muestra problema inicial. 
Análisis y Discusión 
En  la  cromatografía  de  columna  se  procedió  a 
introducir  la  muestra  número  6, la cual mediante 
experimentos  previos  se  conocía  era  una  mezcla 
de  Rojo  de  metilo  y  Sudán  III,  así  se  dispuso  a 
utilizar  Diclorometano  (DiClmet)  como  primer 
eluyente  de  la  mezcla,  lo  observado  fue  el 
desplazamiento sobre toda la columna de un tono 
  anaranjado mientras una sustancia de tono rojo se 
retenía  en  la  superficie  de  la  columna  de  sílica,  se 
Figura 1​. Montaje cromatografía en columna ​[6] 
esperaba  que  la  sustancia  desplazada  por  el 
  DiClmet  fuera  el  Sudan  III  debido  a  que  tienen 
índices  de  polaridad  cercanos  (3,4)  y  se  retuviera 
Resultados 
el rojo de metilo por su polaridad superior (5,0). 
Para  la  cromatografía  primero  se  agregó 
Para  generar  el  movimiento  del  segundo 
diclorometano  y  luego  acetona  como  eluyente, 
componente  se  realizó  el  cambio  de  eluyente  de 
para separar los dos componentes de la mezcla. 
DiClmet  a  Acetona  (Acet)  el  cual  arrastró  con 
Al  realizar  la  comprobación  por  medio  de  una  facilidad  la  muestra  debido  a  su  buena  afinidad 
cromatografía  en  capa  delgada  de  los  colorantes  según la serie eluotrópica. 
obtenidos  en  la  parte  inferior  de  la  columna  se 
Las  sustancias  obtenidas  se  concentraron  y 
encontró lo siguiente: 
fueron  sometidas  a  una  comparación  por 
En  la  figura  2.  ‘Muestra’  se  refiere  a  la  cromatografía  de  capa  fina  obteniendo  los 
cromatografía  de  la  solución  problema  inicial,  resultados  mostrados  en  la  Figura  2  de  la  sección 
‘Patrón’  a  una  solución  patrón  del  colorante  y,  de resultados, donde se comparar con lo obtenido 
‘columna’  a  la  cromatografía  de los componentes  al  utilizar  los  mismos  solventes  en  la  muestra 
obtenidos en la cromatografía en columna.  inicial y en una solución patrón de cada una de las 
substancias obtenidas 
Mediante  los  datos  obtenidos  posterior  a  la  eluyente  una  sustancia  con  la  cual  el  Rf  del  azul 
cromatografía  de  columna  y  de  capa  fina  de  metileno  sea  alto,  es  decir,  que la arrastre facil, 
podemos  encontrar  los  valores  de  Rf  y  hRf posterior  a  eso  realizar  una cromatografía de capa 
reportados en la Tabla 1.  fina  utilizando  como  patrón una solución de azul 
de  metileno  y  como  eluyente  el  mismo  de  la 
cromatografía  de  columna,  comparando  si  lo 
obtenido es o no lo esperado. 
ii.  ¿​Qué  debe  hacerse  para  encontrar  el  eluyente 
adecuado  para  una  sustancia  en  una 
  cromatografía en columna? 

Tabla 1.​Valores experimentales de Rf y hRf .  Se  debe  estudiar  la  polaridad  y  solubilidad  de  las 
sustancias  que  se  van a someter al procedimiento, 
Con  estos  valores  para  cada  uno  de  los  solventes  ya  que  el  arrastre,  además  de  darse  por  gravedad, 
podemos  decir  que  en  el  DiClmet  el  primer  se  da  por  el  mismo  efecto  de  la  polaridad  en  la 
punto  no corresponde a sudán III, corresponde al  cromatografía de capa fina. 
otro  componente  Rojo de metilo, este permanece 
en  el punto de aplicación debido a que la afinidad  iii.  ​La  recuperación  cuantitativa  del  producto 
no  es  la  suficiente  para  arrastrarlo,  efecto  principal  de  la  práctica,  sería  más  completa  si  se 
evidenciado  igualmente  en  la  cromatografía  de  recogieran  fracciones  mayores  o  menores  de  8 
columna;  el  segundo  valor  obtenido  mL.¿Por qué? 
evidentemente  por  la  igualdad  en  los  valores  se  La  recuperación  cuantitativa  del  producto 
hace evidente que se trata de Sudán III.  principal  de  la  práctica  sería  más  completa  si  se 
Para  el  caso  de  la  acetona  se  presenta  un  valor  recogieran  fracciones  inferiores  a  6  mL.  Esto 
distinto  en  cuanto  a  lo  obtenido  por la muestra y  permite  dos  cosas:  la  primera  de  ellas  es  que  al 
el  patrón,  esto  puede  deberse  a  que  la  cantidad  realizar  el  seguimiento  de  la  separación  por 
obtenida  después  de la cromatografía de columna  cromatografía  en  columna  por  cromatografías 
disminuye  o  podía  contener  trazas  de  un  sucesivas  en  capa  fina  sepamos  con  mayor 
contaminante  lo  que  causaría  la  disminución  del  precisión  en  qué  fracciones  se  encuentran  las 
desplazamiento,  a  pesar  de  esto  mediante  el color  partes  mayoritarias  de  sustancia  y  así  recuperar  la 
presente  evidenciado  en  el  laboratorio  se  podía  mayor parte posible. 
asegurar  que  se  trataba  de  Rojo  de  metilo,  el  La  segunda  es  que  al  juntar  las  fracciones  para 
primer  punto  que  fue  arrastrado  en  su  totalidad  realizar  la  destilación  y  obtener  la sustancia como 
por el eluyente se trata de Sudán III.  sólido  puro  tengamos  menor  cantidad  de 
Así  con  estos  valores  podemos  decir  que  la  eluyente,  lo  que  permite  la realización más rápida 
identificación  y  corroboración  de  lo  obtenido  en  y más eficiente del producto. 
la  practica  de  cromatografia  de  capa  fina  son  iv.  ​Indique  algunas  de  las  aplicaciones  de  la 
consistentes  y  por  lo  tanto  similares  a  nivel  cromatografía  de  adsorción  en  columna  y  capa 
comparativo,  permitiéndonos  reafirmar  la  fina. 
determinación  de  la composición de la muestra 6, 
la cual es Sudán III y Rojo de metilo.   En  la  identificación  de  sustancias  en  la  industria 
farmacéutica  se  utiliza.  En  la  separación  de 
Cuestionario 
colorantes.  Separación  de  componentes  de  una 
i.  Un  colorante  desconocido  se  piensa que puede ser  síntesis orgánica. 
azul  de  metileno,  ¿Cómo  se  podría  comprobar esta 
1.  Separaciones  de  componentes  de  plantas 
suposición  utilizando  un  procedimiento  basado  en 
medicinales. 
una técnica cromatográfica? 
2.  Separación  de  componentes  de  una  síntesis 
Gracias  a  que  se  sospecha  de  una  sustancia  en 
orgánica. 
particular  se  podría  utilizar  la  cromatografía  en 
columna  para  separarlo,  utilizando  como  3. Separación de colorantes. 
4.  Separación  e  identificación  de  hioscina  y  de  conseguir  la  textura  deseada,  no  hay  que  decir 
morfina.  que  a  mayor  velocidad  menor  grosor  de  la  capa. 
Siempre  se  realiza  de  forma  ascendente, 
5.  Separación  de  ácido  acético,  alcohol  etílico  y 
principalmente  porque  el  soporte  es  rígido.  La 
metil-etil cetona. 
cromatografía  en  capa  fina  aguanta  tratamientos 
6.  Separación  e  identificación  de  los  compuestos  de  visualización  mucho  más  potentes  debido  al 
intermedios  de  una  síntesis orgánica, por ejemplo  sub  soporte  y  que  es  más  rápida,  pudiendo 
en la síntesis del naftaleno, identificación de ácido  terminar la corrida en una media hora. 
ftálico, anhídrido ftálico, benceno. 
vii.  ​Indique  la  toxicidad  de  las  sustancias  que 
7.  En  la  producción  sintética  de  acetaminofén,  utilizó y cómo se podrían desechar. 
identificación  de  la  amina  de  la  N-acetil 
Rojo de Metilo: 
benzoquinona. 
8.  Identificación de levo-alfa-ácido aminoadípico, 
durante la biosíntesis de penicilina. 
9.  Identificación  de  8-nitroisoquinolina,  durante 
la síntesis de Ciprofloxacina, un antibiótico. 
 
v.  ​Escriba  una  lista  de  eluyentes  utilizados  en 
Toxicidad:​10  µmol/L,  no  se  presentan  pruebas 
cromatografía  en  columna  en  orden  de  polaridad 
en humanos, no clasificado como cancerígeno. 
decreciente (anote su bibliografía). 
Desecho:  ​Dejar  los  productos  en  los  recipientes 
originales,  no  mezclar  residuos,  recipientes sucios 
como  el  propio  producto, residuos eliminados de 
acuerdo a las normas locales. 
Sudán III: 

 
Fieser, L. F., & Williamson, K. L. (1979). O
​ rganic   
experiments​. DC Heath. 
Toxicidad:​Puede  causar  irritación  en  ojos,  piel, 
vi.  ​¿Cuál  es  la  diferencia  entre  la  cromatografía  vías respiratorias y por ingestión. 
en capa fina y la cromatografía en papel? 
Desecho:​Dejar  los  productos  en  los  recipientes 
Igual  que  la  realizada  en  papel,  la  cromatografía  originales,  no  mezclar  residuos,  recipientes sucios 
en  capa  fina  se  basa  en  la  distribución  en  dos  como  el  propio  producto, residuos eliminados de 
fases,  la  estacionaria,  compuesta  por  una  capa  de  acuerdo a las normas locales. 
hidratación  y  la  móvil, que se trata de un solvente 
orgánico.  La  única  novedad  radica  en  el  soporte,  Diclorometano 
ya  que  no  es  una  hoja  de  papel,  sino  una  capa de 
0,1  a  1  mm  de  óxido  de  silícico  o  celulosa, 
apoyada  en  un  subsoporte  de  cristal.La  capa  se 
aplica  manualmente  mediante  un  aparato  que 
deja  una  ranura  regable  por  la  que  sale  la  pasta   
denominada  Silicagel,  este  aparato  la  vamos 
deslizando  por  la placa a velocidad constante para 
Toxicidad:  Sospechoso  cancerígeno,  60,14  mg/l 
componentes  en  la  componentes, 
por inhalación. 
mezcla.  comparando  con 
Desecho:  Dejar  los  productos  en  los  recipientes  patrón. 
originales,  no  mezclar  residuos,  recipientes sucios 
como  el  propio  producto, residuos eliminados de  Fase  estacionaria  en  Fase estacionaria 
acuerdo a las normas locales.  suspensión  con  el  completamente seca y 
solvente  activada hasta el 
Acetona  contacto con el 
solvente 

Cambio rápido y fácil  Prueba siempre 

de eluyente para  individual de 
 
arrastre de la muestra   muestra-eluyente, 
Toxicidad:  76  mg/l  por  inhalación,  20.000  mayor requerimiento 
mg/kg cutaneo.  de muestra. 
Desecho:  NO  tirara  a  la  alcantarilla,  dejar  los  Múltiples  Uso único siempre, 
productos  en  los  recipientes  originales,  no  extracciones sobre la  por cada ensayo se 
mezclar  residuos,  recipientes  sucios  como  el  misma columna si  gasta una placa 
propio  producto,  residuos  eliminados de acuerdo  esta se mantiene en 
a las normas locales.  buen estado 
viii.  ​¿Qué  fenómenos  físico-químicos  intervienen 
en una separación cromatográfica?.  Identificación más  Complejidad del 
espaciada y detenida  método por la 
En  una  separación  cromatográfica  se  presenta  de las sustancias  cantidad de muestra 
como  fenómeno  físico  las  fuerzas  de  gravedad  (  pertinentes  debida a utilizar 
columna)  atracción,  arrastre  y  solubilidad,  en 
cuanto  a  los  fenómenos químicos se identifica los   
intercambios y arrastres iónicos, el efecto del pH.  Conclusiones 
ix.  ​¿Qué  es  una  serie  eluotrópica?,  ¿qué  utilidad  ❖ Se  reafirma  lo  obtenido  en  la 
tienen en cromatografía en columna?.  cromatografía  de  capa  fina  sobre  la 
La  serie  eluotrópica  se  caracteriza  por  se  una  muestra  6,  su  composición  es 
marcha  donde  se  identifica el mejor eluyente para  principalmente  mezcla  de dos sustancias, 
la  cromatografía  que  se  desea realizar, esta ordena  Rojo de metilo y Sudán III. 
por  poder  eluotropico  a  las  sustancias  que  está  Referencias 
relacionado con la polaridad.  [1]  Guerrero,C  et  Polania,  W.  2015.  ​Guías  de 
laboratorio  para  un  curso  introductorio  de  química 
Su  importancia  en  la  cromatografía  de  columna  orgánica. C ​ olombia .pp 39-44. 
radica  en  que  el  solvente  que  se  debe utilizar es el  [2]Truter,  E.  V.,  Morris, L. J., Criddle, W. J., Halpaap, H., 
que  mejor  Rf  obtenga  en  la  marcha  de  la  serie  &  Shellard,  E.  J.  (1965).  Thin-layer  chromatography. 
Proceedings  of  the  Society  for  Analytical  Chemistry​, 
eluotrópica  2(​ 7), 113-116. 
[3]Valcarcel  Cases,  M.  (1988).  TECNICAS  ANALITICAS 
x.  ​Realice  un  cuadro  comparativo  entre  la  DE SEPARACION. Barcelona : Reverte S.A. 
cromatografía en columna y la de capa delgada.  [4]Stahl,  E.,  &  Chromatography,  T.  L.  (1969).  A 
Laboratory  Handbook.  ​Thin-layer  chromatography​, 
  p-669. 
[5]H.  H. Strain "Chromatographic Adsorption Analysis", 
Interscience Publ., Inc., New York (1942) 
Cromatografía de  Cromatografía de  [6]Cromatografía  en  columna,  montaje.  tomado 
columna.  capa fina.  de:https://triplenlace.com/2012/08/24/cromatografí
a-en-capa-fina-casera-de-tinta-de-rotuladores-y-obt
ención-del-correspondiente-cromatograma-de-picos 
identificación  Identificación   
individual  de  los  simultánea  de  los