Preguntas Fermenta:  Expresa los efectos combinados de los factores que afectan a

las propiedades intrínsecas de la enzima.

1. ¿Por qué la actividad enzimática se mide a tiempos cortos?

Como sabemos la actividad enzimática está en función con su velocidad

y para poder medir la velocidad el tiempo tienen que ser muy cortos de
modo que la velocidad de la reacción de reserva es insignificante
=1 -> La actividad de la enzima no se ha reducido por la inmovilización.
2. ¿Cuáles son los parámetros de RDI y RDC en un proceso reactivo
<1 -> Se ha perdido parte de la actividad durante la inmovilización y
con enzimas inmovilizadas? por los efectos de partición y difusionales.

RD externas: >1 -> Al romper células inmovilizada, cuando hay división celular,
cuando los inhibidores se excluyen selectivamente, aumento de
𝜶: (𝒏𝒖𝒎𝒆𝒓𝒐 𝒅𝒆 𝑫𝒂𝒎𝒌𝒉𝒆𝒍𝒆𝒓 ) temperatura, cuando la enzima inmovilizada es más estable.

𝜼 = (𝒇𝒂𝒄𝒕𝒐𝒓 𝒅𝒆 𝒆𝒇𝒆𝒄𝒕𝒊𝒗𝒊𝒅𝒂𝒅 ): 𝒇(𝜶, 𝜷𝟎)

Resultan como consecuencia de la existencia (en la vecindad de la

RD internas:
partícula catalítica) de una zona de líquido estanco donde hay sólo
difusión molecular y no transporte convectivo. ∅ = (𝒎𝒐𝒅𝒖𝒍𝒐 𝒅𝒆 𝑻𝒉𝒊𝒆𝒍𝒆), 𝜷 = 𝒇(𝒛, ∅)
Si la limitación es muy fuerte, la velocidad de la reacción es la velocidad
de difusión. 𝜼: 𝒇(∅, 𝜷𝟎)
Estas restricciones disminuyen aumentando la agitación para mejorar el
mezclado.
En una situación ideal de mezcla sin limitación de la difusión, la Se deben al tamaño y tortuosidad de los poros del soporte.
reacción tendrá los parámetros cinéticos idénticos a los de la enzima Efecto más complejo porque la difusión se produce simultáneamente
libre. con la reacción, creando gradientes de concentración alrededor de las
partículas.
 Módulo de Damkholer () El efecto sobre la Km es el mismo que para la limitación difusional
 Número adimensional que expresa la relación entre la velocidad externa (K´m> Km)
máxima de una reacción enzimática y la velocidad máxima de La disponibilidad de sustrato es más difícil y siempre se tendrán valores
transferencia de sustrato en las proximidades de una enzima de V´max < Vmax porque la enzima ubicada en el centro de la partícula
inmovilizada permanecerá inactiva.
 Indica los factores que limitan la actividad de la enzima inmovilizada Es importante controlar la cantidad de enzima inmovilizada.
y cuanto se aleja del máximo posible.
 Módulo de Thiele ()
 Método para cuantificar las restricciones difusionales internas y
Incidencia del fenómeno de transporte de externas.
sustrato en la expresión del potencial catalítico  Relación entre velocidad de reacción química y proceso difusivo en
de la enzima. los poros.
 Los valores pequeños: no influye el proceso difusivo (mayor factor
Si  es pequeño -> baja incidencia de RDE
de efectividad); y los valores altos: tienen mayor influencia de
Si  es grande -> alta incidencia de RDE
difusión en los poros (menor factor de efectividad)
 Factor de Efectividad ()
  La definición sólo es válida para una ecuación cinética concreta
(primer orden).
L = Espesor medio de la partícula.
[E] = Contenido en enzima de la
partícula.
De = Difusividad efectiva del
sustrato.
3. Porque es fundamental el K y Vmax de enzimas como
biocatalizadores en un reactor.
 K es la constante de velocidad o también constantes microscópicas
de velocidad
 En estas condiciones (las condiciones óptimas de pH,temperatura,
presencia de cofactores, etc, y se utilizan concentraciones
saturantes de sustrato), la velocidad de reacción observada es la
velocidad máxima (Vmax). La velocidad puede determinarse bien
midiendo la aparición de los productos o la desaparición de los
reactivos.
 Al seguir la velocidad de aparición de producto (o de
desaparición del sustrato) en función del tiempo se
obtiene la llamada curva de progreso de la reacción,
o simplemente, la cinética de la reacción.
4. Mencione un objetivo de las estrategias de operación en un
biorreactor enzimático.
La operación de reactores enzimáticos requiere producto de calidad
uniforme (X= cte)
En bioreactores por lotes :
E soluble: X:f(E,t)
E inmovilizado: Pérdida de capacidad catalítica
La pérdida de la capacidad catalítica durante la operación del birreactor;
básicamente se debe a la temperatura y al tiempo que está expuesto.
El estudio del fenómeno de inactivación térmica del biocatalizador y la
determinación de la T de operación de un birreactor enzimático son
aspectos de la mayor relevancia.
5. Defina UI.
UNIDAD INTERNACIONAL DE ACTIVIDAD ENZIMÁTICA: Es la
cantidad de enzima que cataliza la transformación de 1 micromol de
substrato por minuto, bajo condiciones bien definidas (condiciones
estándar). Esta es la expresión básica de la velocidad de la reacción.
Se ha sugerido que la temperatura debe ser, en lo posible, de 30°C
y que las otras condiciones, tales como pH y concentraciones de
substratos, debieran ser las óptimas para la actividad enzimática.
La cantidad de enzimas presentes en un fluido biológico es muy
difícil de determinar en valores absolutos, mg. o moles, una forma de
resolver este problema es midiendo la velocidad de reacción
 catalizada por la misma empleando un sustrato específico. La
velocidad de reacción puede expresarse como la cantidad de
reactivo que se transforman en producto por unidad de tiempo. De
allí que la unidad internacional (UI) de cualquier enzima se define
como la cantidad de la misma que cataliza la transformación de un
mol de sustrato por minuto, bajo condiciones definidas: pH,
temperatura, concentración de sustrato/s y cofactores, etc.

En base a lo que se acaba de explicar es posible expresar la

cantidad de una enzima en un fluido biológico en UI/cm 3 o en UI/ mg.
de proteína total. Esta última expresión denominada actividad
específica es la cantidad de moles de sustrato transformados por
minuto y por mg. de proteína, debiéndose indicar la temperatura, el Figura 1. Esquema de un reactor de membrana con lipasas inmovilizadas en
pH, etc.Es importante recordar que la actividad específica de una la membrana
enzima es una medida indirecta de la fracción de la proteína total en
una preparación que contienen a la enzima. La inmovilización de enzimas presenta una serie de ventajas clave que
justifican su utilización en la industria, pero esta técnica no esta exenta
también de algún que otro inconveniente. Entre las ventajas podemos
destacar que la inmovilización de enzimas permite la reutilización de las
6. Mencione las ventajas de usar biorreactores con enzimas mismas, a la vez que aumenta su estabilidad frente a un abanico más amplio
inmovilizadas. de valores de temperatura y pH. También posibilita su operación en continuo
así como el diseño de reactores enzimáticos de más fácil manejo y control.
Biorreactores con Enzimas Inmovilizadas Por otro lado, entre las desventajas podemos mencionar que el proceso de
inmovilización puede bloquear centros activos de la enzima, haciendo que la
CREADO EL MARZO 30, 2011 POR AMARIN actividad global disminuya. Y también la proteína puede ver modificada su
ARCHIVADO COMO BIOTECNOLOGÍA Y ECONOMÍA, PRODUCTOS conformación con respecto al estado nativo. Otra desventaja es el coste de
BIOTECNOLÓGICOS | DEJA UN COMENTARIO la inmovilización, pero este se ve compensado por la reutilización de la
enzima [1].
Las enzimas son macromoléculas de carácter proteico que poseen
capacidad catalítica. Esto quiere decir que hacen que las reacciones Existen distintos tipos de reactores que operan con enzimas inmovilizadas.
químicas se produzcan más rápidamente. Esta extraordinaria propiedad Entre otros, destacan los reactores que utilizan enzimas inmovilizadas en
junto con otras, como por ejemplo la especificidad de sustrato o la partículas porosas con forma esférica. En el interior de dichos poros, las
esteroselectividad, justifican el gran interés que han suscitado en el mundo enzimas pueden quedar fijadas por métodos físicos y químicos, que aquí no
de la química. Cada día se intentan encontrar más y más procesos que se se detallan. Los reactores que operan con este tipo de partículas lo pueden
puedan llevar a la práctica por vía enzimática. Pero el empleo de esta hacer bien en lecho fijo [2], lecho fluidizado [3] o suspendidas en el seno del
tecnología genera problemas derivados principalmente de su alto coste y de líquido (tanque agitado o CSTR). También existen otro tipo de reactores que
la imposibilidad de reutilizarlos cuando se trata de reacciones con enzimas utilizan enzimas incluidas en una membrana semipermeable [5]. Un
solubles. Es por ello por lo que se han desarrollado diversos tipos de esquema de este tipo de reactor se muestra en la Figura 1
inmovilización para estas enzimas.

 Permite la utilización continua del biocatalizador, dado que éste queda

fácilmente retenido en el interior del reactor utilizado, mientras se
mantiene en flujo continuo de entrada y salida de líquido.
 Favorece la re-utilización del biocatalizador en el caso de reacciones en
discontinuo.
 Con la inmovilización se puede aumentar sensiblemente 10. ¿Para qué es útil obtener el perfil X vs
𝑲𝒆𝒕
?
𝑲
la concentración de biocatalizador, con respecto a un proceso en el que
el mismo se encuentre en suspensión.
 En cuanto a sistemas operando en continuo, éstos permiten un aumento
en las productividades de los correspondientes biorreactores, dado que
permiten operara a mayor concentración decatalizador, (mayor
conversión de substrato) y con caudales más altos.
 En el caso de enzimas inmovilizadas es frecuente observar un aumento
de su estabilidad y su resistencia a la desnaturalización y proteolisis.
 Permite reducir los efectos de contaminación accidentales del proceso
en las células; dado que la población de células contaminantes se
encuentran en suspensión y en concentración mucho menor que la
población de células inmovilizadas, ésta puede ser eliminada mucho
más fácilmente del reactor.
11. Porque es indispensable en el experimento determinar los valores
7. ¿Cómo se mide la actividad de una enzima? de los parámetros de una enzima soluble e inmovilizada en tu
experiencia de catálisis de la invertasa inmovilizada podrías intuir
Se mide mediante la siguiente ecuación: que sus valores fueran equivalentes o semejantes a las obtenidas
con invertasa soluble ¿por qué?
𝑉 × 𝑆0
𝑣=
𝐾 + 𝑆0 Cuando estudiamos la acción de una enzima en un organismo es importante
saber su Vmax porque es el parámetro cinético por excelencia. Tenemos
que saber su velocidad máxima para poder conocer su 1/2 Vmax, del cual
8. En el rango de linealidad de la invertasa ¿Cuál fue el objetivo de hallamos Km, que es la concentración de sustrato a la que una enzima
emplear un blanco? trabaja a la mitad de la Vmax. De esta manera, añadiendo los distintos
sustratos de la enzima sabremos, según su Km, con cual trabaja mejor, por
El blanco es una muestra cultivada de la célula sin las sustancias que se cual tiene más o menos afinidad etc. Asimismo, podremos estudiar
quiere emplear, y el objetivo es que permita saber si el comportamiento inhibidores y activadores de la enzima, que según sean Competitivos, no
del cultivo se debe a la sustancia que le añadiste o si simplemente se competitivos o Mixtos modificarán su Vmax pero no su Km, o modificarán su
debe a otro factor distinto de la sustancia. Km pero no su Vmax, o modificarán ambos parámetros.

No hay semejanza porque los parámetros cinéticos de la enzima soluble son

9. ¿Por qué la determinación de experimental de rango de linealidad mayores que de la enzima inmovilizada, la inmovilización puede limitar el
de la invertasa soluble se tuvo que ensayar a diferentes diluciones acceso del sustrato al centro activo de la enzima, lo que afecta en la
del extracto enzimático de levadura? actividad.

12. ¿Cómo se halla el Vmax y Kmax?

 Para determinar la velocidad máxima de una reacción enzimática, la
concentración de sustrato ([S]) se aumenta hasta alcanzar una
velocidad constante de formación de producto. Esa es lavelocidad
máxima (Vmax) de la enzima. En ese caso, los sitios activos de la
enzima están saturados con sustrato.
 13. ¿Cuál es el verdadero parámetro cinético que determina la
eficiencia de la enzima?

Pues K es una cnstante que ayuda a definir la actividad enzimática,es decir

la eficiencia de una enzima.

K=K0.e ED/RT

Es K m como la concentración de sustrato necesaria para alcanzar la mitad

de la velocidad máxima de la reacción.


 Aunque es imposible medir exactamente la concentración de sustrato
que da Vmax, las enzimas pueden caracterizarse mediante la
concentración de sustrato a la cual la velocidad de reacción es la
mitad de la velocidad máxima. Esta concentración de sustrato se 14. ¿Cuál es el procedimiento para obtener el rango de linealidad y
conoce como constante de Michaelis-Menten (KM). Se obtendrá enzima inmovilizada?
una KM diferente según el sustrato específico sobre el que actúe la
enzima (como sucede en el caso de enzimas que actúan sobre
sustratos análogos) y según las condiciones de reacción en que se
realicen las mediciones.
 Se puede hallar ambas constantes (Vmax y Kmax) con el diagrama de
Lineweaver-Burk que se emplea como herramienta gráfica para
calcular los parámetros cinéticos de una enzima.

o
 Cuyo recíproco es:

 Donde V es la velocidad de reacción, Km es la constante de

Michaelis-Menten, Vmax es la velocidad máxima, y [S] es
la concentración de sustrato.
 La representación gráfica de Lineweaver-Burk permite identificar el
Km y Vmax; el punto de corte con el eje de ordenadas es el
equivalente a la inversa de Vmax, y el de abscisas es el valor de -
1/Km.