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Mientras tanto, y para luego repasar esa práctica, puedes realizar un experimento on-line
sobre crecimiento bacteriano
Precauciones:
MÉTODOS INDIRECTOS
Por supuesto, hay que realizar una curva estándar para relacionar los valores de A con la
masa bacteriana en una muestra problema.
La medición del crecimiento por métodos turbidimétricos resulta ser más rápido y útil, para
obtener una estimación del número de células o biomasa. Una suspensión celular aparece
turbia porque lascélulas dispersan la luz que atraviesa la suspensión. Cuantas más células haya
más luz se dispersay más turbia aparece la suspensión. La turbidez puede medirse con un
fotómetro o unespectrofotómetro, aparatos que hacen pasar la luz a través de una suspensión
celular y detectan lacantidad de luz no dispersada. La mayor diferencia entre estos dos
instrumentos es que el fotómetroemplea un filtro simple (normalmente rojo, verde o azul)
para generar luz incidente de una amplitudde onda relativamente ancha, mientras que el
espectrofotómetro emplea un prisma o red dedifracción para generar luz incidente de banda
estrecha. Sin embargo, ambos aparatos midensolamente luz no dispersada expresando los
resultados en unidades fotométricas (por ejemplo,Unidades Klett) o unidades de densidad
óptica (DO) para espectrofotómetro.Para organismos unicelulares, las unidades fotométricas
DO son proporcionales (dentro de ciertoslímites) a la masa celular y también al número de
células. Por tanto las medidas de turbidez puedenutilizarse como un sustituto para otros
métodos de contaje. Sin embargo y antes de utilizar laturbidez como método de contaje, hay
que realizar una curva estándar que relacione medidasdirectas (microscópicas o por recuento
en placa) con las unidades indirectas de turbidez (DO)(Francois
et al.
, 2007). Tales curvas contienen datos para número de células y masa celular,permitiendo la
estimación de ambos parámetros a partir de una sola medida de
la turbidez. A elevadas concentraciones de células, la luz dispersada de la unidad detectora pu
ede ser rescatada por otra (apareciendo a la fotocélula como si nunca se hubiese dispersado).
Cuando estoocurre, la correspondencia uno a uno entre número de células y turbidez pierde
linealidad. Sinembargo, dentro de ciertos límites, las medidas de turbidez pueden ser
razonablemente precisas yademás tienen la virtud de ser rápidas y fáciles de tomar.
Adicionalmente, las medidas de turbidez
Código
FMP V. 01
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Universidad de Pamplona
Departamento de Microbiología
© 2013
pueden tomarse sin distorsionar mucho las muestras. Por estas razones, las medidas de
turbidez seemplean ampliamente para seguir el crecimiento de los cultivos microbianos; se
puede medir repetidamente la misma muestra y construir gráficos semilogarítmicos para
calcular tiempos degeneración. La población bacteriana puede determinarse midiendo la
turbidez del cultivo a diferentesintervalos de tiempo y confrontando estos resultados con
medidas directas de la población a losmismos intervalos de tiempo por ejemplo mediante
recuento directo en placa.El cambio de luz se registra en el espectrofotómetro como
porcentaje de transmisión (cantidad de luztransmitida) y absorbancia o densidad óptica (D.O.),
valor derivado del porcentaje de transmisión,correspondiente al log del cociente entre la
intensidad de luz incidente sobre la suspensión (Io) y lade la luz transmitida por la suspensión
(I). A = log Io/I.Cuando se inocula una pequeña población bacteriana en un medio de cultivo
líquido adecuado,generalmente el crecimiento no comienza inmediatamente, sino que hay
un período de latencia. Unavez que empieza el crecimiento, se observa un incremento
exponencial en la densidad celular, quecorresponde a la fase exponencial de crecimiento. Esta
fase es la más significativa en el ciclo decrecimiento de los microorganismos y se caracteriza
porque los parámetros cinéticos del crecimiento(µ, k) se mantienen constantes. A medida que
el crecimiento avanza, la concentración de losnutrientes esenciales disminuye, y se acumulan
los productos finales del metabolismo, hasta que elcrecimiento llega a detenerse, de modo
que el cultivo entra en fase estacionaria. Después las célulaslentamente se mueren, lisándose
en algunos casos, en una última fase de muerte celular
Este método se utiliza para contarmicroorganismos difíciles de cultivar en medio solido, 0 Para
determinar el numero de Celulas que pueden creceren un medio liquido determinado, como el
análisis para determinarla contarninacion del agua potable.