UNIVERSIDAD NACIONAL AUTÓNOMA DE MÉXICO

FACULTAD DE ESTUDIOS SUPERIORES CUAUTITLÁN

CAMPO 1

QUÍMICA INDUSTRIAL

LABORATORIO DE CINÉTICA QUÍMICA.

PROFESOR: JUAN JOSÉ SÁNCHEZ ROMERO

GRUPO 1501 C

PRACTICA 7: DESCOMPOSICION DE UREA POR

UREASA

 AGUIRRE VEGA ALINA MARÍA

 MARTÍNEZ VILLASEÑOR VIRIDIANA
 SOLÍS MONTEBELLO DIANA JANETH

04/10/2018 2019-1
INTRODUCCIÓN.
Las enzimas desempeñan un papel esencial en el metabolismo de todos los organismos. Catalizan y
controlan la mayoría de las reacciones bioquímicas en nuestro cuerpo- desde la replicación de la
información genética (ADN) hasta la digestión.

En esta experimentación, la enzima ureasa extraída del frijol de soya descompone la urea en amoniaco
y dióxido de carbono, los cuales en solución acuosa forman iones bicarbonato, hidróxido y amonio, por
lo que el avance de la reacción se mide de acuerdo a la conductividad.

En las reacciones enzimáticas el fenómeno común de aumento en la rapidez de reacción ocurre sólo a
bajas temperaturas, dada la mayor energía de las moléculas, se sobrepone a la desnaturalización de la
enzima debido a su origen proteico. El resultado global de estas dos interacciones da como resultado un
perfil con un máximo de rapidez a una temperatura dada, que se le denomina temperatura óptima.

El mecanismo general de la catálisis enzimática suele representarse en la forma:

cuya velocidad inicial, V, viene dada por la ecuación de Michaelis-Menten:

Interacción de la enzima con el sustrato (reactivo), para formar un complejo intermediario

Descomposición del complejo intermediario para dar los productos y regenerar la enzima

E es la enzima, S el sustrato, ES un complejo y P es el producto. Aplicando el tratamiento cinético

denominado del estado estacionario, en el que se asume que la concentración del complejo
intermediario es constante obtenemos:

Si la concentración total de la enzima [E]o es igual a la suma de la concentración en enzima libre

[E], más la concentración de enzima que forma el complejo [ES]:

Introduciendo [E] de la ecuación II en la ecuación I, tenemos:

Donde podemos obtener la concentración de enzima que está formando el complejo

Se asume que la etapa determinante de la reacción es la descomposición del complejo, entonces

la velocidad de la reacción es v=k2[ES] en donde se substituye [ES]

Reacomodando:

Donde se denomina constante de Michaelis.

De la ecuación III se deduce que cuando [S] es suficientemente pequeña,

lo que indica primer orden respecto a la concentración de sustrato. Por el contrario, cuando [S] es
mucho mayor que Km,

y la cinética es orden cero respecto al sustrato. En ambos casos el orden es b>1 para la concentración de
enzima. La ecuación III da cuenta entonces del comportamiento observado en la figura 5.

OBJETIVOS

 Investigar la cinética de descomposición de urea por ureasa.

 Estudiar el mecanismo de reacción para reacciones biocatalitica
 Obtener parámetros cinéticos: constante de Michaelis (Km) y la rapidez máxima mediante la ecuación de
Lineweaver-Burk.
 Seguir el avance de reacción por medidas de conductividad.
DIAGRAMA DE FLUJO

PARTE A:
EXTRACCIÓN DE UREASA DE SOYA

Triturar 1g de soya y agregar 20 mL de una

solución etanol/agua al 30%.

Centrifugar a 2500 r.p.m. durante 15 min

Obtención de la ureasa

PARTE B:

TEMPERATURA DE ACTIVIDAD MÁXIMA

Baño de temperatura
En el tubo de ensaye adicionar 20 mL de la
contante a 30°C y fijar el
disolución de urea 0.02 M.
tubo al soporte
universal.

Agregar 0.5 mL del extracto de ureasa Poner en marcha el

al tubo de ensayo cronómetro en el momento
de mezclar. Introducir la
celda al tubo.

Medir la conductividad para la reacción

cada 10 segundos Repetir a las temperaturas
de 40, 50 y 60 °C.
PARTE C:
PARÁMETROS CINÉTICOS

Temperatura 30 ºC 40ºC 50ºC 60ºC

Tiempo (s) Conductividad Conductividad Conductividad Conductividad
En
diso

Poner en marcha el
Agregar rápidamente, 0.5 mL del extracto de
cronómetro en el
ureasa al tubo de ensayo
momento de mezclar.
Introducir la celda al
tubo.
Medir la conductividad para la reacción
cada 10 segundos

Repetir con las concentraciones

0.008, 0.012, 0.016 y 0.02 M.

RESULTADOS EXPERIMENTALES

Tabla 1. Conductividad con respecto al tiempo a diferentes temperaturas.

10 64.5 58.4 76.6 79.7
20 67.1 59.9 76.7 82.5
30 74.9 63.3 76.8 84.5
40 79.8 63.4 77.2 85.5
50 80.2 63.8 78.3 87.1
60 81.3 64.3 79 87.5
70 82.5 64.4 79.5 88.4
80 83.4 65 80.1 89.1
90 83.8 65.2 80.8 89.6
100 84.1 65.4 81.3 90.1
110 84.3 65.7 81.9 90.7
120 85.9 65.9 82.9 91.1

Tabla 2. Conductividad con respecto al tiempo a diferentes concentraciones.

Conductividad
Tiempo (s) 0.004 M 0.008 M 0.012 M 0.016 M 0.02 M
10 55.6 58.1 50.9 53.9 53.9
20 55.7 58.3 51.8 54.2 56.4
30 55.8 58.4 52.6 54.9 58.1
40 56.2 59.4 53.2 55.5 59.6
50 56.5 59.6 53.7 56.2 61
60 56.7 60.1 54.2 56.8 62.2
70 56.9 60.6 54.9 57.3 63.2
80 57 60.9 55.2 57.7 64.2
90 57.1 61.3 55.5 58.1 65.1
100 57.2 61.5 55.7 58.5 65.9
110 57.4 62 56 58.8 66.6
120 57.6 62.2 56.3 59.1 67.2

ANÁLISIS DE RESULTADOS

1. Elabore un gráfico de conductividad vs tempo, para cada temperatura y determine la rapidez inicial (ro),
mediante regresión lineal.

Conductividad a 30ºC
100
Conductividad

80
60
40 y = 0.1697x + 68.285
20 R² = 0.7754
0
0 20 40 60 80 100 120 140
tiempo (s)

Conductividad Linear (Conductividad )

Donde la r0 es igual a la pendiente, por lo tanto

r0=0.1697

Conductividad a 40 ºC
68
66
Conductividad

64
62
60 y = 0.0567x + 60.041
58 R² = 0.7746
56
0 20 40 60 80 100 120 140
Tiempo (s)

Conductividad Linear (Conductividad )

r0=0.0567

Conductividad a 50ºC
84
82
Conductividad

80
78 y = 0.06x + 75.361
R² = 0.9808
76
74
0 20 40 60 80 100 120 140
tiempo (s)

Conductividad Linear (Conductividad )

r0=0.06

Conductividad A 60ºC
94
92
Conductividad

90
88
86
84
82 y = 0.0929x + 81.109
80 R² = 0.9131
78
0 20 40 60 80 100 120 140
tiempo (s)

Conductividad Linear (Conductividad )

r0=0.0929

2. Esboce el gráfico de ro vs Temperatura y evalúe la temperatura de máxima actividad biocatalítica.

Temperatura °C Rapidez (ro)

30 0.1607
40 0.0567
50 0.06
60 0.0929

Con la información anterior realizamos la gráfica Temperatura vs r0

Grafico r0 vs Temp
0.2

0.15

0.1
r0

0.05

0
0 10 20 30 40 50 60 70
Temperatura °C

r0

A partir de los datos arrojados de tabla 1. Se observa que, en donde la conductividad aumento más con respecto a
la inicial es a 30ºC, por su actividad biocatalítica, es por eso que las medidas de conductividad a diferentes
concentraciones se hacen con ésta temperatura, la cual es la óptima. Corroborando al sacar la r0 se tiene que el
valor mayor es de 0.1697, que corresponde a esa temperatura.

3. Trace un gráfico de conductividad vs tiempo, para cada concentración y determine la rapidez inicial (ro)
respectiva.
Graficas de conductividad a diferentes concentraciones:

Grafica. 1

Conductividad a concentración 0.004 M

58
y = 0.0186x + 55.43
57.5
R² = 0.9721
Conductividad

57

56.5

56

55.5

55
0 20 40 60 80 100 120 140
Tiempo (s)

0.004 M Linear (0.004 M)

r0=0.0186

Grafica 2.
 Coductividad a concentración 0.008 M
63
y = 0.0399x + 57.609
62
R² = 0.9853
Conductividad

61

60

59

58

57
0 20 40 60 80 100 120 140
Tiempo (s)

Coductividad Linear (Coductividad)

r0=0.0399

Grafica 3.

Coductividad a conc. 0.012 M

58
57 y = 0.0474x + 51.085
56 R² = 0.9588
Conductividad

55
54
53
52
51
50
0 20 40 60 80 100 120 140
Tiempo (s)

Coductividad Linear (Coductividad)

r0=0.0474

Grafica 4.
 Coductividad a conc. 0.016 M
60
y = 0.0496x + 53.527
59
R² = 0.9838
58
Conductividad

57
56
55
54
53
0 20 40 60 80 100 120 140
Tiempo (s)

Coductividad Linear (Coductividad)

r0=0.0496

Grafica 5.

Coductividad a conc. 0.02M

80
70
60
Conductividad

50
40 y = 0.1157x + 54.432
R² = 0.965
30
20
10
0
0 20 40 60 80 100 120 140
Tiempo (s)

Coductividad Linear (Coductividad)

r0=0.1157

4. Perfile el gráfico de (ro) vs [S]o, con base en lo obtenido, en qué región se encuentran sus resultados (cinética de
orden uno, fraccionario o cero).
Concentración r0
0.004 0.0186
0.008 0.0399
0.012 0.0474
0.016 0.0496
0.2 0.1157

A partir de la información anterior realizamos la gráfica correspondiente.

 Gráfico de (ro) vs [S]o
0.14
0.12
0.1
0.08
r0

0.06
0.04
0.02
0
0 0.05 0.1 0.15 0.2 0.25
Concentración (M)

r0

5. Mediante la ecuación de Lineweaver-Burck, determine rapidez máxima (rmáx) y la KM 87

si no consideramos los primeros 2 puntos de la gráfica obtenemos una gráfica de orden cero; partiendo de este
hecho, hacemos uso de la ecuación de Lineweaver-Burk, también conocida como de dobles recíprocos, la cual se
obtiene a partir de la ecuación de Michaellis-Menten, cuya forma es:

1 𝐾𝑚 1 1
= ( )+
𝑟0 𝑟𝑚𝑎𝑥 [𝑆] 𝑟𝑚𝑎𝑥

La cual tiene la forma y = m x + b

Por lo tanto al graficar el recíproco de la rapidez inicial vs el recíproco de la concentración del sustrato podemos
determinar el valor del Km (constante de Michaellis), así como la rmax (rapidez máxima).

1/s 1/r0
250 53.7634409
125 25.0626566
83.3333333 21.0970464
62.5 20.1612903
5 8.64304235

grafica de 1/s vs 1/r0

60

50

40
1/r0

30

20 1/s vs 1/r0

10

0
0 50 100 150 200 250 300
1/S
De la gráfica anterior consideramos solo la parte lineal y de ella determinamos los valores de Km y rmax .

1/s vs 1/r0
300 y = 4.3553x + 15.845
R² = 1
250

200
1/r0

150
1/s vs 1/r0
100
Linear (1/s vs 1/r0)
50

0
0 20 40 60
1/S

1
ya que 𝑏 = entonces:
𝑟𝑚𝑎𝑥

1
𝑟𝑚𝑎𝑥 =
𝑏
1 𝑀
𝑟𝑚𝑎𝑥 = = 0.0631
15.845 𝑠

𝐾𝑚
y como 𝑚 = entonces
𝑟𝑚𝑎𝑥

𝐾𝑚 = 𝑟𝑚𝑎𝑥 (𝑚)

𝐾𝑚 = (0.0631)(4.3553)

𝐾𝑚 =0.27486

Ya que la Km es mayor a las [S]0 (Concentraciones del sustrato inicial), [S]0 es despreciable frente a Km por lo tanto:

𝐾𝑐𝑎𝑡 [𝐸]0 [𝑆]0

𝑟𝑜 =
𝐾 𝑚 + [𝑆]0

𝐾𝑐𝑎𝑡 [𝐸]0 [𝑆]0 𝑟𝑚𝑎𝑥 [[𝑆]0

𝑟𝑜 = =
𝐾 𝑚 𝐾 𝑚

𝑟𝑚𝑎𝑥
ya que : 𝐾 = 𝑟0 = 𝐾[𝑆]0
𝐾 𝑚

𝑟0
Por lo tanto K=
[𝑆]0

Ejemplo a 30 °C
𝑀
0.1630 1
𝑠
K= = 8.15
0.02 𝑀 𝑠

6. Determine la contante de rapidez a cada temperatura experimental. No considere los resultados posteriores a la
temperatura de máxima actividad catalítica.
𝑀 1
Temperatura r0 ( ) [S]0 (M) K( )
𝑠 𝑠
30 0.1607 0.02 8.15
40 0.0567 0.02 2.83
50 0.06 0.02 3
60 0.0929 0.02 4.645
7. Por medio de la ecuación de Arrhenius, calcule la energía de activación de la reacción y el factor de frecuencia.

Una vez obtenidos los valores de constante de rapidez a diferente temperatura hacemos uso de la forma
logarítmica de la ecuación de Arrhenius

𝐸𝑎 1
𝐿𝑛 𝐾 = 𝐿𝑛 𝐴 − ( )( )
𝑅 𝑇
Donde:
𝐸𝑎 1
y= Ln K b= Ln A m= - x=
𝑅 𝑇

Tabla Ln K y 1/T

ln(K) 1/T

2.0980 0.03333

1.0402 0.025

1.0986 0.02

1.5368 0.016666

Gráfica Ln K y 1/T

Con la información obtenida mediante la gráfica determinamos el valor de la Energía de activación (Ea) y el factor
de frecuencia (A), a partir de la ecuación de la recta obtenida:

y=0.0423x - 9.9459

Ya que b= Ln A entonces:

A= eb

A= e-9.9459

A= 4.7923x10-5
𝐸𝑎
Y como m= - entonces:
𝑅

m=0.0423
𝐽
Ea= 0.0423 ∗ −8.314
𝑚𝑜𝑙

𝐽
Ea=-0.3516822
𝑚𝑜𝑙

CONCLUSIÓN
A través de la experimentación y del previo estudio de las teorías que explican los cambios de rapidez en una
reacción en función de su temperatura, así como las ecuaciones de Michaellis-Menten como su variación con la
ecuación de Lineweaver-Burck, determinamos la rapidez máxima y la Km así como los parámetros de Energía de
activación para analizar la catálisis enzimática, así como el efecto que tiene la temperatura sobre esta.