Virus del dengue

El lento progreso en el desarrollo de agentes antivirales podría verse aliviado por la disponibilidad de
ensayos de detección de virus anti-dengue eficientes y de alto rendimiento. En este estudio,
presentamos un ensayo basado en imágenes de inmunofluorescencia adecuado para la identificación de
inhibidores de moléculas pequeñas de la infección y replicación del virus del dengue. Usando este
ensayo, hemos descubierto que los inhibidores de la proteína cinasa c-Src exhiben un potente efecto
inhibidor sobre el virus del dengue (serotipos 1-4) y el flavivirus murino Modoc.

Los estudios del mecanismo de acción demostraron que el inhibidor de la proteína quinasa c-Src
dasatinib evita el ensamblaje de viriones de dengue dentro del complejo de replicación de virus
inducido por virus.
DENV es un virus de ARN pequeño, envuelto y de hebra positiva que pertenece al género Flavivirus de
la familia Flaviviridae.

El ciclo de vida intracelular de DENV comienza con la endocitosis mediada por receptores del virus en
las células, seguida de la fusión de la proteína de la envoltura viral con la membrana endosomal tardía,
lo que resulta en la liberación del genoma viral en el citoplasma para su replicación. La replicación del
genoma del ARN viral se produce dentro de los complejos unidos a la membrana formados a partir de la
membrana del retículo endoplásmico. Posteriormente, las partículas de virus se ensamblan y liberan a
través de la maquinaria secretora de la célula huésped (5).

Además, se sabe que la fosforilación de proteínas virales como el DENV NS5 (11, 12) por las quinasas
celulares regula su localización subcelular y, se presume, sus funciones. Con la hipótesis de que los
inhibidores de la quinasa podrían usarse para probar el impacto de las quinasas celulares y sus vías de
señalización asociadas en la infección y replicación con DENV, se encontró que varios inhibidores de la
proteína quinasa afectaban a distintos pasos en el ciclo de replicación de DENV y causaban
disminuciones multilog en el título viral en ausencia de citotoxicidad.

el ácido micofenólico ( MPA), que se sabe que inhibe la síntesis de ARN viral de DENV (13). Las células
vero cultivadas en una placa de 384 pocillos se infectaron primero con DENV 2 a una multiplicidad de
infección (moi) de 1 y luego se incubaron con diferentes concentraciones de MPA. Tres días después de
la infección, las células se fijaron y se tiñeron para la proteína de envoltura viral (Env).

Los inhibidores de las quinasas dependientes de ciclina (K002), c-Raf (K039), JAK (K040) y el inhibidor
multitargetado imatinib (K014) parecieron afectar los eventos tempranos en la infección viral (por
ejemplo, entrada viral, liberación del genoma) porque La incubación de células huésped con estos
compuestos durante un período de tres horas antes de la inoculación fue suficiente para causar
reducciones significativas en el título de DENV.

Los inhibidores de la proteína quinasa c-Src reducen la infección por DENV. Para confirmar que la
proteína c-Src es realmente necesaria para la replicación de DENV2,