Universidad Autónoma de Chiriquí

Facultad de Ciencias Naturales y Exactas

Cadena de transporte electrónico: Deshidrogenasa

succínica del hígado.
Bioquímica II (382)

Arjona Esteban, Guerra Ángel, Rodríguez Catherine, Samudio Mirian

4-779-2316, 7-710-130, 4-791-1765, 4-783-838
Coordinador: Ema Obando
Segundo semestre
2018.

Palabras clave: Electrones, Hígado, enzima, se reduce el número de moléculas que quedan
deshidrogenasa,inhibidor,reversible,irreversible. para transformarse, y la velocidad disminuye a
medida que la reacción se va produciendo
Objetivos: (Mathews, 2002).
 Observar cualitativamente la CTE
Los inhibidores o sustratos enzimáticos son
mediante la acción de la deshidrogenasa
moléculas que se unen a enzimas y disminuyen
succínica en extractos de hígado,
su actividad. La inhibición enzimática es
utilizando indicadores redox como
importante por varias razones: sirve como un
aceptores artificiales de electrones.
mecanismo de control fundamental en los
 Establecer qué sustancias pueden
sistemas biológicos permitiendo la regulación
actuar como inhibidores de la
de los caminos metabólicos, muchos
deshidrogenasa succínica.
medicamentos actúan inhibiendo enzimas
especificas en el cerebro o en los tejidos
Marco Teórico: corporales, la comprensión del mecanismo de
inhibición enzimática es, por tanto, esencial.
La cadena de transporte de electrones es una Los propios inhibidores se usan frecuentemente
serie de transportadores de electrones que se como herramientas para el estudio del
encuentran en la membrana plasmática de mecanismo de las propias enzimas (Harrys A,
bacterias, en la membrana interna mitocondrial 2009).
o en las membranas tilacoidales, que median
reacciones bioquímicas que producen
adenosina trifosfato (ATP), que es el
Materiales y reactivos:
compuesto energético que utilizan los seres
vivos (Cox & Nelson,1995). Tabla1.Materiales.
Materiales Cantidad Capacidad
Un catalizador es una sustancia que aumenta
Vasos 1 250mL
la rapidez o velocidad de una reacción química, Químicos
sin verse alterada ella misma en el proceso Agua destilada 270mL ---
global. La mayor parte de los catalizadores Tubos para 6 ---
biológicos, aunque no todos ellos, son centrifuga
proteínas que denominamos enzimas. La licuadora 1 ---
Potenciómetro 1 ---
sustancia sobre la que actúa una enzima se
Plancha para 1 ---
denomina sustrato de esa enzima. La calentar
transformación de cada molécula de A en B es hígado 1porción ---
un fenómeno independiente. Así pues, a
medida que se consumen las moléculas de A,
Tabla2. Reactivos. -Masa Molar: s, falta de
Descripción Propiedades Toxicidad 65.01g/mol respiración y
Fosfato Propiedades Baja toxicidad. Propiedades desmayo.
monobásico Físicas Al contacto ocular Químicas •Ingestión:
de sodio, -Apariencia: irritaciones. - Solubilidad Altamente Tóxico.
(NaH2PO4) sólido de color en agua a 17 Puede producir
blanco, ºC : 42 g/100 g jadeo, edema
inodoro. de agua. pulmonar y latido
-Densidad: cardíaco rápido en
2,04g/cm3. los 5 primeros
-Masa Molar: minutos, y a los 15
137.99g/mol minutos pueden
Propiedades ocurrir náuseas,
Químicas vómitos, dolor de
Solubilidad: cabeza, excitación y
Soluble en diarrea,
agua 1,013g/L convulsiones,
agua a 20ºC. colapso, muerte.
• Contacto con la
2,6diclorofen Propiedades Levemente toxico. Piel y ojos:
ol Físicas Altamente Tóxico.
(C6H4Cl2O) -Apariencia: Causa irritación,
polvo verde enrojecimiento y
oscuro. dolor y visión
-Masa Molar: borrosa.
326.11g/mol Cianuro de Propiedades Muy tóxico por
Propiedades sodio Físicas inhalación, por
Químicas (NaCN) -Apariencia: ingestión y en
-Solubilidad: polvo blanco contacto con la piel.
Difícilmente con olor débil a En contacto con
soluble en almendras ácidos libera gases
agua. amargas. muy tóxicos.
-Punto de
Malonato de Propiedades La sustancia no está ebullición:
sodio Físicas clasificada como 1496ºC
(C4H2Na2O4) -Apariencia: peligrosa para la -Punto de
polvo blanco. salud o el medio fusión: 563ºC
-Masa ambiente. -Densidad:
Molar:148g/m 1.55g/cm3
ol -Masa Molar:
Propiedades 49,01
Químicas Propiedades
-Solubilidad: Químicas
soluble en Solubilidad en
agua. agua: 600g/L a
20ºC
Succinato de Propiedades No produce
sodio Físicas irritaciones y no
(NaOOC - -Apariencia: produce ningún Metodología:
CH2-CH2- polvo cristalino efecto perjudicial
COONa blanco para la salud
.6H2O) inodoro. cuando se maneja Preparación del homogenizado
-Punto de adecuadamente.
fusión: 120ºC.
-Masa Molar:
270,15g/mol
Propiedades En una licuadora homogenize el hígado +
Químicas 100mL
-Solubilidad:
200g/L en
agua
Azida de Propiedades Inhalación: Puede
sodio Físicas causar irritación del
Y a 40 mL del homogenizado se diluye hasta
200mL de agua destilada, se agita. Y se
(NaN3) -Apariencia : tracto respiratorio y
emplea en las siguientes pruebas.
Cristales membranas
incoloros. mucosas,tos,mareo
 Preparación de los diferentes Soluciones para
las pruebas
Tubo1: 0.5mL de amortiguador + 1mL de
agua destilada + 1mL de homogenizado +
1mL de indicador.
Tubo2: 0.5mL de amortiguador +0.5mL de
sustrato + 0.5mL de agua destilada + 1mL
de homogenizado + 1mL de indicador.
Tubo3: 0.5mL de amortiguador + 0.5mL de
sustrato + 0.5mL de agua destilada + 1mL
de homogenizado + 1mL de indicador.
Tubo4: 0.5mL de amortiguador + 0.5mL de
sustrato + 1mL de homogenizado + 1mL de
indicador+0.5mL de malonato de sodio.
Tubo5: 0.5mL de amortiguador + 0.5mL de
sustrato + 1mL de homogenizado + 1mL de
indicador +0.5mL de azida de sodio.
Tubo6: 0.5mL de amortiguador + 0.5mL
de sustrato + 1mL de homogenizado +
1mL de indicador + 0.5mL de cianuro de
sodio.
Calentar el homogenizado del tubo3 por 15min a
52ºC.
Se debe dejar la adición del homogenizado de
último.
Se agitan los todos los tubos y se ponen en un baño
de agua a 37ºC por 30min. Observe el tiempo que
tarda en desaparecer el color de los tubos. Si es
necesario, a los 30min centrifugue a 3000rpm por
3min.Decante el líquido en tubos de ensayo limpios.
Resultados:
Cuadro Nº1. Pruebas para la cadena de transporte
electrónico con la deshidrogenasa succínica del
hígado.
Tubo Observación
1 Cambio de una coloración crema a verde
a los 1:27segundos.
2 Instantáneamente chocolate a los
2segundos.
3 No cambio
4 Cambio de una coloración azul a
chocolate, a los 20 segundos.
5 Cambio de una coloración azul a verde y
luego chocolate , a los 4min
6 Cambio de una coloración azul a
chocolate, a los 10segundos.
Figura1. Pruebas para la cadena de transporte electrónico con
la deshidrogenasa succínica del hígado
Discusión:
Los componentes de la cadena se encuentran
en la membrana mitocondrial interna, los cuales
son equivalentes de reducción del NADH y
FADH2 (donadores) producidos en la matriz,
dichos componentes actúan secuencialmente
en orden creciente según sus potenciales de
reducción, los electrones de dichos donadores
son pasados a través de la cadena de
electrones hasta el oxígeno, el cual se reduce
para formar agua o generar flujo de H+ hacia el
espacio intermembranoso originando una
fuerza protomotriz, a su vez la energía que se
libera durante la transferencia electrónica está
acoplada a varios procesos endergónicos entre
los que se destaca la síntesis de ATP, sin
embargo son utilizados inhibidores en el
transporte de electrones en la cadena de la
respiración para evitar las reacciones redox y la
transformación de energía en ATP
(Solomon,1998). No obstante, las enzimas que
catalizan estas reacciones tienen la capacidad
de crear simultáneamente un gradiente de
protones a través de la membrana, produciendo
un estado altamente energético con el potencial
de generar trabajo; cabe señalar que en nuestra
experiencia se utilizó la enzima succinato
deshidrogenasa presente en el hígado (res), la
cual actúa separando los átomos de hidrógeno
que se están en posición trans de los átomos
de carbono metilénicos del succinato. Además,
existen sustancias cuya acción sobre una
enzima es la disminución de su actividad
llamados inhibidores enzimáticos (malonato,
cianuro y azida de sodio), donde el inhibidor se
combina reversiblemente con la enzima en el
sitio por el cual se debería unir el sustrato
(Succinato de sodio) impidiendo por lo tanto la
formación del complejo activo enzima-sustrato.
Es así, entonces que tanto el inhibidor como el
sustrato compiten por el mismo sitio y tratan de
unirse a la enzima (Ehu, s.f.).
Al observar el efecto que tienen los inhibidores
sobre la actividad de la deshidrogenasa, con
respecto al tiempo que demora en descolorear
el indicador redox azul de metileno el cual es un
aceptor de electrones artificial, que es
coloreado cuando se encuentra oxidado e
incoloro o crema cuando se reduce en la
medida en que se reoxida la coenzima FAD.
Con este cambio del indicador redox se
comprueba que la enzima está transformando
el sustrato; es importante mencionar que se
utilizó un amortiguador (fosfato monobásico de
sodio) que mantiene la actividad enzimática, ya
que la mayoría de los enzimas son muy
sensibles a los cambios de pH, por lo cual
dichos cambios pueden provocar la
desnaturalización de la enzima, también como
la conformación de las proteínas depende, en
parte, de sus cargas eléctricas, habrá un pH en
el cual la conformación será la más adecuada
para la actividad catalítica (De Robertis & Hib,
2001). Ahora bien con respecto a los
inhibidores mencionados como el malonato de
sodio fue más efectivo debido a que presenta
una inhibición competitiva, donde el ácido
malónico inactiva la enzima ya que presenta un
cierto parecido estructural con el sustrato, de
manera que puede competir con él por acceder
al centro activo, pero que no posee ningún
enlace susceptible de ser atacado por la
enzima, el inhibidor forma con la enzima libre
un complejo enzima-inhibidor de características
cinéticas análogas a las del complejo enzima-
sustrato; sin embargo el inhibidor azida de
sodio es de tipo irreversible que son
generalmente específicos para un tipo de
enzima y no inactivan a todas las proteínas. No
funciona destruyendo la estructura proteínica,
sino alterando específicamente la estructura
tridimensional del sitio activo, también se debe
a que las azidas afectan a la cadena
respiratoria de una forma muy similar al cianuro,
ya que ambas al unirse en forma covalente a la
enzima de modo permanente uniéndose a
algún grupo funcional esencial para la catálisis
con lo que la enzima queda inactivamente
irreversible, es decir bloqueando la actividad
enzimática (Harrys, 2009). Cabe mencionar
que en tubo 2 de la figura 1 se comprobó que la
enzima estaba transformando al sustrato en
producto ya que reaccionó con el cambio de
coloración a los 2 segundos, visualizándose por
medio del indicador; mientras que en el tubo 3
se calentó el homogenizado por lo cual se
desnaturalizó la enzima (deshidrogenasa
succínica) y por tanto esta perdió su actividad
catalítica (Mathews, 2002), demostrándose así
en nuestra experiencia que la temperatura es
un factor desnaturalizante para la actividad
catalítica de la enzima y al no hacer ningún
cambio o reacción con el indicar no iba a ver
evidencia de la transformación del sustrato en
producto.
Conclusión:
 Concluimos que se deben controlar
diversas variables como el pH a través
de un amortiguador y la temperatura, ya
que la actividad enzimática de la enzima
depende de un pH y una temperatura
óptima.
 La efectividad de los inhibidores
dependen del tipo de inhibición que
presentan con la enzima, por lo cual el
malonato es más efectivo ya que es una
inhibición competitiva y los otros dos son
inhibidores irreversibles.

Bibliografía:
 De Robertis, E.& Hib, J. (2001).
Fundamentos de Biología Celular y
Molecular. 4º Edición. El Ateneo. Bs.As.
 Cox M. & Nelson L. (2006). Principios de
Bioquímica. Barcelona: Editorial Omega.
 Harrys A. (2009). Enzimas: Recuperado
el 22 de octubre de 2018 de:
http://agu.inter.edu/halices/enzimas.pdf
 Mathews C. (2002) Bioquímica, tercera
edición. España: Pearson Educación, S. A.
 Solomon y col. (1998). Biología de Villee.
4ª. México: Editorial McGraw-Hill.
Interamericana.
 Ehu. (s.f.). Enzimas. Recuperado el 22
de octubre de 2018 de:
http://www.ehu.es/biomoleculas/enzima
s/enz22.htm#t
Cuestionario:
1.¿En qué tiempo desaparece el color en
el tubo 2?
Resp. Instantáneamente, que fue a los 2
segundos.

2. ¿Por qué no desaparece el color en los

tubos 1 y 3?
Resp.

3.Presente las reacciones

correspondientes en los tubos donde
hubo actividad enzimática.
Resp.

4. Clasifique los inhibidores como

efectivo, parcialmente efectivo o no
efectivo.
Resp.

5. Investigue qué tipo de inhibidor es el

malonato. Presente el esquema de
inhibición.
Resp.

6. ¿Qué papel desempeña la succinato

deshidrogenasa en el ciclo de Krebs y en
la Cadena de Transporte Electrónico?
Resp.