TÉCNICAS DE MICROSCOPIA
Manter o aparelho sempre limpo e evitando poeira,
1. MICROSCÓPIO ÓPTICO
O microscópio, de uma maneira geral, compõem-se de
duas partes: a mecânica e a óptica.
Parte Mecânica:
a) Braço: preso à base; estrutura rígida que suporte o
canhão, platina, condensador e a fonte luminosa;
b) Canhão: tubo onde se dispõem as partes ópticas de
ampliação, geralmente possuindo movimento
vertical;
c) Revolver: peça giratória, onde se conectam as
objetivas, permitindo a mudança das mesmas;
d) Platina: mesa de trabalho, onde se coloca a lâmina
para exame;
e) Chariot: dispositivo preso à platina, destinado a
movimentar a lâmina em exame;
f) Parafuso Macrométrico: destinado a deslocar
verticalmente o canhão, aproximando ou afastando
as objetivas da lâmina em observação. Serve para a
localização grosseira;
g) Parafuso Micrométrico: têm a mesma função da
macrométrica, porém serve para a localização fina.
Parte óptica:
Sistema de Iluminação:
Fonte luminosa:
a) Diafragma íris: localiza-se abaixo do condensador,
destinando-se a aumentar ou restringir o feixe
luminoso;
b) Condensador: preso à parte inferior da platina, o
condensador converge à luz em direção à
preparação.
Sistema de Ampliação:
c) Objetivas: sistema óptico conectado ao revolver,
fornece imagem real, aumentada, do material;
d) Oculares: sistema óptico encaixado no extremo
superior do canhão, ampliando a imagem fornecia
pelas objetivas.
1.2 UTILIZAÇÃO E CUIDADOS COM O MICROSCÓPIO
a) Transporte: segurar o braço com uma das mãos e
apoiar a base com a outra, mantendo o aparelho na
posição vertical, para evitar que partes ópticas se
soltem e caiam. Choques devem ser evitados para
que os sistemas ópticos não saiam de concordância.
pois esta é inimiga dos instrumentos ópticos.
b) Iluminação: pode ser regulada aproximando ou
afastando o condensador de platina e abrindo ou
fechando o diafragma, sempre observando através
da ocular. Deve-se regular constantemente a luz,
adaptando-a para preparações mais opacas ou mais
transparentes.
c) Focalização: girando o revolver, selecionar a
objetiva de menor aumento. Caso esteja muito
próxima à platina, subir o canhão, empregando o
parafuso macrométrico. Colocar a preparação
(lâmina) sobre a platina. Olhando por fora do
aparelho, baixa-se à objetiva bem próxima à
preparação. Em seguida, olhando pela ocular e
empregando o parafuso macrométrico, sobe-se o
canhão até observar uma imagem mais ou menos
nítida. Por fim, utilizando-se o parafuso
micrométrico, faz-se à localização fina. Deve-se
manter o parafuso micrométrico próximo a metade
do seu curso a fim de permitir movimentos livres
para cima e para baixo.
2. MICROSCÓPIO ESTEREOSCÓPICO (LUPA).
A lupa é utilizada constantemente para materiais muito
grandes ou muito opacos para serem observados ao
microscópio. É utilizada ainda na preparação de material
para observação ao microscópio, como por exemplo,
realização de cortes, dissociação de tecidos, localização
de estruturas, etc.
Possui um sistema de iluminação inferior,
principalmente para materiais mais transparentes e
outro de iluminação superior, para materiais opacos.
Os mesmos cuidados descritos para o microscópio
devem ser tomados com a lupa e, em especial, não fazer
preparações diretamente sobre a platina, mas sim sobre
lâmina de vidro ou papel vegetal.
3. PREPARAÇÃO DO MATERIAL.
3.1. Confecção de Cortes:
A microscopia óptica só permite a observação de
objetos transparentes ou translúcidos; logo, exige
materiais cortados em secções finas para permitir a
transmissão da luz.
Os cortes podem ser feitos com auxílio de micrótomo
(geralmente para preparação de lâminas permanentes)
ou de lâminas de barbear novas (lâminas
semipermanentes ou de curta duração). Materiais
resistentes podem ser segurados com os dedos polegar
e indicador e, materiais delicados, podem ser presos em
um suporte macio e homogêneo, como medula de
imbaúba, isopor, etc. Bons cortes podem ser obtidos
colocando-se o material sobre papel vegetal e
observando este à lupa. Após prender este como dedo
indicador, secionar com gilete nova (manter um ângulo
de 30 graus em relação ao material) fazendo
movimentos contínuos e suaves com a mesma, sobre o
material.
Os cortes selecionados podem ser removidos com um
pincel e colocados sobre a lâmina com água ou álcool
70%.
Normalmente, para se obter um bom corte é necessário
fazer vários, selecionando apenas os melhores.
3.2. Montagem das Lâminas.
O material para exame deve ser montado em lâminas de
vidro especiais para microscopia e recoberto com
lamínula, também de vidro. A lâmina deve estar limpa,
sendo um bom critério para avaliar sua limpeza, colocar
uma gota de água sobre a mesma. Se a gota se espalhar,
tendendo a ocupar ampla superfície, a lâmina pode ser
considerada limpa, caso contrário deve ser novamente
lavada. As lâminas podem ser lavadas com detergente e
guardadas em álcool 70%.
A preparação deve ser feita colocando uma gota do
meio de montagem sobre a lâmina, com auxilio de um
estilete, pinça ou pincel. Se necessário, dissocia-se o
material com dois estiletes, observando-se à lupa.
Cobre-se a preparação com a lamínula, tomando
cuidado para evitar bolhas de ar. O excesso de líquido de
montagem, que extravasa pelos bordos da lamínula
deve ser retirado com papel absorvente, evitando-se
que a platina do microscópio se molhe.
A substituição de um líquido de montagem por outro,
por exemplo, um corante, pode ser feito sem a remoção
da lamínula. Para isso, coloca-se uma gota do novo
líquido sobre a lâmina, junto ao bordo da lamínula. Do
outro lado de lamínula encosta-se um pedaço de papel
de filtro que por capilaridade promoverá a substituição.
Preparações semipermanentes são feitas evitando-se a
evaporação do líquido de montagem. Neste coso é
importante empregar como líquido de montagem um
fechado (formol a 4%) para evitar a decomposição do
material. A vedação da lamínula pode ser feita com
esmalte de unha incolor. Para isso a lâmina e a face
superior de lamínula devem estar bem limpas e secas.
Uma preparação em lâmina pode ser mantida, ainda,
por curtos períodos (uma semana ou menos) em uma
câmara úmida feita com placa de Petri, especialmente
quando o líquido de montagem for glicerina a 30%.
Uma boa lâmina, onde se faz uma boa observação, deve
apresentar as seguintes características:• Isenta de
bolhas de ar;
• Conter pequena quantidade de material, pois as
preparações muitos densas impedem a passagem de luz;
• Ter líquido em toda extensão entre a lâmina e
lamínula;
• A lamínula não deve estar flutuando (o excesso de
líquido pode ser retirado com papel absorvente);
• Nunca deve haver líquido sob a lâmina. A platina não
deve ser molha.
4. ILUSTRAÇÃO.
Selecionar as partes e estruturas para documentar o
estudo, iniciando pelo aspecto geral, em observação
macroscópica em lupa e finalmente ao microscópio.
Neste último, inicia-se com a objetiva de menor
aumento, passando-se para aumentos maiores
conforme o que se pretende observar.
As legendas nunca devem faltar e devem ser indicadas
por meio de traços bem visíveis e cuja extremidade se
localize sobre a estrutura correspondente.
5. SOLUÇÕES FIXADORAS E CORANTES EMPREGADOS
EM ESTUDOS DE ALGAS.
a) Solução de Formalina (1 litro):
Formol P.A.(40 ml) + Água destilada (960ml);
b) Solução de Transeau:
Formol a 40% 100 ml + Álcool a 96o G. L 300 ml + Água
destilada 600 ml.
c) Solução de Lugol Acético:
Iodo 20 g + KI 20 g + água destilada 200 ml + Acido
acéticos 20 g.

d) Solução de Karo: É um meio de montagem usado em

preparação de lâminas semi-permanentes. Evita o
dessecamento do material pela evaporação da água da
lâmina.

Xarope de açúcar de milho (Karo) 50ml + Água destilada

50ml + 3 cristais de fenol;

e) Coloração: consiste em passar o material em soluções

de corantes ou reagentes. Assim o material apresentará
uma cor ou duas ou mais cores diferentes, ou então
apenas algumas estruturas ficarão coradas. Os corantes
empregados na aula são:

1º) Azul de anilina: corante aquoso que têm afinidade

por protéina, corando componentes protéicos em azul.
Azul de anilina. 0,05 g + Água destilada 100,0 mL;

2º) Azul de toluidina: corante aquoso, cora o material de

diferentes cores no espectro da côr rosa até azul devido
a metacromasia.

Azul de toluidina. 0,05g + Água destilada .100,0mL.

Nos dois casos acima, após a coloração, lavar os cortes

em água destilada e posteriormente colocar solução de
karo.

Para realizar a vedação das bordas da lamínula utilizar

esmalte incolor, este procedimento evita a evaporação
do meio de montagem.

Para evidenciar flagelos e mucilagem das algas utiliza-se

o emprego da tinta nanquim, tal procedimento deixa a
lâmina fosca e enegrecida permitindo evidenciar tais
estruturas.