Base de dato PubMed
de búsqueda
Autor y año Manju M Pillai, Ragunathan Latha, y Gautam
Sarkar.
2012
Palabras Gen mecA, resistencia a la meticilina, reacción en
claves cadena de la polimerasa, Staphylococcus aureus,
Staphylococcus aureus resistente a la meticilina
(SARM), Staphylococcus aureus sensible a
meticilina (SASM), método de difusión en disco de
oxacilina (ODD), agar manitol salado (MSA), método
difusión en disco.
Objetivo del Comparar el método de difusión en disco de
trabajo. oxacilina y el agar manitol salado con oxacilina, dos
métodos fenotípicos convencionales, con la
reacción en cadena de la polimerasa (PCR) para el
gen mecA.
Resultados En el presente estudio, el porcentaje de SARM en
(Datos duros) los aislamientos de S. aureus fue de 37,5%
Del total de 165 muestras analizadas, el método por
PCR para el gen mecA detectó 62 (37,57%) SARM
y 103 (62,43%) SASM. Por otro lado, mediante los
métodos convencionales de microbiología, el cultivo
y la determinación de la sensibilidad usando el ODD,
detectó 75 (45,45%) SARM, mientras que MSA con
oxacilina detectó 65 (39,39%) SARM. Cuatro de las
muestras que fueron positivas para el gen mecA
(SAMR) mediante PCR se detectaron como SASM
(no detectadas como SARM) por el método ODD. De
las 103 muestras PCR-negativas (No SAMR), 17
muestras fueron detectadas como SARM por el
método ODD. Ocho de las muestras positivas para
el gen mecA mediante PCR se detectaron como
SASM (no detectadas como SARM) por el método
MSA con oxacilina. De las 103 muestras PCR-
negativas para el gen mecA, 11 muestras fueron
detectadas como SARM por el método MSA con
oxacilina.
Se encontró que la sensibilidad y la especificidad de
la prueba de ODD fue de 93,5% (86,4-97,3%) y
83,5% (79,2-85,8%), respectivamente, y de MSA
con oxacilina fue de 87,1% (79,5-92,3%) y 89,3%
(84,8-92,5%), respectivamente.
Además, se obtuvo que el tiempo necesario para
diagnosticar SAMR por métodos convencionales fue
de 48-72 horas, tiempo mucho mayor en
comparación con la PCR que permitió obtener
resultados en 18-24 horas
Metodología Se incluyeron en el estudio observacional
hospitalario un total de 165 aislamientos
clínicamente significativos, consecutivos de S.
aureus recibidos en el Departamento de
Microbiología del hospital designado para realizar
las actividades experimentales.
PubMed
T. Otsuka, H. Zaraket, T. Takano, K. Saito, S.
Dohmae, W. Higuchi, y T. Yamamoto
2007
Resistencia a la clindamicina, test de difusión de
doble disco, erm (A), erm (C), resistencia a los
macrólidos, Staphylococcus aureus,
Staphylococcus aureus resistente a la meticilina
(SARM), Staphylococcus aureus sensible a
meticilina (SASM), mecanismo de resistencia
MLSB, leucocidina de Panton-Valentine (PVL),
clindamicina.
Determinar los mecanismos de resistencia MLSB
fenotípicamente mediante D-test, así como
también genotípicamente, es decir, detectar los
genes de resistencia a macrolidos-lincosamida-
estreptogramina B (genes erm(A), erm(B),
erm(C), msr(A)/(B), ere(A) y ere(B)) mediante
PCR en cepas de Staphylococcus aureus
resistente a la meticilina (MRSA) adquirido en la
comunidad (SARM-AC), y en el adquirido en el
hospital (SARM-AH), además del S. aureus
susceptible a la meticilina (SASM).
Se aislaron en total 269 SARM y 434 SASM.La
distribución de los fenotipos y genotipos de
resistencia MLSB fue la siguiente, de los 269
aislamientos de SARM, 261 (97,0%) fueron
resistentes a los agentes MLSB, y ocho (3,0%)
fueron susceptibles a los agentes MLSB. Por otra
parte, de los 434 aislamientos de SASM, 150
(34,6%) fueron resistentes a los agentes MLSB, y
284 (65,4%) fueron susceptibles a los agentes
MLSB. El fenotipo constitutivo (61,3% en SARM,
1,3% en SASM) y erm (A) predomina entre los 261
cepas de SARM resistentes a la eritromicina,
mientras que el fenotipo inducible (38,7% en
SARM, 94,0% en SASM) y erm (C) fueron más
frecuentes entre los 150 aislados SASM
resistentes a la eritromicina.
En total, se recogieron 703 aislamientos clínicos
de pacientes individuales, consistentes en 269
SARM y 434 SASM aislados, entre 2001 y 2006
de cinco hospitales generales y dos clínicas
pediátricas en Niigata, Japón.
 1. Identificación bacteriana y pruebas de
susceptibilidad antimicrobiana:
Las muestras clínicas se inocularon en agar sangre
de oveja al 5% y agar MacConkey (HiMedia, Nueva
Delhi, India), luego se incubaron a 37 ° C durante
24-48 horas y transcurrido este tiempo, se
examinaron para detectar el crecimiento bacteriano.
Para identificar y confirmar el aislamiento de cepas
de S. aureus se utilizaron métodos estándar
basados en la morfología de las colonias, la tinción
de Gram, la prueba con catalasa, fermentación con
manitol y la prueba con coagulasa.
Posteriormente se utilizó el método de difusión en
disco Kirby-Bauer modificado utilizando discos de
oxacilina (1 μg) en agar Mueller-Hinton de acuerdo
con las indicaciones del Instituto de Estándares
Clínicos y de Laboratorio (CLSI) como una prueba
para determinar la resistencia a meticilina de S.
aureus basados en criterios de tamaño estándar de
zona de inhibición para definir la sensibilidad o
resistencia.
Así las cepas de S. aureus se estudiaron mediante
tres técnicas para diagnosticar MRSA:
(1) Método ODD
Se realizo en todas las cepas aisladas de S. aureus
con 1 mg de oxacilina por disco en 25 ml de agar
Mueller-Hinton sin incubación de NaCl2 a 37ºC. El
tamaño de la zona se interpretó de acuerdo con el
CLSI de la siguiente manera: Susceptible, 13 mm;
Intermedio, 11-12 mm; Y resistente, 10 mm.
(2) Cultivo en medio MSA que contenía oxacilina (a
una concentración de 6 μg/ml de medio) y NaCl al
4%
Se pesaron 11,1 g de base MSA, los que se
añadieron a 100 ml de agua destilada contenida en
un matraz cónico y se esterilizo en autoclave,
finalizado esto, cuando la temperatura alcanzó los
50 ° C, se añadio la solución de oxacilina al medio
autoclavado de modo que la concentración final de
oxacilina se convirtió en 6 μg/ml de medio. Una vez
que el medio se estableció, se procedió a sembrar
la placa MSA con la muestra y se incubó a 37 ° C
durante la noche (24 horas). Cualquier crecimiento
en el medio se tomó como MRSA.
(3) PCR para la detección del gen mecA. Se
incluyeron dos cepas estándar, una MRSA ATCC
(43300) y una MSSA ATCC (29213), en cada lote de
ensayo por todos los métodos.
Un extracto crudo de bacterias (ADN) se preparó por
el método de lisis en microondas, donde las colonias
de S. aureus se suspendieron en 10 μl de buffer TE
(pH 8) en un tubo de microcentrífuga. Así las
bacterias se lisaron por irradiación en un microondas
usando siete impulsos de 1 minuto cada uno con un
intervalo de 1 minuto entre ellos. Luego se enfrió de
forma brusca a 4ºC seguido por centrifugación a
10.000 rpm durante 30 segundos. De esta manera
se logró obtener el extracto crudo para utilizarlo en
Los aislamientos de MRSA incluyeron 125
aislamientos de SARM-AH PVL-negativos de la
sangre, esputo, derrame pleural, absceso, piel u
orina de pacientes adultos, 117 cepas de SARM-
AH PVL-negativos de neonatos en la terapia
intensiva neonatal y 27 aislados de SARM-AC
(incluyendo dos aislamientos PVL positivos, NN1
y NN12) de impétigo ampolloso o hisopos nasales
de niños.
Los aislados de SASM fueron de infecciones de la
piel (por ejemplo, impétigo ampolloso) o hisopos
nasales de adultos y niños.
Todas los aislados se almacenaron a -80ºC.
Para el crecimiento bacteriano, se utilizó caldo
Luria-Bertani (Difco Laboratories, Detroit, MI,
EE.UU.) y agar Mueller-Hinton (Becton Dickinson,
Sparks, MD, EE.UU.). Para las pruebas de
susceptibilidad, se utilizó el método de difusión de
disco CLSI, con discos que contenían 2 μg de
clindamicina, 15 μg de eritromicina y 15 μg de
azitromicina (Nissui Pharmaceutical Co., Tokio,
Japón).
La resistencia inducible a la clindamicina se
detectó por D-test colocando 15 μg de eritromicina
y 15 μg de discos de azitromicina a 12 mm de un
disco de clindamicina de 2 μg (en el centro) y a 26
mm de distancia entre sí (borde a borde). Después
de la incubación durante 18 horas a 35 ° C, el
resultado del ensayo D se interpretó como
constitutivo, inducible (subdividido en fenotipos D
y D+) u otro tipo de resistencia (resistencia a la
eritromicina y azitromicina, pero sin resistencia
inducible a la clindamicina).
Los genes de resistencia MLSB erm (A), erm (B),
erm (C), msr (A) / (B), ere (A) y ere (B) fueron
detectados por PCR utilizando cebadores
descritos anteriormente. Los productos de PCR se
visualizaron después de la electroforesis en geles
de agarosa al 1,5% p/v. El análisis de los datos se
realizó mediante el chi-cuadrado y las pruebas
exactas de Fisher, con valores de p <0,05
considerados significativos.
 la PCR como si fuera ADN, ya que no se llevó a cabo
ninguna extracción de ADN.
El gen mecA se amplificó utilizando dos cebadores
de 25 pb sintetizados a partir de una región
altamente conservada de la secuencia del gen mecA
de 2,456 pb. El primer mecA1 (5'-GTA GAA ATG
ACT GAA CGT CCG ATA A) correspondía a los
nucleótidos 318 a 342. El primer mecA2 (5 '- CCA
ATT CCA CAT TGT TTC GGT CTA A) fue
complementario a los nucleótidos 603 a 627. La
amplificación con estos cebadores permitió obtener
un producto específico del gen mecA de 310 bp.
Después de la síntesis, los cebadores se purificaron
mediante el procedimiento de cartucho de
purificación de oligonucleótidos (Applied
Biosystems).

El ADN (extracto crudo) se amplificó mediante PCR

utilizando 100 μl de una mezcla de reacción que
contenía 200 μM de (cada uno) desoxinucleósidos
trifosfatos, 2,5 μM (cada uno) de los cebadores, 2,5
U de Taq ADN polimerasa (Bangalore Genei), 50
mM KCl, 10 MM de Tris - HCl (pH 8,3), 1,5 mM de
MgCl2 y 0,01% de gelatina. Los pasos del
procedimiento fueron los siguientes:
- Pre-desnaturalización durante 4 min a 94 ° C
- Desnaturalización durante 45 s a 94 ° C
- Hibridación durante 45 s a 55 ° C
- Extensión del cebador durante 1 min a 72 ° C.
Cada paso se repitió 30 veces. Se cargaron 20 ul de
la mezcla de reacción en un gel de agarosa al 1,0%
con bromuro de etidio. La banda de ADN amplificado
se visualizó bajo transiluminador UV. Se obtuvo un
amplicón de 310 pb correspondiente al gen mecA.
Conclusiones Se concluye que las pruebas fenotípicas
comúnmente utilizadas no son completamente
confiables para la detección de resistencia a la
meticilina en S. aureus debido a que tienen baja
sensibilidad y especificidad ya que se encuentran
por debajo de los límites aceptables. Por lo tanto, la
PCR para el gen mecA es el mejor método para
detectar SARM con respecto a la precisión,
sensibilidad, especificidad, velocidad y rentabilidad.
Las pruebas de sensibilidad estándar, además del
D-test, son necesarios para determinar el tipo de
resistencia MLSB. Por otra parte, también es
imprescindible detectar a nivel del genoma otros
mecanismos de resistencia, por ejemplo, las
bombas de eflujo de macrólidos a cargo de los
genes msr (A) y msr (B) y la modificación
enzimática codificada por los genes ere (A) y ere
(B), que también se han descrito en S. aureus. Por
lo tanto, la identificación del gen que causa la
resistencia MLSB es importante clínicamente para
determinar el esquema necesario a realizar para
combatir de forma efectiva los mecanismos de
resistencia del patógeno presente en el paciente
Entre los aislados resistentes a la eritromicina en
este estudio, la resistencia constitutiva MLSB y el
gen erm (A) fueron predominantes entre SARM,
mientras que la resistencia inducible de MLSB y el
gen erm (C) fueron más prevalentes entre las
cepas SASM. Estas diferencias en la incidencia de
fenotipos y genotipos MLSB se adjudican a que
existen variables que tienen influencia sobre la
presencia, ausencia o predominio de algún
mecanismo de resistencia en S. aureus como lo
son el país, los patrones de infecciones y el uso
de drogas. Se sugiere que la resistencia de MLSB
en S. aureus debe estar bajo vigilancia constante
en cada país y región.
 Discusión La detección del gen mecA es indispensable para la
identificación precisa de SARM , y de acuerdo a los
resultados obtenidos es preciso declarar que la PCR
es una técnica útil en laboratorios clínicos. La
técnica de PCR tiene muchas ventajas por sobre las
técnicas convencionales. Los resultados falsos
negativos de los métodos convencionales pueden
ser detectados por la PCR en una fase muy
temprana de la enfermedad, de esta manera se
corrige el diagnostico incorrecto y es posible
administrar la terapia adecuada al paciente
permitiéndole que este logre curarse de su
condición, evitando así las consecuencias que
conllevarían utilizar métodos que no son aceptables
en cuanto a sensibilidad y especificidad (ODD y
MSA con oxacilina). Mediante los métodos
convencionales existieron aislados de SARM que
fueron detectados como MSSA, lo que puede
atribuirse al hecho de que la determinación precisa
de SARM por pruebas convencionales está sujeta
a variaciones en el tamaño del inóculo, el tiempo de
incubación. Estos factores hacen hincapié en la
necesidad de un método rápido, estandarizado,
preciso y sensible para la detección de SARM, que
no dependa de las condiciones de crecimiento. De
esta manera la PCR surge como un método que
puede demostrar con precisión la presencia del gen
mecA en pocas horas siendo una herramienta útil
para la identificación rápida e inequívoca de SARM.
Cabe destacar que los gastos y la carga de trabajo
de una sola PCR exceden la demanda de probar una
sola muestra clínica para la presencia de SARM,
pero si el número diario de pruebas de detección de
SARM aumenta, la carga de trabajo por PCR
disminuye y finalmente supera los gastos de los
reactivos moleculares. El costo de la PCR es alto en
comparación con los métodos fenotípicos
convencionales, pero el análisis estadístico de la
rentabilidad reveló que la PCR es la mejor opción,
además si se comparan los gastos debidos al
diagnóstico erróneo (ausencia de SARM) este será
mucho más que el costo de la PCR.
Limitaciones
Referencias (Pillai, Latha, & Sarkar, 2012)
Ninguno de los aislamientos de S. aureus poseía
los genes ere(A) o ere(B). Los resultados del test
de difusión de doble disco mostraron que la
eritromicina y la azitromicina eran igualmente
eficaces en la inducción de resistencia a la
clindamicina. Se encontró que casi todos los
aislados susceptibles a la clindamicina resistentes
a la eritromicina (incluyendo SARM y SASM) que
tenían el fenotipo inducible de MLSB portaban un
gen erm (97,2%, 242 de 249 aislamientos),
mientras que los siete aislados restantes el gen
msr (A)/(B), que fueron resistentes a eritromicina
y azitromicina.
Estos resultados fueron consistentes con la
mayoría de los informes anteriores con excepción
de los relativos a Grecia, donde se ha reportado el
predominio del gen erm (C) entre los aislados
SARM. El presente estudio también reveló una
mayor incidencia del fenotipo inducible MLSB en
Japón que en otros países. Tales diferencias en la
incidencia de la resistencia inducible MLSB podría
ser causada por las diferencias en las directrices
para el consumo de drogas en Japón, donde los
antibióticos MLSB no se recomiendan como
agentes de primera línea contra S. aureus. SARM-
AC y SARM-AH mostraron casi la misma
prevalencia del fenotipo MLSB. Así, el 30-40% de
los aislados resistentes a MLSB tenían el potencial
de expresar resistencia inducible MLSB,
independientemente del origen de SARM (hospital
o comunidad).
(Otsuka et al., 2007)
Base de dato PubMed JCR: ARCH PEDIATR INFECT DIS
de búsqueda
Autor y año Zahra Shokravi, Laleh Mehrad, y Ali Yasser Fasihi, Fereshteh Saffari, Mohammad Reza
Ramazani. 2015 Kandehkar Ghahraman y Davood Kalantar-
Neyestanaki.
2016
Palabras Staphylococcus aureus, resistencia a la Resistencia inducible a la clindamicina, gen erm (A),
claves meticilina, enzimas modificadoras de erm (B), erm (C) y mrs (A / B), macrólidos,
aminoglucósidos (EMAs), aminoglicósido N- lincosamidas, Staphylococcus aureus, linezolid,
acetiltransferasas (AACs), aminoglicósido O- vancomicina
fosfotransferasas (APHs), aminoglicósido O-
adeniltransferasas (ANTs), cassette
cromosómico estafilocócico, gen mecA,
Objetivo del Investigar la distribución de los genes de Detección molecular de los genes de resistencia a los
trabajo. resistencia a los aminoglucósidos clínicamente macrólidos y lincosamidas, incluyendo erm (A), erm
más significativos ANT(4')-IA, AAC(6')/APH (2'') (B), erm (C) y mrs (A/B), en cepas clínicas de SARM
y APH(3')-IIIA, así como también la distribución de Kerman, Corrí.
de los tipos de cassettes cromosómicos
estafilocócicos (SCCmec) en cepas de SARM
de dos hospitales universitarios de Zanjan, Irán
Resultados De los 260 hisopos nasales obtenidos de Todos los aislamientos fueron sensibles a linezolid y
(Datos duros) trabajadores de la salud, 104 de los aislados vancomicina. En total, más del 50% de los aislamientos
fueron identificados como S. aureus a través de fueron multirresistentes (MDR) y el 52,5% fueron
procedimientos bioquímicos y todos ellos SARM. Se observó resistencia inducible a la
fueron Sa442 y femA positivos (lo que implica clindamicina en el 12,5% de los aislamientos. Las
que eran S. aureus), y mediante PCR el gen prevalencias de los genes mecA, ermA, ermB, ermC y
mecA se encontró en 58 de los 104 aislados mrsA / B en los aislamientos fueron 39,5% (69/170),
estafilocócicos. Del total de 58 aislamientos de 11% (19/170), 3,5% (6/170), 20,5% (35 / 170) y 10,5%
SARM, todos fueron sensibles a la (18/170), respectivamente.
vancomicina. La resistencia a penicilina G,
oxacilina, gentamicina, eritromicina,
clindamicina, kanamicina y tobramicina se
encontró en 96,4%, 98,3%, 51,7%, 53,4%,
55,2%, 62% y 58,6% de los aislamientos,
respectivamente. Los genes más prevalentes
de EMAs fueron AAC(6')/APH (2'') (48,3%)
seguido de ANT(4)-IA (24%). El gen APH(3')-IA
fue el gen de EMA menos frecuente entre los
aislados de SARM (19%). De los 58 aislados de
SARM, 5 (8,6%) fueron SCCmec tipo I, 11
(19%) SCCmec tipo II, 20 (34,5%) SCCmec tipo
III, 17 (29,3%) SCCmec tipo IVa, 1 (1,7%
SCCmec tipo IVb, 2 (3,4%) SCCmec tipo IVc,
11 (19%) SCCmec tipo IVd, y 18 (31%)
SCCmec tipo V. 19 aislamientos no se
tipificaron.
Metodología a) Aislamiento de Bacterias: a) Aislamientos Bacterianos:
Las muestras nasales fueron recolectadas Se recogieron un total de 170 aislados clínicos de S.
entre noviembre de 2011 y febrero de 2012 de aureus de 145 pacientes hospitalizados y 25 pacientes
260 trabajadores de salud de dos hospitales ambulatorios en Kerman a partir de febrero de 2014
universitarios en Zanjan, Irán. Estas se hasta diciembre de 2015. S. aureus fueron
recogieron de las fosas nasales con hisopos de identificados por métodos estándar y bioquímicos, tales
recogida, y fueron directamente sembradas en como tinción de gram, producción de catalasa,
agar manitol sal, a continuación, se incubaron a coagulasa, reacción de DNasa y fermentación con
37 ° C durante 24 horas con el fin de aislar las manitol. Todos los medios de cultivo aplicados se
bacterias. adquirieron de Merck Co., Alemania. Los aislados se
La identificación inicial se llevó a cabo confirmaron mediante la detección del gen nuc (4).
utilizando métodos convencionales, incluyendo
tinción de Gram, morfología de colonias, b) Prueba de Susceptibilidad a antibióticos:
prueba de coagulasa y prueba de catalasa, y se La susceptibilidad antimicrobiana de los aislados a la
realizó una prueba confirmatoria adicional gentamicina (10 mg), amikacina (30 g), eritromicina (15
mediante la amplificación del cebador g), clindamicina (2 g), tetraciclina (30 g), ciprofloxacina
específico para los genes Sa442 y femA . Para
este propósito, el ADN estafilocócico se extrajo
utilizando el método de fenol / cloroformo.
El ADN extraído se almacenó a -20 ºC hasta su
uso. Se investigó la presencia del gen mecA
mediante un método de PCR usando un
conjunto de cebadores previamente descritos.
b) Ensayo de susceptibilidad
antimicrobiana
La resistencia fenotípica a varios antibióticos en
cepas de SARM se determinó usando el
método estándar de difusión en disco según las
directrices del Instituto de Estándares Clínicos
y de Laboratorio.
c) PCR multiple
Todos los aislados de SARM fueron estudiados
por PCR múltiple para determinar los tipos y
subtipos de cassettes cromosómicos
estafilocócicos (SCCmec) presentes. Además,
se eligieron tres conjuntos de cebadores
específicos para ANT (4 ') - IA, AAC.
Todos los aislamientos de SARM se analizaron
por PCR con una mezcla maestra de PCR que
contenıa 500 ng de ADN genómico, 20 μM de
cebador (10 μM por cada cebador) y agua
destilada hasta un volumen final de 25 μl.
También se incluyeron controles negativos y
positivos para PCR. La reacción se llevó a cabo
en un termociclador (iCycler, BIO-RAD, USA)
según el siguiente programa:
- 94ºC durante 5 min
- 35 ciclos de 94˚C durante 1 minuto
- 55˚C durante 45 s
- 72˚C durante 40 s
- Extensión final a 72ºC durante 7 min.
Después de la amplificación, los productos de
PCR se sometieron a electroforesis en agarosa
al 1,5%. Los geles se tiñeron con SyberGreen
y se fotografiaron bajo luz UV.
(5 g), trimetoprim / sulfametoxazol (1,25 /23.75 g),
linezolid (30 g), y la vancomicina (cribado resistencia a
la vancomicina se realizó con métodos de dilución) se
determinó de acuerdo a las indicaciones del Instituto de
normas clínicos y de laboratorio (CLSI)). Se utilizó S.
aureus ATCC 25923 como control para los
antibiogramas. Los Aislamientos resistentes al menos
a tres antibióticos de diferentes clases fueron
considerados resistente a múltiples fármacos (MDR) de
acuerdo con las recomendaciones de Magiorakos et al.
Todos los discos antibióticos aplicados se adquirieron
en Mast, Inc.
c) Detección de SARM:
Se utilizó la susceptibilidad a cefoxitina (30 μg) (Mast
Co.) para la determinación de aislamientos de SARM;
Entonces se examinaron para el gen mecA.
d) Detección de la resistencia inducible ala
clindamicina:
Se determinó con el D-test de acuerdo con las
indicaciones del CLSI.
e) Detección de genes de resistencia a los
macrólidos por PCR:
Se extrajo el ADN total por el método de ebullición.
Para los aislados resistentes a la eritromicina y la
clindamicina, se detectaron los genes de resistencia,
incluyendo erm (A), erm (B), erm (C) y mrs (A / B)
mediante el método de PCR utilizando cebadores
oligonucleotídicos específicos. Las reacciones de PCR
se realizaron en el termociclador PCR de FlexCycler2
(Analytik Jena) usando mezcla principal de PCR
(Ampliqon Inc., Dinamarca). Se usaron cepas de S.
aureus con mecA, erm (A), erm (B), erm (C) y mrs (A /
B) como controles positivos para PCR. Las reacciones
de PCR se realizaron en volúmenes totales de 25 μl.
La mezcla maestra contenía 12,5 μL de mezcla de
reacción con la mezcla maestra Taq DNA polymerase
red (Ampliqon), 0,5 μl de cada uno de los cebadores
directos e inversos en concentraciones de 10 μmol, 2
μl de ADN diana y 9,5 μl de agua destilada. Las
mezclas de PCR se sometieron 5 minutos a 96ºC,
seguido de 30 ciclos de 45 segundos a 95ºC para la
desnaturalización, 45 segundos para la extensión de
recocido (Tabla 1), extensión a 72ºC durante 2 minutos
y una extensión final Paso a 72 ° C durante 5 minutos.
Los productos de PCR se revelaron por electroforesis
en un gel de agarosa al 1,5% y posterior exposición a
luz UV en presencia de colorante de carga de DNA
Green Viewer (Pars Tous Biotechnology, Irán).
Conclusiones En conclusión los aminoglucósidos siguen
desempeñando un papel importante en las
terapias antiestafilocócicas, pero muchos de
ellos ya no tienen la misma efectividad sobre
SARM y en este estudio se observó un alto nivel
de resistencia de SARM a múltiples clases de
antibióticos, entre ellos a los aminoglucósidos,
y además una tendencia al alza en la aparición
de cepas de SARM-AC en hospitales. Por ello,
se debe tener en vigilancia al gen AAC (6')/APH
(2'') de la enzima modificadora de
aminoglucósidos por haber sido el más común,
y junto con ello a los tipos II y V de SCCmec,
que fueron los más frecuentes detectados en
aislamientos hospitalarios, respectivamente de
este estudio.
Finalmente, se debe mencionar que la
introducción de cepas de SARM-AC en
hospitales y otros entornos de atención de
salud se ha convertido en una amenaza para la
salud pública. Para prevenir la transmisión de
estas cepas de SARM-AC, se deben
administrar técnicas de monitorización precisas
y rápidas en contextos clínicos y comunitarios.
Discusión La resistencia a los antibióticos es un problema
importante en el mundo.Una amplia distribución
del gen mecA y los genes EMA en S. aureus se
ha demostrado en estudios previos. La
investigación actual también demostró la
prevalencia de los tipos y subtipos de SCCmec
junto con los genes de resistencia a
aminoglucósidos más clínicamente importantes
en los aislados de MRSA. El gen mecA se
detectó en 58 de los 104 especímenes
estafilocócicos. Entre los aislamientos positivos
mecA había un aislamiento de Staphylococcus
que no era fenotípicamente sensible a la
oxacilina, revelando de nuevo que la exposición
de diferentes perfiles fenotípicos y genotípicos
es posible. En el presente estudio, la
resistencia máxima de los aislados de SARM se
observó hacia oxacilina y penicilina G seguida
de kanamicina, tobramicina, clindamicina,
eritromicina y gentamicina. Casi el 76% de
nuestros aislamientos eran resistentes a al
menos cuatro o más agentes antimicrobianos
probados; A saber, oxacilina, penicilina G,
eritromicina, clindamicina, y tres de los cuales
eran aminoglucósidos. Los aminoglucósidos se
han utilizado en el tratamiento de las
infecciones estafilocócicas, pero la aparición de
las cepas resistentes, causadas en su mayoría
por EMA, reducen su eficacia. El gen AAC (6 ')
/ APH (2' '), que confiere resistencia a la
gentamicina, se determinó en el 48% de
nuestros aislados resistentes a la meticilina
seguidos por los genes ANT (4) -IA Y APH (3')
-IIIa, respectivamente. Estos resultados están
de acuerdo con estudios previos que
informaron que la prevalencia del gen AAC (6 ')
/ APH (2' ') es mayor que la de otros dos genes
EMA, ANT (4') - IA y APH (3 ') - IIIA, en
Se encontró una alta prevalencia de genes resistentes
a macrólidos e lincosamidas en cepas de S. aureus de
infecciones nosocomiales y adquiridas en la
comunidad en Kerman, Irán, lo que puede deberse a la
transferencia de genes de resistencia entre los
aislamientos, ya que como los genes de resistencia a
los macrólidos están localizados en elementos
genéticos móviles, la transmisión horizontal de
aislamientos resistentes a susceptibles es inevitable.
Debido a ello, la investigación de resistencia a los
antibióticos puede proporcionar información crucial
sobre el control de tales infecciones, y es necesario
identificar con precisión la resistencia a los antibióticos
en las pruebas de susceptibilidad de rutina.
De acuerdo a los resultados de este estudio, la
prevalencia de S. aureus resistente a los macrólidos y
lincosamidas fue alta en Kerman, Irán.
En los últimos años, el número de infecciones por S.
aureus, especialmente los MRSA resistentes a
macrólidos y lincosamida, han aumentado en todo el
mundo .
En el presente estudio, las tasas de resistencia más
altas se observaron para la tetraciclina, la eritromicina
y el ciprofloxacino, respectivamente.
Se observó una correlación significativa (P <0,05) entre
la presencia del gen mecA y los genes de resistencia a
macrólidos y lincosamidas en aislamientos de S.
aureus.
Los resultados mostraron que los genes de resistencia
a macrólidos, incluyendo erm (A,B,C) y mrsA / B se
asociaron con el gen mecA y aislados de MRSA. Estos
resultados sugieren que probablemente existe una
correlación entre el gen mecA y otros, como los genes
de resistencia a macrólidos, en cepas de S. aureus en
Kerman, Irán.
Por otra parte, todos los aislamientos tanto de
pacientes ambulatorios como de pacientes internados
eran susceptibles a vancomicina y linezolid; Estos
resultados están de acuerdo con Zmantar et al. En
Túnez y con Navidinia y Shahmohammadi et al. En el
suroeste de Irán. Por lo tanto, la vancomicina y linezolid
siguen siendo los agentes más activos contra los
aislados de MRSA.
Se encontró que la tasa de resistencia es alta en
aislamientos ambulatorios. Este hallazgo apoya la
predicción de que en un futuro próximo muchos
antibióticos, como ciprofloxacino, trimetoprim-
sulfametoxazol, clindamicina y eritromicina,
probablemente no podrán ser utilizados como agentes
para la terapia empírica de infecciones adquiridas en la
comunidad.
 aislamientos de SARM. Nuestros resultados los genes erm y msr han sido reportados en países
mostraron una correlación entre la presencia como Dinamarca, Reino Unido y Túnez. En Dinamarca
del gen AAC (6 ') / APH (2' ') y la resistencia a y Túnez, erm (A) y erm (B) fueron los genes más
la gentamicina. De los 30 aislamientos comunes de eritromicina y resistencia a la clindamicina,
susceptibles a la resistencia a la gentamicina respectivamente, pero en nuestro estudio, erm (C) fue
determinada por el método de difusión en disco, el más común. Eritromicina y los genes resistentes a la
sólo dos cepas fueron negativas para la clindamicina no se detectaron en 44 (46%) de los
presencia del gen AAC (6 ') / APH (2' '). La tasa aislados que mostraron resistencia a eritromicina y
de prevalencia del gen AAC (6 ') / APH (2' ') en clindamicina en el presente estudio, que es similar a la
este estudio (48%) fue significativamente investigación de Zmanter et al., Que no encontró
menor que la tasa reportada de dos hospitales correlación entre molecular y fenotípica Métodos para
en la capital, Teherán, 18 (83%) y mayor que la detección de eritromicina y resistencia a la
un informe de Turquía14 (es decir, 28%). Estos clindamicina. Esta diferencia puede explicarse por la
resultados contradictorios pueden ser naturaleza heterogénea de la resistencia a la
causados por cambios en las políticas de eritromicina, o puede ser debido a la pérdida de
antibióticos. El segundo EMA más frecuente pequeños plásmidos que llevan genes erm y msr.
detectado en esta investigación fue ANT (4 ') -
IA, que confería resistencia a la kanamicina y
estaba de acuerdo con el informe de Teherán,
Irán. La mayoría de los aislamientos que
portaban este gen (83%) también fueron
resistente a la kanamicina. Detectamos el gen
de resistencia APH (3 ') - IIIA en 11 (19%) de
nuestros aislamientos; El 82% de estos
aislados alberga AAC (6 ') / APH (2 ") en
combinación. Sesenta y siete por ciento de
aislados negativos para los genes de AME
fueron susceptibles a todos los
aminoglucósidos probados. En el presente
estudio, el 62% de los aislamientos de MRSA
llevan una SCCmec tipos I, II o III, que
tradicionalmente se asocian con SARM - AH.
Según los estudios anteriores que han
informado de que los aislamientos que
contienen SARM - AH albergan más genes de
resistencia que otros tipos de SCCmec,
nuestros datos mostraron que los aislamientos
con SCCmec III eran más resistentes a los
antibióticos no beta-lactámicos como
ciprofloxacino, clindamicina y eritromicina, Las
diferencias no fueron estadísticamente
significativas para todos los antibióticos, Los
tipos SCCmec V y IVa fueron los más
prevalentes identificados entre el SARM
asociado a la comunidad (SARM - AC), que
representó el 31% y el 29,3% . Los datos
muestran la tendencia de las cepas SCCmec
tipo V y IVa, los tipos estructurales más
pequeños, a transmitir en los centros de salud
como se mencionó anteriormente.

Limitaciones
Referencias (Shokravi, Mehrad, & Ramazani, 2015) (Fasihi, Saffari, Kandehkar Ghahraman, & Kalantar-
Neyestanaki, 2016)