PROCEDIMIENTO:

PASO 1: Del cultivo bacteriano divido en tres (placa Petri en 3:

Escherichia Coli, Staphylococcus Aureus y Klebsiella) sembramos
en una laminilla mediante el asa de colle previamente esterilizado la
bacteria en la parte central de la laminilla

PASO 2: A la muestra problema (laminilla con el sembrado)

añadiremos 1 gota de violeta genciana, dejar secar y lavamos con
agua destilada, dejar secar.

PASO 3: A la muestra anterior añadiremos 1 gota de Lugol,

dejamos secar, luego lavamos con agua destilada y dejamos secar.
PASO 4: A la misma muestra, añadiremos 1 gota de alcohol
acetona, dejamos secar, luego lavamos con agua destilada y
dejamos secar.
PASO 5: A la misma muestra, añadiremos 1 gota de Fucsina
básica, dejamos secar, luego lavamos con agua destilada y
dejamos secar.
 OBSERVACION EN EL MICROSCOPIO Y CONCLUSION:

ESCHERICHIA COLI: vemos en la lectura del

microscopio un tipo de bacteria gran negativos por
la coloración característica media rosada
Esta característica está íntimamente ligada a la
estructura didérmica dada por la envoltura celular,
pues presenta doble membrana celular (una
externa y la otra citoplasmática), lo que refleja un
tipo natural de organización bacteriana. Son uno
de los principales supergrupos de bacterias

Staphylococcus Aureus: vemos en la lectura

del microscopio un tipo de bacteria gran
positivas por la coloración característica
purpura o violeta.
Esta característica química está íntimamente
ligada a la estructura de la envoltura celular,
por lo que refleja un tipo natural de
organización bacteriana. Son uno de los
principales grupos de bacterias, y cuando se
tratan como taxón se utiliza también el nombre
de Posibacteria.
 Klebsiella pneumoniae: es un tipo de bacteria
gram negativas por su coloración de su pared celular
rosado. Son bacterias gram negativas, la asimilación
y la fermentación de la lactosa se puede observar en
el agar MacConkey donde las colonias son de color
rosado y en el medio Kliger o TSI donde son
Ácido/Ácido, es decir fermentador de la lactosa más
producción de gas; y en la fermentación acetónica
o prueba de Voges Proskauer son positivos.

CUESTIONARIO:

1.- ¿QUE IMPORTANCIA TIENE LA PARED CELULAR

BACTERIANA EN LA COLORACION GRAM?
- La pared celular es responsable de lo que
le sucede al colorante utilizado en
la Tinción de Gram (1884). La propiedad de
teñirse o no de violeta oscuro (Gram
positivas o Gram negativas) por esta
coloración es un criterio de clasificación
importante correlacionable con otras
propiedades bacterianas. Unos pocos
organismos son Gram-variables.
Tanto las Gram-positivas como las Gram-
negativas captan la misma cantidad de
cristal violeta (CV) e iodo (I). El
complejo CV-I sin embargo es atrapado
dentro de la célula Gram positiva por la
deshidratación y la reducción del tamaño de
los poros de la pared resultante del proceso de lavado con solvente. En
contraste en las Gram negativas la fina (y probablemente discontinua) capa de
peptidoglicano no impide la extracción por el solvente del complejo.
Avala lo antedicho el hecho que, si después de su tinción se tratan con lisozima
bacterias Gram positivas, se ve que los protoplastos siguen teñidos, pero
pierden el colorante si se los trata con alcohol. Esto indica que el colorante es
fijado a nivel del protoplasto, y que la pared celular de las bacterias Gram
positivas es la que impide la extracción del colorante. Corroborando esta
suposición se observa que cuando Bacillus subtilis emerge de su espora su
pared celular esta "inmadura" y se comporta como Gram negativa. Cuando
la pared celular adquiere su estructura final pasa a ser Gram positiva.
2.- ¿CUALES SON LAS DIFERENCIAS QUIMICAS
IMPORTANTES QUE EXPLICAN EL ESTADO ACIDO
RESISTENCIA?
Ácido-alcohol resistencia es la propiedad física de algunas bacterias a la
resistencia a la decoloración de la fucsina básica (rojo) la cual penetra en la
célula por acción del fenol y el calor.
Las bacterias ácido-alcohol resistentes no pueden ser clasificados según
la tinción de Gram, la cual es la técnica más común en la microbiología
contemporánea, sin embargo puede ser teñido con algunas tinciones
concentradas combinadas con calor. Una vez teñida tiene la capacidad de
resistir la decoloración de una combinación de alcohol- ácido, el cual es el
decolorante más común en los protocolos de tinción de bacterias, de donde
viene el nombre Alcohol-ácido resistente.
La alta concentración de ácido micolico en la pared celular es la causante,
como las bacterias del género Mycobacterium, de la baja absorción y alta
retención de la tinción (fucsina). La forma más común para poder identificar
este tipo de bacterias es a través de la técnica de tinción de Ziehl-Neelsen,
donde la bacteria queda teñida en rojo y se agrega una tinción de contraste de
nombre azul de metileno la cual permite apreciar de mejor forma la bacteria.

Bibliografía
1. Raisman DJS. HIPERTEXTOS DEL ÁREA DE LA BIOLOGÍA. [Online].; 2005 [cited 2018
septiembre 17. Available from: http://www.biologia.edu.ar/bacterias/micro4.htm.

2. WIKIPEDIA. WIKIPEDIA. [Online].; 2017 [cited 2018 septiembre 17. Available from:
https://es.wikipedia.org/wiki/%C3%81cido-alcohol_resistencia.