UNIVERSIDAD PERUANA UNION

FACULTAD DE INGENIERIA Y ARQUITECTURA

E.P- INGENIERIA AMBIENTAL

CURSO:
Microbiología ambiental

TEMA:
Informe de los pasos para el antibiograma

DOCENTE:
Blgo.Mblgo.Prstlgo.Mg: Oscar Rojas Sánchez

ALUMNO:

Santiago Andrés Ruiz Chávez

Tarapoto, Morales, 2018

1. MATERIALES
Cristal violeta, alcohol acetona, lugol,
safranina Tubo de ensayo con tapa rosca
Frasco estéril

Caja Petri Microscopio Alcohol 96%

Lamina portaobjetos Laminillas Mechero

Encendedor Asas Bacteriológicas Agua peptonada

Guantes Mascarilla Guardapolvo

Cofia Hisopo estéril Papel Kraft

Horno esterilizador Agar EMB

Algodón

Agar MC
2. PASOS

Antes del proceso: Esterilizar los materiales (caja petri y tubos de ensayo).

1.- Se inicia con la toma de muestra (orina patógena).

*Fue obtenida en un laboratorio clínico, que fue tomada a pacientes de este lugar.

2.- Con ayuda de un asa bacteriológica en anillo y el mechero sumergimos en la muestra

que tenemos, para luego hacer la siembra por estría en la caja petri con medio de cultivo
agar MacConkey.
*Se usa estría para aislar a los microorganismos, observar características coloniales y
algunas características metabólicas.
*Se usa el mechero para esterilizar el asa (antes de la siembre y luego de ella).

3.- Envolver con papel kraft la caja petri con la siembra y colocarlo boca abajo. Dejarlo
por 24 horas en el horno.

4.- Una vez terminado las 24 horas se debe observar la caja petri, sus colonias y su
color.
*En este paso se tiene que definir si es lactosa (+): color rosado, o lactosa (-): color
translucida.
*En este paso se define en que agar debe estar posteriormente. En el caso nuestro fue
colonia de color rosado, es decir lactosa (+) (Agar EMB).

5.- Se alistan las láminas y con ayuda de una asa bacteriológica se coge una colonia de
la caja petri, para posteriormente colocarlo en la lámina anteriormente preparada.

6.- Se debe secar la lámina con calor para fijar la muestra.

7.- Se coloca la muestra en la gradilla.

8.- Se empapa la muestra con el cristal violeta por 2 minutos.

9.- Se enjuaga suavemente.

10.- Se empapa de lugol por 30 segundos.

11.- Se enjuaga suavemente el lugol.

12.- Se empapa con alcohol acetona.

13.- Se enjuaga suavemente el alcohol acetona.

14.- Se empapa de colorante safranina por 1 min.

15.- Se enjuaga el colorante safranina.

16.- Se deja secar.

17.- Finalmente se analiza u observa en el microscopio en 40x y 100x.

Colocar el portaobjetos bajo el microscopio óptico. Coloca una gota de aceite de

inmersión en el portaobjetos, evitando el movimiento durante la aplicación para evitar las
burbujas; dejar que el lente toque el aceite de inmersión y de esta forma enfocamos en
40x, 100x y empezar a identificar.

*Esta imagen es del 40x.

18.- Ahora se coge una asa bacteriológica y un mechero para pasar una colonia de la
placa petri con el agar MC a otra placa petri con el Agar EMB, y se hace un sembrado
por estría.
*Se usa el mechero para esterilizar el asa (antes de la siembre y luego de ella).

19.- Se envuelve con papel kraft y se lo coloca boca abajo. Para luego ponerlo por
24horas en el horno.

20.- Se prepara el caldo peptona y se lo pone en un tubo de ensayo con tapa rosca.

21.- Una vez que se cumpla las 24horas, se saca la placa petri.
*En este paso se observa el color de las colonias que debe ser verde metálico (E.Coli)
22.- Se utiliza nuevamente el mechero y el asa bacteriológica para coger una colonia de
placa petri con agar EMB.

23.- Se coloca esa colonia en el tubo de ensayo con caldo peptona, para luego mezclarlo.

24.- Se coloca el tubo de ensayo con el caldo y las colonias mezcladas en el horno por
cierto tiempo.

25.-

3. BIBLIOGRAFIA

 Josefa, M., & Yunta, R. (2009). El cuade r no de laboratorio.

 Qu, I. D. E. L., Roman, T. N., Informe, E., & La, E. (n.d.). Informes de laboratorio
químico 4.1, 29–42.
 Plan, E. (2016). Sobre La Resistencia a Los Antimicrobianos.
https://doi.org/10.1111/j.1572-0241.1999.00862.x
 Informe de laboratorio guía tipo (*). (2013), 1–2.