TRANSFORMACIÓN BACTERIANA MEDIANTE

SHOCK TÉRMICO

CURSO DE GENÉTICA MICROBIANA

Dr. Jaime R. Sánchez Venegas

SEMESTRE 2018-II
 PRACTICA: TRANSFORMACIÓN BACTERIANA MEDIANTE
SHOCK TÉRMICO

TRANSFORMACIÓN
Adherencia e incorporación de DNA exógeno por células en estado
de competencia y expresión del material génico incorporado
(marcador genético), ejemplo gen de resistencia a un antibiótico.
Estado de competencia: Célula que presenta condiciones fisiológicas
especiales que alteran la permeabilidad de la membrana.

PROCEDIMIENTO:
I - Transformación de la bacteria

Obtención de células competentes

Ensayo de transformación

Selección de células transformadas
II - Cálculo de la eficiencia de transformación
 PROCEDIMIENTO METODOLÓGICO

Obtención de células competentes

Buffer TSB

Selección de células transformantes transformación de células competentes

 FUNDAMENTO DE LA TRANSFORMACIÓN

Durante la incubación en hielo, el DNA se En el proceso de shock térmico uno o

une a la superficie de la bacteria mas moléculas de DNA unida en la
competente, como un complejo Calcio- superficie es incorporada por la
fosfato-DNA bacteria.

El DNA incorporado por la bacteria

se replica y comienza a expresar
algún marcador genético como la
resistencia a la ampicillina.
 FUNDAMENTO DE LA TRANSFORMACIÓN

El complejo Calcio-fosfato-DNA atraviesa la zona de adhesión

 FUNDAMENTO DE LA TRANSFORMACIÓN

Incubación en hielo por 20 min Shock térmico a 42°C por 2 min

 EXPERIMENTO DE TRANSFORMACIÓN POR SHOCK TÉRMICO

Presenta el gen que codifica para GFP (Green

Fluorescent Protein) que fluorece de color verde bajo
la luz ultravioleta de onda larga.
Fuente original: gen de la medusa bioluminiscente
Aequorea victoria

Plásmido pGLO

SHOCK TÉRMICO
A 42°C
RESULTADOS DEL EXPERIMENTO DE TRANSFORMACIÓN

SHOCK TÉRMICO
A 42°C

Colonias Colonias No hay Si hay

blancas verdes en colonias Colonias
UV
OPERON ARABINOSA EXPRESIÓN DEL GFP

GFP fluorece en presencia de UV

II- CÁLCULO DE LA EFICIENCIA DE TRANSFORMACIÓN

Es la determinación de la cantidad de células bacterianas (E.

coli) genéticamente transformadas.

La eficiencia de transformación (ET), nos indica que cantidad

de moléculas de DNA está ingresando a las células
bacterianas y se calcula por la siguiente fórmula:

ET = Número total de células que crecen sobre la placa (en UFC)

Cantidad de DNA estriado sobre la placa de agar (en µg)

Se debe contar con la siguiente información:

Número total de colonias transformantes en la placa con LB/amp.

Cantidad de DNA plasmídico con el cual se obtuvo las colonias en
la placa con LB/amp.