UNMSM – FQIQ DPTO. ACAD.

DE QUÍMICA ORGÁNICA

UNIVERSIDAD NACIONAL MAYOR DE SAN MARCOS

FACULTAD DE QUÍMICA E INGENIERÍA QUÍMICA

DEPARTAMENTO DE QUÍMICA ORGÁNICA

CURSO DE BIOQUÍMICA

PRÁCTICA N°8: CINÉTICA DE LAS REACCIONES ENZIMATICA DE

α-AMILASA DE LA SALIVA
Profesor: Mg. Juan Carlos Woolcott Hurtado

Horario: Sábado 8-12pm

Alumnos:

Alvarez Ninahuanca Sally Estefania 14070067

Flores Salsavilca B. 14070009

Puma Ticona Rhony Ulises 14070088

Rojas Barreto Jazmín 14070112

Fecha de realización de la práctica: 29 de septiembre del 2018

Fecha de entrega de la práctica: 13 de octubre del 2018

Lima – Perú

2018 – II
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CONTENIDO
RESUMEN ......................................................................................................................................... 3
INTRODUCCIÓN ............................................................................................................................. 4
PRINCIPIOS TEÓRICOS .................................................................................................................. 5
DETALLES EXPERIMENTALES ................................................................................................... 6
MATERIALES............................................................................................................................... 6
REACTIVOS ................................................................................................................................. 6
PROCEDIMIENTO EXPERIMENTAL ............................................................................................ 7
DEPENDENCIA DE LA VELOCIDAD DE REACCIÓN DE LA CANTIDAD DE ENZIMA .. 7
DEPENDENCIA DE LA VELOCIDAD DE REACCIÓN ENZIMÁTICA DE LA
TEMPERATURA .......................................................................................................................... 8
REACCIONES ................................................................................................................................... 9
ANÁLISIS Y DISCUSIÓN DE RESULTADOS ............................................................................ 10
DEPENDENCIA DE LA VELOCIDAD DE REACCIÓN DE LA CANTIDAD DE ENZIMA 10
DEPENDENCIA DE LA VELOCIDAD DE REACCIÓN ENZIMÁTICA DE LA
TEMPERATURA ........................................................................................................................ 10
CONCLUSIONES ........................................................................................................................... 11
RECOMENDACIONES .................................................................................................................. 11
BIBLIOGRAFÍA .............................................................................................................................. 12

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RESUMEN

El objetivo de la práctica consiste en estudiar algunos factores que afectan la actividad enzimática,
como la temperatura, la concentración de la enzima.

La práctica inicio analizando la velocidad de reacción en función de la concentración de la enzima

de la α-amilasa para ello se realizó las prueba de yodo en almidón el cual se observó que la coloración
fue cambiando de azul hasta una coloración roja. Para el efecto de la temperatura se trabajó a una
temperatura de 38°C y otra muestra en un baño de agua con hielo.

Los resultados obtenidos fueron que a mayor concentración de enzima la velocidad reacción aumenta
y trabajar a una temperatura de 38 ° C acelera la velocidad de reacción. Trabajar a temperatura
superior de 38°C podría desnaturalizar la enzima.

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INTRODUCCIÓN

La cinética enzimática es el campo de la bioquímica que se encarga de la medición cuantitativa de

los índices de reacciones catalizadas por enzimas, y del estudio sistemático de factores que afectan
estos índices. El análisis cinético puede revelar el número y orden de los pasos individuales mediante
los cuales las enzimas transforman sustratos en productos. Junto con la mutagénesis dirigida hacia
sitio y otras técnicas que sondean la estructura de proteínas, los análisis cinéticos revelan detalles del
mecanismo catalítico de una enzima dada.

Un conjunto completo y balanceado de actividades enzimáticas tiene importancia fundamental para

el mantenimiento de la homeostasis. De este modo, una comprensión de la cinética enzimática es
importante para entender de qué modo los estados de estrés fisiológico, como la anoxia, la acidosis
o alcalosis metabólica, las toxinas y los agentes farmacológicos afectan ese equilibrio. La
participación de las enzimas en casi todos los procesos fisiológicos hace de ellas los mejores
objetivos para fármacos que curan o aminoran enfermedad en seres humanos. La cinética enzimática
aplicada representa el principal recurso mediante el cual los científicos identifican y caracterizan
agentes terapéuticos que inhiben de manera selectiva los índices de procesos catalizados por enzima
específicos.

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PRINCIPIOS TEÓRICOS

La cinética enzimática estudia la velocidad de las reacciones catalizadas por enzimas. Estos estudios
proporcionan información directa acerca del mecanismo de la reacción catalítica y de la especifidad
del enzima. La velocidad de una reacción catalizada por un enzima puede medirse con relativa
facilidad, ya que en muchos casos no es necesario purificar o aislar el enzima. La medida se realiza
siempre en las condiciones óptimas de pH, temperatura, presencia de cofactores, etc, y se utilizan
concentraciones saturantes de sustrato. En estas condiciones, la velocidad de reacción observada es
la velocidad máxima (Vmax). La velocidad puede determinarse bien midiendo la aparición de los
productos o la desaparición de los reactivos.

Al seguir la velocidad de aparición de producto (o de desaparición del sustrato) en función del tiempo
se obtiene la llamada curva de avance de la reacción, o simplemente, la cinética de la reacción. A
medida que la reacción transcurre, la velocidad de acumulación del producto va disminuyendo
porque se va consumiendo el sustrato de la reacción (Figura de la derecha). Para evitar esta
complicación se procede a medir la velocidad inicial de la
reacción (v0). La velocidad inicial de la reacción es igual a
la pendiente de la curva de avance a tiempo cero (Figura
de la derecha). De esta forma, la medida de v0 se realiza
antes de que se consuma el 10% del total del sustrato, de
forma que pueda considerarse la [S] como esencialmente
constante a lo largo del experimento. Además, en estas
condiciones no es necesario considerar la reacción inversa,
ya que la cantidad de producto formada es tan pequeña que
la reacción inversa apenas ocurre. De esta forma se
simplifican enormemente las ecuaciones de velocidad.

Para estudiar la cinética enzimática se mide el efecto de la concentración inicial de sustrato sobre la
velocidad inicial de la reacción, manteniendo la cantidad de enzima constante. Si representamos
v0 frente a [S]0 obtenemos una gráfica como la de la Figura de la derecha. Cuando [S]0 es pequeña,
la velocidad inicial es directamente proporcional a la concentración de sustrato, y por tanto, la
reacción es de primer orden. A altas [S]0, el enzima se encuentra saturada por el sustrato, y la
velocidad ya no depende de [S]0. En este punto, la reacción es de orden cero y la velocidad es máxima
(Vmax).

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DETALLES EXPERIMENTALES

MATERIALES

 Termómetro de laboratorio
 Gradillas con tubos de ensayo
 Pipetas, bureta y vasos de precipitado
 Bagueta
 Saliva diluida

REACTIVOS

 Solución de almidón al 1% recién preparado

 Solución de yodo en yoduro de potasio (Lugol)

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PROCEDIMIENTO EXPERIMENTAL

DEPENDENCIA DE LA VELOCIDAD DE REACCIÓN DE LA CANTIDAD DE

ENZIMA

Se diluyo la saliva diluida inicial en 20, 40, 80 y 160 veces. Se tomó 4 tubos de ensayo y se colocó
en cada uno de ellos 1mL de las diluciones de saliva obtenidas, a cada tubo se agregó 4mL de solución
de almidón, los cuales fueron colocados rápidamente en un baño a 38°C.

Después de 1-2 minutos se tomó una gota de líquido de cada muestra y se agregó la solución de yodo
en yoduro de potasio, se observó una coloración azul, rojo-violeta y por ultimo roja.

concentración de α-amilasa Vs velocidad de

reación
1.2

1
velocidad de reación

0.8

0.6

0.4

0.2

0
0 1 2 3 4 5 6 7 8 9
concentración de α-amilasa

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DEPENDENCIA DE LA VELOCIDAD DE REACCIÓN ENZIMÁTICA DE LA

TEMPERATURA

Se colocó en un tubo 5 gotas de saliva y se hirvió en un baño de agua y luego se dejó enfriar, en otros
dos tubos se colocó 5 gotas de saliva no hervida.

A todas las muestras se agregó 10 gotas de solución de almidón y se coloca al primer y segundo tubo
en un baño de agua a 38°C, el tercero en agua con hielo por 3 minutos y luego se añade a cada tubo
1 gota de solución de yodo en yoduro de potasio.

Enzima Sustrato Coloración de yodo Temperatura

α-amilasa Almidón Azul 38°C
α-amilasa Almidón Rojo Baño de hielo

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REACCIONES

Reacción del almidón con α-amilasa

Para el caso del yodo y el almidón, el yodo se introduce en el interior de la hélice del almidón.

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ANÁLISIS Y DISCUSIÓN DE RESULTADOS

DEPENDENCIA DE LA VELOCIDAD DE REACCIÓN DE LA CANTIDAD DE

ENZIMA
La velocidad de la reacción es directamente proporcional a la concentración de la enzima a cualquier
concentración de substrato. Por ejemplo, si la concentración de enzima es disminuida a la mitad, la
velocidad inicial de la reacción (v0) es reducida también a la mitad de la original.

La velocidad de transformación de los sustratos de una reacción en los correspondientes productos,

mediante una enzima y bajo condiciones de estado estacionario, es dependiente tanto de las
concentraciones de la enzima como de los sustratos. Normalmente, esa dependencia puede ser
expresada matemáticamente por la ecuación de Michaelis-Menten.

Esta ecuación predice que la velocidad de formación de producto es saturable con respecto al sustrato,
es decir existe una concentración de sustrato a partir del cual la v no aumenta de forma significativa.

La actividad catalítica de las enzimas depende estrictamente de la conformación de la proteína

enzimática, es decir de su estructura tridimensional. Por ello, los cambios conformacionales suelen
ir asociados a cambios en la eficacia catalítica de las enzimas. En muchos casos, estos cambios
conformacionales son reversibles y tienen un significado fisiológico al permitir adaptar de forma
transitoria la velocidad de una reacción enzimática a las necesidades de la célula. En otros casos, los
cambios conformacionales son irreversibles.

DEPENDENCIA DE LA VELOCIDAD DE REACCIÓN ENZIMÁTICA DE LA

TEMPERATURA

Las enzimas son sensibles a la temperatura pudiendo verse modificada su actividad por este factor.
Los rangos de temperaturas óptimos pueden llegar a variar sustancialmente de unas enzimas a otras.
En general, los aumentos de temperatura aceleran las reacciones químicas: por cada 10ºC de
incremento, la velocidad de reacción se duplica. Las reacciones catalizadas por enzimas siguen esta
ley general. La actividad enzimática máxima se alcanza a una temperatura óptima, luego la actividad
decrece y finalmente cesa por completo a causa de la desnaturalización progresiva de la enzima por
acción de la temperatura y a bajas temperaturas, las reacciones disminuyen mucho o se detienen
porque decrece la cinética molecular, pero la acción catalítica reaparece cuando la temperatura se
eleva a valores normales para la enzima.

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CONCLUSIONES

 La velocidad de la reacción es directamente proporcional a la concentración de la enzima a

cualquier concentración de substrato.
 La ecuación de Michaelis-Menten predice que la velocidad de formación de producto es
saturable con respecto al sustrato, es decir existe una concentración de sustrato a partir del
cual la v no aumenta de forma significativa.
 Los rangos de temperaturas óptimos pueden llegar a variar sustancialmente de unas enzimas
a otra para el trabajo de la α-amilasa la temperatura optima fue de 38°C.

RECOMENDACIONES

 Trabajar la enzima a una temperatura no superior a 38°C ya que este podría

desnaturalizarse.

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BIBLIOGRAFÍA

1. http://www.ehu.eus/biomoleculas/enzimas/enz3.htm

2. https://www.upo.es/depa/webdex/quimfis/miembros/Web_Sofia/GRUPOS/Tema%207.pdf

3. http://depa.fquim.unam.mx/amyd/archivero/apuntesCQ6_34445.pdf

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