Apuntes BLM México Ligando Biotico

Predicciónde
Predicción dela
laToxicidad
Toxicidadde
deMetales
Metalesaa
OrganísmosAcuáticos:
Organísmos Acuáticos:
UnaIntroducción
Una Introducciónal
alModelo
Modelodel
delLigando
Ligando
Biótico
Biótico
México
Febrero 2007
2
Profesores
Curriculum Resumido
Ray Arnold is a Vice President in charge of Environmental Science and

Government Relations for the Copper Development Association Inc. (CDA) in New York,
New York.
He is responsible for providing internal expertise in the area of environmental risk
assessment and risk management, and for developing and maintaining working
relationships with regulators. He serves as project manager of environmental research
projects and is ultimately responsible for assuring that sound science is used in
regulations that affect CDA Members.
Ray joined CDA in 2000 after working 11 years with ExxonMobil (ESSO)
Biomedical Science, Inc. There he served as a senior consultant in the areas of
ecological risk assessment, wastewater toxicity reduction, and oil spill response to
ExxonMobil affiliates worldwide. He (through CDA) is a sustaining member of the
Society of Environmental Toxicology and Chemistry (SETAC), a member of SETAC’s
expert advisory panel, and on the editorial board for SETAC’s journal, Environmental
Toxicology and Chemistry.
He holds a Ph.D. in aquatic toxicology from the University of North Texas, as well
as M.S. degree in limnology and B.S. degree in ecology from Stephan F. Austin State
University.
Patricio H Rodríguez en el presente es Director del Laboratorio de Química y

Ecotoxicología de Metales Traza en el Centro de Investigación Minera y Metalúrgica
(CIMM). El obtuvo su titulo profesional de Bioquímico de la Universidad Austral de Chile
y su Doctorado en Ciencias en la Universidad de Chile. Sus principales áreas de
investigación comprenden el efecto de metales en ambiente acuáticos y suelos, así
como el etiquetado de la peligrosidad ambiental de los metales. Ha publicado 17
artículos en revistas y libros internacionales y participa como consultor de la Industria de
los metales en temas relacionados con regulaciones y normativas ambientales.
Sus mas recientes actividades científicas comprenden la validación y
refinamiento del modelo del ligando biótico para la predicción de la toxicidad aguda y
crónica de los metales en aguas superficiales.
3
Bienvenidos
Introducción al
Modelo de Ligando
Biótico
México
Febrero 2007
Información de Contacto:
Ray Arnold, Ph.D.

Vice President: Environmental Sciences and Government Relations
Copper Development Association Inc.
260 Madison Avenue
New York, New York 10016-2401
Phone: 212-251-7220 Fax: 212-251-7234
E-mail: rarnold@cda.copper.org
Website: www.copper.org
Dr. Patricio H. Rodriguez

Director Laboratorio de Quimica y Ecotoxicología de Metales Traza
CIMM
Av. Parque Antonio Rabat 6500
Vitacura-Santiago
Chile
Fono: 56-2-585-6331, Fax: 56-2-585-6370
E-mail: prodrigu@cimm.cl
4
Co-Instructores del Curso
Ray Arnold
Copper Development Association Inc.
New York, New York
Patricio Rodriguez
CIMM
Santiago, Chile
5
Logística
Lo que Deben Saber
Salidas de emergencia
Ubicación de los baños
Para comer y beber
Por favor: ¡desconectar celulares!

6
Materiales del Curso

Apuntes del Curso
7

Apuntes del Curso
Copias de diapositivas
Notas
Algunas láminas tienen información adicional listada para

referencia posterior.
8

Apuntes del Curso
Copias de Diapositivas
Notas
Citas de literatura
Referencias ubicadas en Sección 13.

9

Apuntes del Curso
Notas
Citas de literatura
Lista de siglas
Lista de siglas en bolsillo al interior de la tapa of acronyms is

located in pocket inside front cover.
10

Apuntes del Curso
Notas
Citas de literatura
Lista de siglas
11
Para Empezar
Apuntes del Curso
12
Prediciendo la Toxicidad de
Metales para Organismos
Acuáticos: una Introducción
al Modelo de Ligando
Biótico
13
Sección 1: Resumen del

Curso
14
Resumen del Curso

Primera sesión matinal
Introducción y Resumen del Curso: (15

minutos)
Evaluando los Efectos de Metales en el
Medio (30 minutos)
Fundamentos del BLM (45 minutos)
Descanso (15 minutos)
15
Resumen del Curso

Segunda sesión matinal
Modelo de Ligando Biótico de Toxicidad

Aguda: Bases Técnicas (60 minutos)
Modelo de Ligando Biótico de Toxicidad
Aguda: Aplicación a otros Organismos y
Otros Metales (30 minutos)
Almuerzo (60 minutos)
16
Resumen del Curso

Primera sesión de la tarde
Revisión y Preguntas
Ejemplos y Aplicaciones del Modelo de
Ligando Biótico (90 minutos)
Definición de Aplicación para el Uso del
Modelo de Ligando Biótico (45 minutos)
Descanso (15 minutos)
17
Resumen del Curso

Segunda sesión de la tarde
Análisis Químicos requeridos para el

Modelo de Ligando Biótico (¡Sólo apuntes!)
Demostración del Modelo (60 minutos)
Cierre
18
Resumen del Curso

Comentarios generales
Discusión sobre la evaluación de

efectos de metales
Resumen general
Detalles
Centrándose en el cobre
Consistenciapara mayor claridad
En metal que más se ha trabajado
Primero en implementarse en normativas
Sin embargo, referencias y ejemplos de
otros metales
19
Sección 2: Evaluando los

Efectos de Metales en el
Medio
20
Aprendiendo el Idioma
Terminología Clave
La ciencia puede ser

compleja
Este es un curso
introductorio
Audiencia diversa
Necesaria comprensión
básica de terminología
Definiciones simplificadas
21
Terminología Clave
Análisis de Metales
Metal suspendido o particulado
El metal en una muestra no acidificada
que es retenido en un filtro de 0,45 µm u
-C - Cu - Cu
Metal unido a sólidos en suspensión - Cu
Filtro
Metal disuelto
El metal en una muestra no acidificada
que pasa por un filtro de 0,45 µm
Diversas “especies” metálicas Cu+2
Cu - DOC
Cu - DOC
Metal total CuOH+ CuOH+
Cu+2
Concentración de metal en una muestra Cu - DOC Cu
+2
Cu+2
Cu+2
no filtrada tras digestión ácida CuOH+
Cu - DOC
Cobre en suspensión+disuelto Cu+2 Cu+2 CuOH+
Los metales acuosos frecuentemente se miden e

informan como metales disueltos, totales o suspendidos.
Esto puede ser engañoso ya que los metales se

encuentran en muchas “formas” en agua.
22
Terminología Clave
Especiación del metal
Los metales se encuentran en diferentes

formas en el medio
Ejemplos: Cu+2, CuOH+, CuCO3, Cu-DOC
Se les llama “especies” metálicas
Un cambio se denomina “especiación” o
“transformación”
Especiación:
La forma química particular en que existe un elemento en agua es

su especiación.
El elemento puede existir como un ión hidratado simple, como

una molécula o como un complejo con otro elemento o molécula
(orgánica o inorgánica).
Ejemplos de especies de cobre:
Ión metálico libre: Cu – aq2+

Complejos inorgánicos: CuCO3 , CuOH+, Cu(CO3)2, Cu(OH)2
Complejos orgánicos: Fulvato
Coloides: Inorgánicos, Orgánicos
Unido a una superficie: Fe-OCu, O=C-O-Cu
Matriz de fase sólida: CuO, Cu2(OH)2CO3
23
Terminología Clave
Biodisponibilidad
El grado y velocidad a la cual una sustancia

es absorbida por un sistema vivo o se hace
disponible en el sitio acción fisiológica
Importante:
Las especies metálicas tienen diferente
biodisponibilidad
Por lo tanto las especies metálicas contibuyen
de manera diferente a la toxicidad de una
muestra
El metal deben estar en una forma que pueda llegar a un sitio de

acción tóxica para ser tóxico. Si está en la forma que puede llegar
al sitio de acción tóxica, se dice que es “biodisponible”.
Para llegar a un sitio de acción tóxica puede tener que pasar a

través de membranas biológicas, pasiva o activamente.
Si está en una forma que no puede pasar a través de membranas

o es desplazado por otras sustancias, entonces puede que no
llegue al sitio de acción en cantidad suficiente para causar un
efecto.
Si está en una forma que no puede llegar al sitio de acción, se

dice que no es biodisponible.
24
Terminología Clave
Formación de complejos
Los metales pueden formar complejos con

sustancias disueltas tales como carbono
orgánico disuelto
Los metales también pueden adherirse a la
superficie de sustancias en suspensión
tales como carbono orgánico o minerales
en suspensión
Cada uno de estos procesos cambia la
biodisponibilidad del metal
La biodisponibilidad es modificada por la formación de

complejos entre el metal y otras sustancias.
25
Terminología Clave
Ligandos
Estructuras químicas que se unen a otras sustancias

o metales
Ligandos en agua
Orgánicos
• Materia orgánica disuelta (DOM)
Acidos
Acidos húmicos
húmicos yy fúlvicos
fúlvicos
Cuantificada
Cuantificada como Carbono
como Carbono Orgánico
Orgánico Disuielto
Disuielto (DOC)
(DOC) en
en el
el BLM
BLM
Inorgánicos
• Carbonatos
• Hydróxidos
Hydróxidos
Ligandos biológicos
Ejemplo: membranas de branquias en peces
Acidos Húmicos y Fúlvicos
Son ácidos polieléctricos que se encuentran en suelos y aguas naturales,

derivados de sustancias húmicas.
Las sustancias húmicas son compuestos orgánicos distribuídos

ampliamente en suelos, agua dulce y océanos.
Estas sustancias se forman de la degradación química y biológica de vida

animal y vegetal, y dan cuenta de aproximadamente un 75% de la materia
orgánica que hay en la mayoría de los suelos minerales.
Ligandos Inorgánicos
Los ligandos inorgánicos principales y menores pueden variar en

importancia de metal en metal.
Para Cobre:
Principal:
Carbonatos
Hydróxidos
Menores
Cloruros
Sulfatos
26
Terminología Clave
Medidas de la toxicidad aguda
Concentración Letal 50% (LC50, LC50
50
)
Concentración del metal en agua (µg/L, µmol/L)
1 µmol Cu = 63.54 µg Cu
Que resulta en 50% de mortalidad en organismos
expuestos
Concentración de Efecto 50% (EC50, EC50
50
)
Concentración del metal en agua
Que tiene un efecto en el 50% de organismos
expuestos
Muerte ecológica (e.g., inmovilidad)
Acumulación Letal 50% (LA50, LA50
50
)
Concentración del metal en tejido (e.g., branquia)
Que resulta en 50% de mortalidad en organismos
expuestos
La toxicidad aguda es una respuesta severa (generalmente la muerte)

a una exposición breve (generalmente menos de 4 días) a una
sustancia.
Las medidas comunes de toxicidad que se usan en este curso son

LC50, EC50, y LA50.
27
Terminología Clave
Modo de acción de toxicidad aguda
Cómo el metal provoca la toxicidad aguda

Cobre y Plata
Interaccioón con enzimas específicas que regulan los
niveles de sodio y cloruro del organismo
Se inhibe la captura de sodio
El organismo sufre desbalance iónico y muere
Cadmio, Plomo y Zinc
Alteran el metabolismo del calcio
Níquel
Peces – inhibición respiratoria
Daphnia – alteración homeostasis del Mg+2
+2
Hay células especializadas responsables del transporte de

diversos elementos a través de la membrana de la branquia
hacia la sangre.
Otros elementos relevantes para entender la toxicidad de un

metal son el calcio, el sodio y el magnesio.
28
Evaluando los Efectos de Metales

Percepción Pública
Fabricación y uso conllevan

su liberación al medio
El potencial de efectos
adversos lleva a controles
normativos
El control de su liberación es
complejo
La fabricación y uso de productos de consumo produce liberación

de metales al medio.
Nuestra sociedad depende de materiales extraídos de la tierra,

incluyendo los metales.
Miren a su alrededor.
Si no fue cultivado, fue extraído en una mina.
Los materiales extraídos tienen riesgos inherentes.
Debido a sus potenciales impactos, las descargas están

sometidas a controles normativos.
Desarrollar normativas es complejo.

29

Evaluación de Fuentes - Cobre
Fuentes puntuales
Descarga de aguas residuales
Fuentes difusas y naturales

Erosión de minerales y suelos con metales
Materiales de construcción
Piezas de automóviles
Productos domésticos
Quema de combustibles fósiles
Residuos corporales (2 mg Cu/persona/día)
Además de las descargas directas de la industria, los metales

pasan al medio por una diversidad de vías.
Fuentes no puntuales o difusas (e.g., aguas lluvia desde

estacionamientos).
Arriba se muestran vías frecuentes para un metal (cobre).

30

Evaluación de Riesgo
100
Cuánto se descarga 90
Efecto de dilución
80
Cumulative Probability (%)

70
Concentración que 60
causa efecto tóxico 50
40
Concentración quie no 30
tiene efectos 20
Probabilidad que el 10 Species Chronic Value

Copper Concentration
efecto ocurrirá
0
0.1 1 10 100 1000 10000
Dissolved Copper (µg/L)
El desarrollo de normativas basadas en riesgo requiere saber lo

indicado arriba.
31

Complejidad Analítica
Niveles analíticos
Partes por millón (mg/L)
Partes por billón (µg/L)
Partes por trillón (ng/L)
Requiere técnicas especializadas
Debe medirse en presencia de muchas
sustancias naturales y sintéticas
No es barato
Caracterización completa de sitio > $100,000
US
Los niveles de descarga de interés para evaluar efectos pueden

ser bajos.
Medir niveles tan bajos es difícil y requiere técnicas y equipos

especializados.
Muchas interferencias analíticas pueden estar presentes en una

muestra ambiental.
Por ende, los costos pueden ser elevados.

32

Progresos Científicos
La ciencia ha progresado en los últimos 20

años
Se ha avanzado en la descripción del
comportamiento de metales en agua
Es más predecible incluso en condiciones
variables del agua
Se está empezando a entender su
comportamiento en suelos y sedimentos
33

Ensayos de Toxicidad de Metales
¿Cómo se determina la toxicidad de un metal?

Existen métodos estándar
El ensayo agudo de referencia es el LC50
Concentración que mata 50% de organismos
expuestos
Peces, invertebrados
Número pequeño de organismos
Expuestos a concentraciones crecientes
Sustancia se agrega a agua limpia de laboratorio
LC = Concentración Letal
Para mayores detalles sobre ensayos agudos ver: USEPA 1993.

34

Ensayos de Toxicidad de Metales
Las aguas de lab son diferentes a las naturales
Los ensayos miden la toxicidad del ión metálico
(generalmente la especie más biodisponible)
Comparando con concentraciones de “metal total” en
sistemas naturales, a menudo se sobrestima la
toxicidad
Metal total = disuelto + metal en suspensión
Metal disuelto = iónico + otras especies & complejos
A menudo en aguas naturales sólo una fracción iónica

pequeña
Esencial conocer contración, formación de complejos
y competencia en el sistema en cuestión
El agua de laboratorio a menudo es agua de una fuente muy

limpia (e.g., un pozo, descarga de un tranque) o agua tratada, por
osmosis reversa por ejemplo, cuya calidad (e.g., dureza,
alcalinidad, etc.) se ajusta con sustancias químicas.
Estas aguas generalmente no tienen las sustancias naturales que

alteran (a menudo reducen) la toxicidad de metales.
Para ensayar la toxicidad se agregan sales solubles de metales.
Por lo tanto, los ensayos usados para establecer criterios de

calidad de metales á menudo tenían niveles relativamente altos
de metal iónico y niveles bajos de sustancias naturales que
reducen la toxicidad.
Para determinar más precisamente los niveles seguros de un

metal en una cuenca, uno debe determinar la cantidad de metal
en la forma biodisponible/tóxica y la cantidad de sustancias
naturales presentes que reducen su toxicidad.
35

Historia de los Criterios de Calidad de Agua
para Metales
Desarrollo de Criterio de Calidad de Agua de US
EPA (WQC) ha evolucionado a medida que
entendemos cómo la química del agua afecta la
toxicidad
Inicialmente, el criterio se comparaba con las
concentraciones de metal total extraíble (1980)
Los criterios se desarrollaron usando
procedimientos que exponían los organismos a
los iones metálicos
Muchos lugares excedían el criterio
36

para Metales
Estudios en sitios específicos
frecuentemente revelaban ausencia de
efectos
Algo impedía el desarrollo de toxicidad
Se demostró que la toxicidad se reducía a
mayor dureza y pH del agua
Los criterios se ajustaron para incluir la
dureza del agua local (1984)
La “dureza” del agua es fundamentalmente la concentración de

calcio y magnesio en el agua.
37

para Metales
Toxicity was still over predicted at some sites
Site specific criteria development guidelines
issued (1994)
Research showed metal toxicity was
decreased by increasing particulate matter
Criteria adjusted to apply to the “dissolved”
rather than “total” metal fraction (1995)
El término “Total” se refiere tanto a la fracción particulada como a

la disuelta.
El término “Disuelto” se refiere a la fracción que pasa a través de

un filtro de 0,45 micrones.
La fracción particulada (suspendida) no pasará a través del filtro.

38

para Metales
Evidencia que todavía la toxicidad es sobre- o
sub-estimada
Otros factores en juego
Identificación de otro factores
El Modelo de Ligando Biótico para estimar
mejor la toxicidad de metales
EPA emite criterio preliminar para cobre
usando BLM (December 2003)
39

El Modelo de Ligando Biótico
Calcula biodisponibilidad sitio específica de

metales
La mayoría del esfuerzo
Cobre
Plata
En desarrollo
Cadmio
Plomo
Níquel
Zinc
También se está trabajando para predecir toxicidad crónica en

organismos estuarinos y de agua dulce.
También se está trabajando para entender el papel que juegan los

metales contenidos en el alimento en la toxicidad de metales.
40

Nombre del Modelo: Modelo de Ligando
Biótico
¿Por qué Modelo de Ligando Biótico?

Branquia no es necesariamente donde
ocurre toxicidad
Sitio de acción puede ser otro
Por lo tanto:
Modelo de Ligando Biótico
No: Model de Branquia
41

Efectos de Ligandos y Dureza
Ligandos Orgánicos en Agua

Metales en complejo no pueden unirse
branquias
Fuerza de unión del metal
• Carbono orgánico disuelto > branquia
Ligandos inorgánicos
Inhibido de unirse a branquia
Dureza del agua

Calcio compite por mismos sitios en branquias
La fuerza de unión puede concebirse como la afinidad relativa que

tiene el metal por el material. Generalmente los metales se unen
más fuertemente a carbono orgánico disuelto que a la branquia.
Por ende, al estar en competencia el carbono orgánico disuelto
generalmente retiene el metal, impidiendo que atraviese la
membrana de la branquia.
La dureza del agua es fundamentalmente una medida de la suma

de calcio y magnesio en el agua y se expresa como mg/L de
CaCO3.
42

Supone que una cantidad determinada de metal

unido a sitios fiosológicamente activos causa
toxicidad
Cantidad de metal en agua debe exceder capacidad
combinada de:
Carbono orgánico disuelto para unir metal
Ca+2
+2 para desplazar a metal de sitios de unión activos
Química del agua para transformar metal a forma no

tóxica
Carbono orgánico particulado para absorber metal
Partículas minerales para incorporar metal en matriz
Estudios han mostrado que cuando una cantidad específica de

metal se une a los sitios activos de la branquia, el organismo
muere.
43

El Modelo de Ligando Biótico Calculations
Cada proceso afecta biodisponibilidad del

metal
Modelo calcula fracción biodisponible de
metal en ligando biótico
Puede usarse en un rango amplio de
condiciones de agua
44

Organismos
Mecanismo de toxicidad parece ser mismo

en diversidad de organismos
Mecanismos similares controlan
biodisponibilidad
Agua dulce
Peces
Invertebrados (Dáfnidos)
Aguas estuarinas
Bivalvos (Mytilus)
Inicialmente, los estudios de BLM se han centrado en un conjunto

de especies sensibles de interés normativo.
45

Revisión Normativa
US EPA: revisión de Science Advisory

Board (SAB)
Resuesta positiva
Recomienda avanzar en incorporación de
BLM a desarrollo de criterios de calidad
Criterio preliminar basado en BLM para
cobre (December 2003)
Incorporación definitiva a Criterio de
Calidad de Agua de EEUU – mediados de
2006
El BLM ha sido incorporado al criterio de cobre.
Similarmente a como hoy usamos la dureza, en el futuro

usaremos el BLM para derivar criterios de calidad de agua.
46
Sección 3: Fundamentos
del BLM
47
Tópicos de Discusión
Base de Criterios de Calidad de Agua (WQC)

Cómo se derivan los WQC
Limitantes de los WQC actuales
Cómo se desarrollan los WQC sitio específicos
¿Qué es importante? : Las “tres C”
Concentración
Formación de Complejos
Competencia
Relación entre acumulación de metal en sitio de
acción y toxicidad
48
WQC se Basan en Datos de Toxicidad

¿Cómo se hacen ensayos de toxicidad?
Concentración de Metal (µg/L)
0 100 200 400 800 1600
Control 1 2 3 4 5
LC50 de 96 h = 400 µg/L
Discutiremos cómo se puede usar el BLM para predecir la magnitud

de los niveles de efecto como función de la química del agua. Como
el desarrollo y validación del BLM se basa en datos de toxicidad, es
importante entender cómo se realizan los ensayos de toxicidad.
Se comienza preparando una serie de matraces, o niveles de
exposición, que son iguales excepto por la concentración del metal
que se ensaya. Típicamente, hay uno o más controles a los que no
se agrega metal, y una serie de concentraciones crecientes que
abarcan el rango de efectos, desde sin efecto a efecto en un 100%
de los organismos.
Se coloca un grupo de organismos en cada recipiente (e.g., N=10) y
se controlan los recipientes durante la duración del ensayo,
generalmente 48 o 96 horas en ensayos agudos.
Al final del período, se registra el porcentaje de organismos
afectados en cada caso.
El efecto observado puede ser letalidad, reproducción, crecimiento,
etc.
Para mayores detalles ver: USEPA 2002.
49
Evaluación de Niveles de Efecto

Ejemplo Dosis-Respuesta de C. dubia
Ejemplo Dosis-Respuesta de C. dubia a Cobre
125
100
Mortalidad (%)
75
LC50 = 45 ug/L
50
25
0
Factor ≈ 2
-25
1 10 100 1000
Cobre Disuelto (µg/L)
Para evaluar los niveles de efecto, se grafica la mortalidad como

porcentaje versus la concentración, y se ajusta a los datos una curva de
dosis- respuesta.
En este ejemplo, el efecto final fue la mortalidad. Se pueden usar otros,
tales como inhibición reproductiva o de crecimiento.
Un resultado aceptable de un control generalmente presenta una
respuesta de menos de 20 - 25%. En este caso, se dan resultados
similares a las dosis más bajas de cobre, de 2, 10 y 20 ug/L.
La EC50 es la “concentración con efecto” que corresponde al efecto en
un 50% de la población. Para el caso de la letalidad, se la conoce como
LC50 (~45 ug/L) correspondiente a la muerte del 50% de los organismos.
La EC50 determina el punto central de la curva de dosis respuesta en el
eje X y se evalúa ajustando la curva a los datos. Nótese que la
concentración asociada con LC50/2 = 22 ug/L está en el rango de niveles
de efecto control aceptables.
C. dubia = el dáfnido Ceriodaphnia dubia
50
Método para Desarrollar WQC

WQC Actuales se Basan en Metal Disuelto
BASE DE WQC DE COBRE GUA DULCE
(Data: EPA, 1985)
100,000
HARDNESS = 50 mg/L
10,000 X
X
X
COPPER GMAV (ug/L)

XX
XX
XX
1,000 XX
X
X
X
X
X
X
XXX
X
100 Daphnia XX XX
X
pulex XXX
XXX Fathead
XXX Minnow
X
X
X FAV
10 X
CMC
FCV
1
0.1 1 10 20 50 80 90 99 99.9
PERCENTIL
¿Cómo se usan los datos de bioensayo para determinar el WQC?

Para ilustrar el método, se muestra una distribución de probabilidades de
Valores Agudos Promedio por Género (GMAVs) para Cu disuelto (cada punto
es el logaritmo del EC50 promedio para un género.)
La sensibilidad varía entre organismos por más de tres órdenes de magnitud
(GMAV ~ 10 a GMAV ~ 10,000 ug/L).
El WQC es diseñado para proteger a la mayoría de los organismos la mayor
parte del tiempo. La directriz de la US EPA (US EPA, 1985) es proteger al
95% de los géneros. Por lo tanto, el WQC está basado en GMAV 5%, el Valor
Agudo Final (FAV). La elección de un percentil es una decisión política.
La magnitud del WQC, es la Concentración Máxima de Criterio, CMC =
FAV/2. Se divide por 2 para convertir un nivel de efecto de 50% a un NOEC.
Para el WQC agudo, la duración es de 24 horas.
La frecuencia de superación del WQC es una vez cada tres años, de manera
que hasta los organismos más sensibles están protegidos la mayor parte del
tiempo.
51
Toxicidad Puede Variar en Espacio

Problema con Criterios para Metales
Interacciones con otros componentes de

calidad del agua pueden hacer que mismo
nivel de metal provoque diferentes grados
de toxicidad en distintos lugares y
momentos
Para Cu disuelto, el BLM formula los
componentes claves como pH, Ca, Na, DIC,
y DOC.
DOC = Carbono orgánico disuelto

52
Efecto de Dureza sobre Tocicidad

Datos de Fathead Minnow
Efecto de Dureza en Toxicidad de Cu en Fathead Minnows
(Erickson et al., 1996)
5
Cobre LC50 (umol/L)

4
0
0 50 100 150 200
Dureza (mg/L de CaCO3)
Desde al menos principios de los 70 se cuenta con evidencia

enpírica de que la dureza modifica la toxicidad (Zitko, 1976)
El efecto de la dureza se incorporó a los WQC de metales por
medio de relaciones empíricas simples entre LC50 y dureza.
Más adelante se discute en detalle el fundamento mecanístico de
este efecto.
Fathead minnow = Pimephales promelas

53
Relaciones entre Parámetros

Enfoque Convencional, 1980-Presente
Relación de regresión entre concentración

con efecto y dureza
La dureza es parámetro sustituto,
correlacionada con pH y alcalinidad.
Ca vs. Dureza r22 = 0.97

CO33 vs. Dureza r22 = 0.87
pH vs. Dureza r22 = 0.02 - 0.40
La dureza es fundamentalmente la medida de la concentración

total de iones de calcio y magnesio en el agua. En algunos casos
otros metales polivalentes, como el hierro, el aluminio y el
manganeso pueden contribuir a la dureza del agua.
54
Metal Disuelto NO Es Suficiente

C. dubia en Agua de Lab & de Río
Dosis-Respuesta de C. dubia
Agua de Río + 50% Efluente POTW (Hall et al., 1998)
10/29 Control
Downingtown 50%
Mortalidad 48 h (%)
LC50 = 20 & Beta = 0.15

100
LC50 = 125 & Beta = .1
75
50
25
1 10 100 1000
Cobre Disuelto (ug/L)
La concentración de metal disuelto, por sí misma, no permite predecir

efectos:
Aquí se muestran el claro efecto de las diferencias en el agua de ensayo
sobre la toxicidad de cobre disuelto. (Datos: Hall et al., 1998).
Las aguas de ensayo incluyen un gua control de lab (línea cortada) y una
mezcla 50:50 de agua de río y efluente municipal (línea sólida), siendo la
dureza aproximadamente la misma en ambos casos.
Esto datos ilustran que el LC50 de cobre disuelto puede variar
marcadamente en diferentes aguas de ensayo. En el agua de laboratorio,
20 ug/L resultaron en una mortalidad de 50% y 40 ug/L en mortalidad de
100% para C. dubia. Pero las mismas concentraciones de cobre disuelto
no tuvieron efecto para C. dubia en la mezcla de efluente y agua receptora.
Por lo tanto, la concentración de cobre disuelto no es per se un predictor
confiable de niveles de efecto adverso.
A continuación examinamos por qué es así.
55
Criterio de Calidad de Agua Actual
El WQC refleja el efecto de dureza sobre la

“magnitud” de niveles de toxicidad.
El WQC típicamente no refleja efectos de

otros factores de química del agua que
también afectan toxicidad.
56
Límites de Normalización por

Dureza
Potencial sub-protección a pH bajo
Sobre-protección a niveles altos de DOC
Requiere corrección de Razón de Efecto de

Agua (WER)
DOC= Carbono orgánico disuelto
Razón de efecto de agua (WER) = the LC50 of a substance in site

specific water divided by the LC50 of the substance in a control
water.
Example:
LC50 of a substance in water from a site of interest = 100 ug/L
LC50 of a substance in control water = 50 ug/L
Water effect ratio = (100 ug/L)/50 ug/L = 2
Otherwise: It requires twice as much of the substance in the site
water to have the same effect observed in control water.
57
Métodos Sitio Específicos

de la US EPA
Existen 3 métodos:
Procedimiento de re-cálculo
Razón de Efecto de Agua (WER)
Procedimiento de especie residente
Métodos de WQC sitio específico de la USEPA:
Procedimiento de Recálculo - Incorpora las diferencias en sensibilidades de

los organismos que hay en el sitio y organismo en el conjunto de datos usados
como base del criterio de calidad nacional.
Procedimiento de la Razón de Efecto de Agua (WER) –Incorpora las

diferencias de toxicidad del metal en agua de laboratorio y en agua del sitio.
Procedimiento de la Especie Residente – Este método incorpora

simultáneamente las dos diferencias reseñadas arriba; debe desarrollar un
conjunto de datos mínimos de toxicidad aguda con especies residentes en el
sitio.
• Un conjunto mínimo de datos debe ajustarse a las directrices

específicas de la USEPA, como por ejemplo la inclusión de datos de
toxicidad para al menos 8 géneros (USEPA, 1994a).
58
Razón de Efecto de Agua

Agua de Sitio Dosis Respuesta WER
Concentración de Cu (ug/L)
100
Agua Lab
0 100 200 400 800 1600
M o r ta lid a d (% )
75
Agua Sitio
50
f
25
0
0 200 400 600 800 1000 1200 1400 1600
Agua de Lab Cobre (ug/L)
Concentración de Cu (ug/L)
0 100 200 400 800 1600
LC50 en Agua de Sitio = 400 ug/L
LC50 en Agua Lab = 200 ug/L
Por lo tanto:
WER = 400/200 = 2
WQC Sitio Específico = WER x WQC
Método de la Razón de Efecto de Agua:
Se colectan muestras de agua del sitio de interés.
Se realizan ensayos de toxicidad agregando la sustancia de interés

tanto a agua de lab como a la del sitio.
Se determinan LC50s para ambos tipos de aguas.
La LC50 del sitio se divide por la del agua de lab para derivar la WER.
Se repite esto para varios períodos o estaciones para dar cuenta de la

variabilidad de la calidad del agua.
Se deriva el criterio de calidad de agua sitio específico (SSWQC)

multiplicando el WQC existente por la WER.
Si la WER es <1 el SSWQC disminuye; si es>1 el SSWQC aumenta.

59

La Alternativa
El BLM ha sido desarrollado para evaluar
cuantitativamente los efectos de otros
factores que afectan la toxicidad.
El BLM proporciona una forma alternativa de

evaluar una Razón de Efecto de Agua.
El BLM ofrece una manera conveniente de evaluar la WER y por

lo tanto la discusión que sigue se centra en este método.
60

Historia
1993 Taller en Annapolis: enfoque del ión
libre
1996 Taller en Pensacola: “modelo de
branquia” (BLM)
1996-1999: desarrollo del BLM
1999-2000 Revisión de la US EPA Science
Advisory Board (US EPA, February 2000)
2000-2007: perfeccionamiento, incorporación
a criterio por la US-EPA
61
Las 3 C’s:
Factores Claves que Afectan la
Biodisponibilidad
Playle (1998) ha denominado los factores

claves a considerar al evaluar la
biodisponibilidad como “las 3 C’s”:
Concentración, del metal disuelto
Formación de Complejos del metal con
ligandos orgánicos e inorgánicos
Competencia entre cationes y el metal en el
sitio de acción, en el “ligando biótico”
62
Concentración
Metal Disuelto y Especiación
Especiación de Cu en Agua Dulce
DOC = 0.01 mg/L CuT = 18 ug/L

100 Cu+2
CuHCO3-
10
Fracción de Cu Total (%)
CuSO4
1
Cu-DOC
0.1 CuOH+
CuCl+
CuCO3
0.01
0.001
Cu(OH)2
0.0001
4.0 5.0 6.0 7.0 8.0 9.0 10.0
pH
Originalmente los WQC se desarrollaban sobre la base de la concentración

de metal total recuperable (metal disuelto + metal absorbido extraíble con
ácido; USEPA, 1980, Ambient Water Quality Criteria for copper).
Se determin`´o que la concentración de metal disuelto era más indicativa de
la forma biodisponible (Prothro, 1993).
Pero los metales disueltos existen en una diversidad de formas (i.e.,
especies o complejos). Este diagrama de especiación muestra que la
especiación varía con el pH. También varía con las concentraciones de
otras variables de calidad de agua con las que reacciona (i.e., los otros
ligandos presentes) para formas complejos inorgánicos y orgánicos.
Un punto clave es que las especies metálicas difieren en cuanto a
biodisponibilidad para el organismo. Por lo tanto, la toxicidad asociada con
un nivel de metal disuelto dado depende de su especiación.
No es fácil medir las especies químicas, pero existen modelos que permiten
calcular la “especiación”.
63
Formación de Complejos
Formación de Complejos y Toxicidad
Toxicidad Aguda de Cu en Dinoflagelados
(Adaptado de Anderson and Morel, 1978)
150
% Células Inmóviles
125
Sin
100
EDTA
75
50
EDTA
25 Agregado
-25
-6 -5 -4 -3 -2 -1 0 1 2 3 4 5
2+
----------------------- Cu --------------------- ------------------------ Cu Disuelto -------------------
Log10 Cu (ug/L)
Dosis Respuesta de un Dinoflagelado con y sin EDTA

Aquí se muestra un ejemplo del efecto de la formación de complejos sobre la
toxicidad. Los dos pares de curvas de dosis- respuesta de la derecha
representan ensayos en que en un caso se agregó EDTA y en el otro no (las
curvas de más a la derecha).
La razón por la que aumenta el nivel de efecto es que el EDTA es un fuerte
formador de complejos con el metal. Reacciona con el Cu en solución,
atrapando la mayoría de éste en una forma no biodisponible. De ello resulta
que se debe agregar mucho más cobre para lograr el mismo nivel de efecto
tóxico, en términos de Cu disponible, que en el ensayo sin EDTA.
Para ver esto, basta observar los mismos datos cuando se calcula la
especiación del cobre y se grafican los resultados del ensayo contra el cobre
iónico (Cu2+, la forma libre). En ese caso las curvas colapasan en una sola
curva (las curvas traslapadas de la izquierda)
Esta es la base del Modelo de Actividad del Ión Libre (FIAM) para toxicidad
de metales (Morel, 1983; Campbell, 1995).
64
Competencia
Efecto de Dureza sobre Dosis-Respuesta
Dosis-Respuesta de C. dubia a Cu en Agua de Lab (Hall et al., 1998)
Dureza = 75 y 200 mg/L como CaCO3

H = 75, Cu Disuelto
H = 200, Cu Disuelto
LC50=4.2, Beta = 0.4
LC50=45, Beta = 0.2
Mortalidad (%)
100
H = 75, Cu2+
H = 200, Cu2+
75
50
25
0.001 0.01 0.1 1 10 100 1000

2+
---------------------------- Cu ----------------------- ----------------- Cu Disuelto --------------------------
Cobre (ug/L)
Dosis Respuesta de C. dubia a Dureza de 75 y 200 mg/L como CaCO3:

Como ya se indicó, aumentar la dureza resulta en un aumento de la LC50,
en este caso de 4,2 a 45 ug/L a durezas de 75 y 200 mg/L como CaCO3,
respectivamente. (Comparar las dos curvas de la derecha.)
Sin embargo, en contraste con el efecto de EDTA, las curvas dosis-
respuesta no convergen cuando se expresan los resultados en términos de
metal libre. (Comparar las curvas de la izquierda).
La razón de esto es que los cationes de la dureza, Ca2+ y Mg2+, no
reaccionan con el metal para formar un complejo no - biodisponible. Por ende,
en este caso la actividad de ión libre no se modificada, y los niveles mayores
de cobre están asociados a mayores niveles de Cu2+.
La toxicidad reducida a mayores durezas está asociada a competencia de
los cationes positivamente cargados con el ión metálico libre por unión al
sitio de acción de toxicidad.
65
Competencia
Efecto de Ca sobre Acumulación de Cu en Branquia
35
Cu = 2.1 µg/L Cu = 16 µg/L
Cu de Branquia (nmol/g peso húmedo)

30
25
20
15
10
0
2.2 100-200 2.2 105 200
Calcio (mg/L como CaCO3)

Efecto de Dureza de Calcio sobre Acumulación en Branquia
(Datos: Playle et al., 1992)
Efecto de Calcio sobre Acumulación de Cu en Branquia:

Metales como el Cu y la Ag causan toxicidad a peces al inhibir la captación activa de
Na+ desde el agua. Esta actividad ionoregulatoria está centrada en las branquias, el
sitio primordial de acción de la toxicidad aguda de metales en peces.
Los resultados que se muestran ilustran cómo el aumento de dureza, al agregar
calcio, reduce la acumulación de Cu en las branquias (Datos: Playle et al., 1992).
Las dos barras de la izquierda muestran niveles basales de Cu en branquias a 2,1
ug/L de Cu disuelto total y 45 y 100-200 mg/L de calcio como CaCO3. El Cu basal en
branquias es ~ 11-12 nmol/gw (1 mol Cu = 63.546 g).
Las barras de la derecha mueestran niveles de Cu en branquias a un Cu disuelto de
16 ug/L. Al nivel más bajo de calcio (2.2 mg/L como CaCO3), el Cu en branquia es de
alrededor de 28 nmol/gw. Disminuye a15 y 12 mg/L como CaCO3 al aumentar el
calcio a 105 y 200 mg/L como CaCO3, respectivamente.
Esto se debe a que el ión Cu debe competir con los cationes de la dureza por su
unión al sitio de acción.
Estos dato muestran que hay una acumulación neta de Cu en las branquias tras una
breve exposición (Playle et al., 1992):
1. Inicialmente al nivel basal de 11-12 nmoles/gw;
2. Plateau inicial alcanzado en 1-3 h;
3. La acumulación a corto plazo refleja unión de Cu en las branquias a sitios
que controlan el paso de iones.
66
Acumulación de Metal y Toxicidad

(Datos: MacRae, 1994 and 1999)
h (%)
a 120(%)
TOTAL Cu = 10 ug/L
Test A
Mortality
100 Test B
Juvenil
TruchaTrout
80
deRainbow
60 LA50 BRANQUIA
Juvenile
~10 nmol/gw
Mortalidad
40
120-Hour
20
0
0 10 20 30 40 50
Cu en Branqui de 24 h (nmol/g peso húmedo)
Acumulación de metal y toxicidad:

La pregunta por responder: ¿Puede la acumulación en el sitio de acción
(branquias en peces) estar relacionada con un efecto tóxico?
Aquí se muestra una curva de dosis- respuesta, con la mortalidad de truchas a
120 h versus el cobre en branquias a 24 h.
• Todos los ensayos fueron hechos al mismo Cu total (10 ug/L) y el
Cu en branquias varió al agregar diferentes cantidades de DOC al
agua.
• Nótese que la LC50 de branquias = 22 nmoles/gw y que a alrededor
de 12 nmoles/gw (el Cu basal de Playle para fathead minnow),
<20% mortalidad, o sea mortalidad control.
• Considere que el Cu de branquias intercambiable (alrededor de 22
- 12 = 10 nmole/gw en la LC50 de branquias) define la dosis
respuesta, y que e las mediciones a corto plazo de branquias se
correlacionan con efectos de largo plazo.
Una premisa clave del BLM es que para un plazo de exposición determinado,
la acumulación neta asociada con un efecto dado, como un 50% de
mortalidad, es definida y única, e independiente de la química del agua local.
Si es así, entonces uno sólo necesita predecir la concentración de metal
disuelto que resulta en esta acumulación crítica para predecir la LC50
correspondiente. Esto es precisamente lo que hace el BLM.
67
Efectos de Normalización
40 Non-normalized LC50s
LC50s no normalizados
35 Hardness Normalized LC50s

LC50s normalizados por dureza
BLM Normalized
LC50 LC50s
normalizados por BLM
30
F re q u e n c y
25
Frecuencia 20
15
10
5
0
1 1.2 1.4
1.6 1.8 2
2.2 2.4
2.6 2.8
3
Log LC50
Log Copper LC50
de Cu
Normalización de datos de toxicidad:

Datos de la base de dato de toxicidad de la EPA, en que se
muestra los efectos de normalizar los datos de LC50 para fathead
minnow `por dureza y análisis BLM.
Primero, mostraremos la distribución de valores de LC50 (datos

de Erickson et al., 1996). La desviación estándar basada en los
valores de LC50 medidos es de 233.
68

BLM Normalized
LC50 LC50s
30
F re q u e n c y
25
Frecuencia 20
15
10
5
0
1 1.2 1.4
1.6 1.8 2
2.2 2.4
2.6 2.8
3
Log LC50
Log Copper LC50
de Cu

Datos de la base de dato de toxicidad de la EPA, en que se
muestra los efectos de normalizar los datos de LC50 para fathead
minnow `por dureza y análisis BLM.
Primero, mostraremos la distribución de valores de LC50 (datos

de Erickson et al., 1996). La desviación estándar basada en los
valores de LC50 medidos es de 233.
Los datos normalizados con la ecuación de dureza presentan una

distribución más apretada, con menos dispersión entre valores
mínimos y máximos. La reducción general de varianza se refleja
en una desviación estándar de sólo 52.
69

BLM Normalized
LC50 LC50s
30
F re q u e n c y
25
Frecuencia 20
15
10
5
0
1 1.2 1.4
1.6 1.8 2
2.2 2.4
2.6 2.8
3
Log LC50
Log Copper LC50
de Cu

Datos de la base de dato de toxicidad de la EPA, en que se muestra los efectos de
normalizar los datos de LC50 para fathead minnow `por dureza y análisis BLM.
Primero, mostraremos la distribución de valores de LC50 (datos de Erickson et al., 1996).

La desviación estándar basada en los valores de LC50 medidos es de 233.
Los datos normalizados con la ecuación de dureza presentan una distribución más
apretada, con menos dispersión entre valores mínimos y máximos. La reducción general de
varianza se refleja en una desviación estándar de sólo 52.
Por último, los valores normalizados por BLM exhiben una variación aún menor. La
distribución se ha reducido a un rango mucho menor, con una tendencia central más fuerte.
En este caso, la desviación estándar se ha reducido a 22, o sea un décimo del valor
original.
Estas comparaciones se hicieron con datos de la base de datos EPA para el criterio de
calidad de cobre. En cierta medida estos datos minimizan los beneficios de usar el BLM,
pues los datos en el documento de criterio no pueden tener cantidades apreciables de
DOC. La capacidad del modelo para predecir el efecto pronunciado de la DOC sobre la
toxicidad es una de las principales ventajas del modelo. Si se hiciera esta comparación
usando valores de LC50 medidos en el agua del sitio, en que se esperaría que las
concentraciones de DOC fueran mayores, se notaría mucho más el efecto de la
normalización con BLM.
70
Comparación de Enfoques
BLM versus WER
WER: De alcance amplio, pero error muestral es
grande, precisión baja.
BLM: Limitaciones en formulación de modelo,
pero error muestral es bajo.
Opciones de implementación de BLM:
Como substituto de WER (adicional a criterio
normalizado por dureza).
En reemplazo de normalización por dureza
(directamente en criterio).
WER = Razón de Efecto de Agua

71
Resumen:
Factores que afectan acumulación de metal en el

ligando biótico, “las tres C’s”:
Concentration de Metal Disuelto

Especiación/Formación de Complejos
Competition con Cationes en Ligando Biótico
Un nivel determinado de acumulación en el sitio

de acción de la toxicidad está específicamente
asociado a un efecto determinado.
72
Sección 4: Modelo de
Ligando Biótico de
Toxicidad Aguda: Bases
Técnicas
73
¿Qué es el BLM?
Descripción de esquema general de BLM
Relación de acumulación y efectos
Variación en LC50 de metal disuelto, M2+
2+ y
el LA50 en el LC50 disuelto.
Aplicación del BLM para predecir toxicidad
de Cu
Resumen
M2+ = metal divalente
LA50 = Acumulación letal = Concentración de metal en branquia

que resulta en 50% de organismos muertos
74
Esquema General del BLM

H+
Ca+2 Superficie de
Na+
GillBranquia
Surface
(biotic
(ligandoligand)
biótico)
Competing
Cationes Cations
Competidores
Complejos
Organic
con
Ligand
Ligandos
Complexes
Orgánicos
Free
Ión Free
Ión
M - DOC Metal ion
Metálico Sitio de
Metal Unión
Binding
Metal ion
Metálico
M+2
Libre (M+2) M+2
Libre (M+2)
deSite
Metal
Inorganic
Complejos con
LigandLigandos
Inorgánicos
Complexes
M OH+
M CO3+
M Cl+
Esquema General de Modelo de Ligando Biótico:
La esencia del esquema del BLM (ver arriba) fue propuesta por primera vez
por Pagenkopf (1983) como el Modelo de Interacción en Sitio de Branquia
(GSIM).
• Aquí no discutiremos elementos básicos de equilibrio químico. Sin
embargo, tales modelos no son nuevos y generalmente son
aceptados por la comunidad científica.
El BLM consiste en 3 tipos principales de interacción:
• Interacciones Metal- Ligando Inorgánico -
• Equilibrio Químico en Suelos y Soluciones (CHESS) (Santore
and Driscoll, 1995) sirve como base de los cálculos de
especiación y fue adaptado para incluir las interacciones
descritas en lo que sigue.
• Interacciones metal- m ateria orgánica (OM)-
• Basado en el Modelo Acuoso Húmico Windermere (WHAM),
Versión 5 (Tipping, 1994)
• Interacciones con ligando biótico-
• Adaptación de Playle et al., 1993a,b.
Se discutirá por parte cada una de éstas.
75
Interacciones Metal Ligando Inorgánico

Inorgánicos
H+
Ca+2 Superficie de
Na+
GillBranquia
Surface
(biotic
(ligandoligand)
biótico)
Competing
Cationes Cations
Competidores
Complejos
Organic
con
Ligand
Ligandos
Complexes
Orgánicos
Free
Ión Free
Ión
M - DOC Metal ion
Metálico Sitio de
Metal Unión
Binding
Metal ion
Metálico
M+2
Libre (M+2) M+2
Libre (M+2)
deSite
Metal
Inorganic
Complejos con
LigandLigandos
Inorgánicos
Complexes
M OH+
M CO3+
M Cl+
La esencia del esquema del BLM (ver arriba) fue propuesta por primera vez por
Pagenkopf (1983) como el Modelo de Interacción en Sitio de Branquia (GSIM).
• Equilibrio Químico en Suelos y Soluciones (CHESS) (Santore
and Driscoll, 1995) sirve como base de los cálculos de
especiación y fue adaptado para incluir las interacciones
76
Reacciones Metal-Ligandos Inorgánicos
El cobre puede unirse a diversos ligandos

inorgánicos
Ligandos principales
• Carbonatos
• Hydróxidos
Ligandos menores
• Cloruro
• Sulfatos
Reacciones típicas de cobre con ligandos inorgánicos en

solución:
Especie Inorgánica Reacciones Log K

--------------------------------------------------------------------------------
Hydróxidos:
Cu + OH = Cu(OH) -1 6.48
Cu + 2*OH = Cu(OH)2 11.78
Carbonatos:
Cu + CO3 = CuCO3 6.55
Cu + 2*CO3 = Cu(CO3)2 9.92
Cu + H + CO3 = CuHCO3 14.32
Cu + Cl = CuCl+ 0.4
Cu + SO4 = CuSO4 2.36
77
Especiación Inorgánica de Cu (sin OM)

Especiación de Cu eninAgua
Copper Speciation FreshDulce
Water
10 3
DOC = 0.01 mg/L CuT = 18 ug/L

2
10010 +2 +2
CuCu
- -
CuHCO
CuHCO
3 3
1
1010
Fracción de cu Total (%)
Fraction of Dissolved Copper (%)
CuSO
CuSO
4 4
0
110
Cu-DOC
Cu-DOC
-1 CuOH
CuOH+ +
0.110 CuCl
CuCl + +
CuCO
CuCO 3 3
-2
0.0110
-3
0.00110
-4 Cu(OH)
Cu(OH)2 2
0.000110
4.04.0 5.05.0 6.06.0 7.07.0 8.08.0 9.09.0 10.0
10.0
pH pH
Ejemplo de especiación inorgánica
Este gráfico ilustra la diversidad de especies de Cu inorgánico que se forman

en agua con bajos niveles de DOC.
OM = materia orgánica
Los resultados se expresan en términos del porcentaje del cobre disuelto total
presente para cada especie metálica como función del pH.
Es particularmente importante notar cómo el ión Cu libre varía notablemente

con el pH. Como esta especie es considerada generalmente una forma
biodisponible, es significativo que disminuya marcadamente con el aumento
del pH, por casi dos órdenes de magnitud en un rango de pH entre 6 y 9.
Por supuesto, como veremos, ocurren otras interacciones que refuerzan y

reducen esta respuesta. Estas otras interacciones también se incluyen en el
modelo.
Notar también que en el caso del cobre, los datos disponibles también
sugieren que el CuOH+ es potencialmente biodisponible. El BLM es capaz de
representar tales interacciones.
78
Interacciones Metal-Materia Orgánica

Orgánicos
H+
Ca+2 Superficie de
Na+
GillBranquia
Surface
(biotic
(ligandoligand)
biótico)
Competing
Cationes Cations
Competidores
Complejos
Organic
con
Ligand
Ligandos
Complexes
Orgánicos
Free
Ión Free
Ión
M - DOC Metal ion
Metálico Sitio de
Metal Unión
Binding
Metal ion
Metálico
M+2
Libre (M+2) M+2
Libre (M+2)
deSite
Metal
Inorganic
Complejos con
LigandLigandos
Inorgánicos
Complexes
M OH+
M CO3+
M Cl+
(GSIM).
• Equilibrio Químico en Suelos y Soluciones (CHESS)
(Santore and Driscoll, 1995) sirve como base de los cálculos
de especiación y fue adaptado para incluir las interacciones
79
Metal- Materia Orgánica-Resultados

NaNO3 10-3 2.5 pH 8.4
NaNO3 10-2
3 Ca(NO3)2 10-3 pH 7
3.0
Ca(NO3)2 10-2
p(Complexed Metal)
p(Complexed Metal)
pH 5.1
3.5
4
4.0
Cu 4.5 Cu
5
5.0
10 8 6 4 11 9 7 5 3
p[Free Cu]
p[ Free Cu]
2.5 2.5
pH 6
pH 8
p(Complexed Metal)
3.0
p(Complexed Metal)
pH 5
pH 6
3.5
3.5 pH 4
pH 4
4.0
4.5 Cd Pb
4.5
5.0 6.0 5.0 4.0
7 6 5 4 3
p[Free Cd] p[Free Pb]
Ejemplo WHAM - versión 5 Resultados de Calibración:
Como ya lo indicamos, el WHAM ha sido ampliamente calibrado para una

diversidad de metales y tipos de Materia Orgánica Natural (NOM).
Aquí se presentan resultados representativos de calibración para Cu, Cd y

Pb (redibujado de Tipping and Hurley, 1992). En cada caso,se muestra la
concentración de metal en complejo como función de la concentración
respectiva de metal libre. Para cada metal, las diferentes curvas
corresponden a mediciones a diferentes pH.
El excelente ajuste entre modelo y datos subraya la razón para basar las
interacciones meta:NOM en la versión 5 de WHAM.
Véase Tipping (1994) para una lista de las reacciones básicas.

80
Especiación de Cu en Presencia de MO
Especiación de Cobre en Agua Dulce
DOC = 3 mg/L, CuT = 18 ug/L

100
Cu-DOC
Cu+2
10
CuHCO3-
Fracción de Cu Total (%)
1 CuSO4
0.10
CuOH+
0.01 CuCl+
CuCO3
0.001
0.0001 Cu(OH)2
4.0 5.0 6.0 7.0 8.0 9.0 10.0

pH
T
Ejemplo de especiación de Cu en presencia de OM:
Este gráfico ilustra la diversidad de especies orgánicas e inorgánicas de Cu

que se forman en agua blanda con 3 mg/L de DOC y 18 ug/L de Cu disuelto.
Los resultados se expresan en términos del porcentaje del cobre disuelto total
presente para cada especie metálica como función del pH.
Como antes, el ión libre de Cu varía notablemente con el pH. Como el Cu2+ es
generalmente considerado una forma biodisponible, es significativo el hecho
que disminuya por casi 2 órdenes de magnitud al aumentar el pH, entre 6 y 9.
La diferencia importante entre estos resultados y los presentado previamente

de especiación inorgánica es que la concentración de Cu2+ es mucho más baja
cuando hay DOC (dos tercios y cien veces más baja a pH 6 y 9,
respectivamente). La concentración de CuOH+ también se reduce
significativamente a pH elevado.
Como el Cu2+ es biodisponible, esto tiene importantes implicancias para

cualquier evaluación del potencial del Cu para ejercer un efecto adverso.
81
Interacciones Metal-Ligando Biótico

Biótico
H+
Ca+2 Superficie de
Na+
GillBranquia
Surface
(biotic
(ligandoligand)
biótico)
Competing
Cationes Cations
Competidores
Complejos
Organic
con
Ligand
Ligandos
Complexes
Orgánicos
Free
Ión Free
Ión
M - DOC Metal ion
Metálico Sitio de
Metal Unión
Binding
Metal ion
Metálico
M+2
Libre (M+2) M+2
Libre (M+2)
deSite
Metal
Inorganic
Complejos con
LigandLigandos
Inorgánicos
Complexes
M OH+
M CO3+
M Cl+
(GSIM).
82

Agua Epitelio Branquia Plasma
Plasma
Water
Agua Epitelio Branquia Plasma
Cu+2
Cu+2
Branquia sana Branquia impactada

(modified from Jobling 1995)
(modificado de Jobling 1995) por metal
Interacciones metal-ligando biótico:
Para peces de agua dulce, por ejemplo, el sitio de acción de la

toxicidad es la branquia. Entendemos que el ligando biótico es
la Na+,K+-ATPasa, una enzima requerida para la captación
activa de sodio desde el agua.
En síntesis, el Cu se une e inhibe la actividad de la enzima. Esto

reduce la captación de sodio. Sin embargo, la pérdida de sodio
es pasiva y no es afectada por la inhibición de a ATPasa. Por
ende, el pez muere por desbalance iónico provocado por una
reducción crítica del sodio.
En organismos de agua salada, el transporte activo de ión sodio

requiere regular contra concentraciones excesivas de Na
plasmático, pero el sistema de transporte general involucrado es
el mismo.
83
Metal-Ligando Biótico-Resultados: Cu
40
Playle et al., 1993
35 BLM Calibration
húmedo)
(nmol/g wet) 30
25
Gill-Cu (nmol/g
20
Cu Branquia
15
10
0
0 50 100 150 200 250 300
Free Copper
Cobre (nmol/L)
Libre (nmol/L)
Ejemplo de resultados de acumulación de Cu en

branquias:
Previamente se había demostrado que la acumulación a corto

plazo en la branquia estaba relacionada con la toxicidad
(MacRae, 1999).
Aquí se muestra una comparación del cálculo BLM de Cu en

branquia con resultado medidos (Datos: Playle, 1993a). Aunque
los dato presenta algún grado de dispersión, el modelo reproduce
la tendencia general de los datos razonablemente bien.
En estos datos se restó la concentración basal de cobre del

cobre-branquia total medido.
84
Metal-Ligando Biótico-Resultados: Ag
50 20
Ag/g wet)
Gill-Ag (nmol Ag/g wet)

Control Unit
AgT = 18.3 ug/L
(nmol/g húmedo)
40
húmedo)
Measured, Means with 95% C.I.
15
Ag Branquia
Ag Branquia
Gill:AgCl, Calculated
30
(nmol
Gill:Ag, Calculated
10
(nmol/g
Gill-Ag
20
5
10
0 0
0.0 4.3 5.4 23.7 42.1 53.9 2.4 3.0 5.0 7.0 10.9 14.6 24.2
Ag Total (ug/L) DOC (mg C/L)
20 20
Ag/g wet)
Gill-Ag (nmol Ag/g wet)
húmedo)
AgT = 11.9 ug/L
(nmol/g húmedo)
AgT = 11.9 ug/L
Ag Branquia
15 15
Ag Branquia
(nmol
10 10
(nmol/g
Gill-Ag
5 5
0 0
300 300 400 150011300 400 400 1600 16000
Chloruro (uM) Sodio (uM)
Unión de Plata a Branquias de Trucha
Ejemplo de resultado de acumulación de Ag en branquia:

(Datos: Janes and Playle, 1995)
Esta es una variación de los resultado de acumulación de Cu en branquia
presentados previamente, pero para plata. El planel superior izquierdo muestra el
nivel de Ag en branquia como función de la concentración de plata disuelta en un
agua suave, con bajo nivel de DOC. Lo resultados del modelo (segundas barras)
se comparan bien con los datos (primeras barras). (Las primeras dos barras de
cada panel son los controles.)
El panel supeior derecho muestra el efecto de agregar DOC a plata de branquia

en agua con ~18 ug/L de Ag disuelta. Tanto el modelo como los datos muestran
niveles decrecientes de Ag de branquia a medida que aumnta la DOC, debido a
que la formación de complejos de Ag con DOC reduce Ag+.
El panel inferior izquierdo ilustra el efecto de la formación de complejos

inorgánicos sobre los niveles de plata en branquia a una concentración de Ag
disuelta de ~ 12 ug/L. Aunque AgCl puede unirse a la branquia, a una
concentración sufiientemente alta de Cl, el efecto neto de reducir Ag+ por
formación de complejos es disminuir el nivel de Ag en branquia.
Por último, el panel inferior derecho muestra el efecto de la competencia por Na+
sobre la Ag en branquia. A un nivel de Ag ~ 12 ug/L, Ag en branquia es insensible
a Na+ < 1600 uM, pero claramente afectada a niveles más altos.
85
Metal-Ligando Biótico Especiación

+
BLM Cu
Distribución de &
CuCuOH
& CuOHDistribution on Gill at
de BLM en Branquia enthe Cu LC50
el LC50 de Cu
7
Cu Branquia (umol / gw) 6
5
Gill-Cu+2
Gill-CuOH
+
4
0
4,5 5,5 6,5 7,5 8,5 9,5
pH
Especiación activa de Cu en la branquia:
Estos resultados muestran cómo la versión actual del modelo incluye

la unión de tanto Cu2+ como CuOH+ en la branquia.
El gráfico muestra cómo el Cu de branquia incluye ambas especies de

cobre.
A medida que aumenta el pH, aumenta el nivel de [OH-], lo ue lleva a

un cambio en la especiación de Cu disuelto desde Cu2+ a CuOH+ (ver
el diagrama previo de especiación inorgánica de Cu).
Como se muestra, a niveles de pH > 8, el CuOH+ pasa a ser un

componente cada vez más significativo del Cu en branquia.
Calibrando el modelo de esta manera, la disminución de Cu en

branquia con el aumento de pH (la disminución de Cu2+ compensa de
sobra la disminución de competencia de protones) es compensada. Lo
que es más importante, la disminución de toxicidad que resultaría a un
pH más alto también es moderada.
86
Acumulación de Metal y Toxicidad

(Datos: MacRae, 1994, Mac Rae et al., 1999)
h (%) (%)
TOTAL Cu = 10 ug/L
Test A
Mortality
100 Test B
a 120
JuvenilTrout
80
Rainbow
60 LA50 BRANQUIA
Trucha
Juvenile
~10 nmol/gw
40
120-Hourde
Mortalidad
20
0
0 10 20 30 40 50
Cu Branquia de 24 h (nmol/g peso húmedo)
Acumulación de metal y toxicidad:

La pregunta por responder: ¿Puede la acumulación en el sitio de acción
(branquias en peces) estar relacionada con un efecto tóxico?
Aquí se muestra una curva de dosis- respuesta, con la mortalidad de truchas a
120 h versus el cobre en branquias a 24 h.
• Todos los ensayos fueron hechos al mismo Cu total (10 ug/L) y el Cu

en branquias varió al agregar diferentes cantidades de DOC al agua.
• Nótese que la LC50 de branquias = 22 nmoles/gw y que a alrededor
de 12 nmoles/gw (el Cu basal de Playle para fathead minnow), <20%
mortalidad, o sea mortalidad control.
• Considere que el Cu de branquias intercambiable (alrededor de 22-
12 = 10 nmole/gw en la LC50 de branquias) define la dosis respuesta,
y que e las mediciones a corto plazo de branquias se correlacionan
con efectos de largo plazo.
Una premisa clave del BLM es que para un plazo de exposición determinado,
la acumulación neta asociada con un efecto dado, como un 50% de mortalidad,
es definida y única, e independiente de la química del agua local.
Si es así, entonces uno sólo necesita predecir la concentración de metal
disuelto que resulta en esta acumulación crítica para predecir la LC50
correspondiente. Esto es precisamente lo que hace el BLM.
87
LC50 versus DOC

(Datos: Hall et al., 1998)
Estudio WER de Pennsylvania (C. dubia )
1000
Medido
Predicho por BLM
LC50 de Cu (ug/L)
100
10
1
0 2 4 6 8 10
DOC (mg/L)
LC50 versus DOC:
Este es un set de datos de sitios de Plantas de tratamiento de

Aguas en Pennsylvania. En este caso el organismo es
Ceriodaphnia dubia. Los datos muestran que la LC50 de Cu
disuelto aumenta con la concentración de DOC, según lo
esperado.
Los resultados del BLM reflejan la misma tendencia.
La DOM es una combinación de NOM y OM de la Planta.

88
Importancia de Materia Orgánica

Datos: Clemson U. (WERF BLM Project)
10000
Meas CuCu
LC50 de LC50
Medido
BLM
LC50Predicted Cu LC50
de Cu Predicho por BLM
1000
Cu LC50 (ug / L)
100
10
0,1 1 10 100
Carbono Orgánico Disuelto (mg C / L)
89
LC50 versus Calcio

(Datos: Erickson et al., 1987, 1996)
8
7 Cu total
(umol/L)
Total Cu
MEASURED
6
MEDIDO
(umol/L)
5
LC50
4
LC50
3
DOC y pH constantes
2
1
0
Ión cúprico
CALCULATED
(umol/L)
CALCULADO 0.20 Cupric Ion
(umol/L)
LC50
LC50
0.10
0.00
(Nmol/G
(nmol/g wet tissue)
25
Cu branquia
Gill Cu
tejido húmedo)
CALCULATED
20
LC50CALCULADO
15
10
5
LC50
0
0.0 0.5 1.0 1.5 2.0 2.5 3.0
Ca (meq/L)
LC50 versus Calcio:
Aquí se muestra un segundo grupo de datos `para fathead minnow. En este caso, se
varía el calcio para ver el efecto de la dureza sobre la LC50.
El panel superior muestra que a medida que se agrega calcio, la LC50 de Cu disuelto
también aumenta. Como se discutió previamente, la razón es que los cationes de
calcio compiten con el Cu2+ por sitios de unión en el ligando biótico. (Junto con los
datos se muestra una línea de tendencia).
El panel del medio muestra que la LC50 de Cu2+ calculada también aumenta con el
calcio cuando el Cu disuelto es igual a la LC50 de Cu disuelto. Aquí, el CO32-
agregado (junto con el calcio) no es suficiente para compensar el aumento de Cu2+ a
medida que el Cu aumenta.
El panel inferior muestra que el Cu en branquia calculado es casi constante a todos

los niveles de calcio (la línea indica un promedio de ~ 7 nmol/gw). Esto se debe a que
la competencia del ión Ca2+ compensa el aumento de Cu en branquia que ocurriría al
aumentar el Cu2+.
90
Importancia del pH
Datos de Erickson et al., 1987, 1996
300
Measured
LC50 CuCu LC50
Medido
BLM Predicted
LC50 Cu LC50
Cu Predicho x BLM
Cu LC50 (ug / L)
200
100
0
6 7 8 9
pH
91
Método para Predecir LC50s

Simulación Numérica de Titulación
30
LABORATORY
LABORATORIO
SITE-WATER
AGUA DEL SITIO
25
GILL Cu (nmol/g wet)

20
15
10
LA50
5
0
0 500 1000 1500 2000 2500 3000 3500 4000
Cu disuelto (ug/L)
Realizando una “Titulación Numérica”:
Un uso práctico del modelo es predecir cambios en LC50 como resultado de

cambios en calidad del agua. Para esto, es necesario simular numéricamente
una titulación del metal.
Como primer paso, se ingresa la química de la muestra de agua al modelo. La

titulación numérica se realiza “añadiendo” cada vez más Cu a la mezcla y
calculando el nivel de Cu en branquia. Como se muestra en la figura, el Cu en
branquia simulado para la muestra de laboratorio aumenta en forma
relativamente abrupta a medida que se añade el Cu. Esto se debe a la baja
capacidad de formación de complejos y bajos niveles de cationes competidores
en esta agua.
En contraste, hay que añadir mucho más cobre al efluente para alcanzar el
mismo nivel de Cu en branquia. Al principio el Cu en branquia aumenta
lentamente, ya que los sitios de unión fuerte de la NOM lo acomplejan. Una vez
que éstos se saturan, el Cu en branquia aumenta con una tasa más lineal.
La LC50 de Cu predicha para cada muestra es simplemente la concentración de

Cu disuelto asociada con la LA50 de Cu en Branquia, ~6 nmols/gw de Cu
intercambiable. El BLM predice una LC50 de Cu en el efluente 5 veces mayor
que la del agua de lab.
92
Variabilidad de Mediciones de LC50s de Cu

Exposiciones en Agua de Lago Superior (Erickson et al., 1987)
250
200
+2x
LC50 de Cu (ug/L)
150
100 MejorPrediction
Best Predicción
-2x
50
0
Variación en Duplicados de LC50s
Variabilidad en las LC50s medidas:
Esta figura presenta resultados de LC50 de Cu disuelto que

fueron medidas en ensayos estáticos.
Las aguas de ensayo eran de la misma agua original en cada

caso.
La variabilidad de los valores de LC50 es una estimación de cuán

bien pueden replicarse mediciones bien hechas de LC50 en
mediciones posteriores usando la misma agua y organismo.
La variabilidad es de aproximadamente un factor de dos en torno

al promedio para cada grupo.
Para evaluar el rendimiento de las predicciones del BLM, se

considera que predicciones dentro de un factor de 2 son
adecuadas.
93
LC50s Medidos vs. Predicción

Fathead Minnow - Exposición Estática de 96h
(Erickson et al., 1987)
10000
C u L C 5 0 P r e d ic h o (u g /L )
1000
100
10
10 100 1000 10000
Cu LC50 Medido (ug/L)
Resumen de Predicciones BLM para Fathead Minnow:
Estos resultados muestran cuánto es capaz el BLM de explicar

cambios en LC50 para fathead minnow resultantes de cambios en
la química del agua. Se grafica la LC50 predicha contra el
resultado medido. La línea diagonal sólida representa la línea de
ajuste perfecto, y las líneas cortadas paralelas corresponden a
una desviación de +/- 2 veces de la línea de igualdad.
En cada caso, la LA50 fue fijada en 6.3 nmol/gw.
Las LC50s medidas varían por más de 2 órdenes de magnitud,

según se aprecia por el rango abarcado por el eje X. Los
resultados BLM están, en casi todos los casos, dentro del rango
aceptable de desviación del valor medido.
94
Resumen y Conclusiones
La calidad del agua afecta la toxicidad del metal

La concentración es un factor importante, pero no el
único, en determinar la toxicidad.
La formación de complejos orgánicos e inorgánicos
es importante
La competencia por los sitios bióticos también es
importante
Se puede predecir la toxicidad conociendo la
concentración de la especie “metal-ligando biótico”
Mismos conceptos se aplican a otros metales
….. Deben tenerse en cuenta los aspectos
termodinámicos
95
Ligando Biótico de Toxicidad
Aguda: Aplicación a Otros
Organismos y Otros Metales
96
En la Sección 4 desarrollamos un BLM para

fathead minnows usando:
Datos termodinámicos inorgánicos

Un modelo de interacciones metal-materia orgánica
Datos de acumulación de Cu en el ligando biótico
Ahora, examinaremos la sensibilidad de diferentes

especies y cómo aplicar el BLM a otros
organismos y metales.
97
Importancia de La Sensibilidad
500 25
Agua de Referencia
Agua de Sitio
WER
400 20
Cu LC50 (ug/L)
300 15
WER
200 10
WER
100 5
0 0
Mysid Polychaete Copepod Oyster Mussel
Estos resultados simulados muestran por qué la sensibilidad

específica es importante (Allen & Hansen, 1996):.
La primera barra de cada grupo muestra los resultados de LC50 en agua de

lab para organismos cada vez más sensibles, de izquierda a derecha (i.e., la
LC50 disminuye al aumentar la sensibilidad).
Las barras negras muestran las LC50 para estos organismos en un agua de
sitio representativa. Como ocurre en la mayoría de los casos, la LC50
aumenta en agua de sitio, mientras que las sensibilidades relativas se
mantienen.
Razón de Efecto de Agua (WER) = LC50SITIO / LC50LAB
Los valores de WER (terceras barras) tienden a ser mayores cuando se

miden en organismos más sensibles.
Este es un punto clave a entender: En términos relativos, el efecto de la

química del agua sobre la disponibilidad y toxicidad del metal tiende a
ser mayor en organismos más sensibles. Como la magnitud del WQC es
controlada por los organismos más sensibles, ésta es una consideración
importante al evaluar el WQC sitio específico.
98
Introducción
En esta sección, discuitiremos cómo aplicar

el BLM a otros organismos
También revisaremos la aplicación del BLM

a otros metales (e.g., Ag, Cd, Ni, Pb y Zn) :
99

Biótico
H+
Ca+2 Superficie de
Na+
GillBranquia
Surface
(biotic
(ligandoligand)
biótico)
Competing
Cationes Cations
Competidores
Complejos
Organic
con
Ligand
Ligandos
Complexes
Orgánicos
Free
Ión Free
Ión
M - DOC Metal ion
Metálico Sitio de
Metal Unión
Binding
Metal ion
Metálico
M+2
Libre (M+2) M+2
Libre (M+2)
deSite
Metal
Inorganic
Complejos con
LigandLigandos
Inorgánicos
Complexes
M OH+
M CO3+
M Cl+
(GSIM).
100
Rango de Sensibilidades
BASE PARA EL WQC de Cu en AGUA DULCE
(Datos: EPA, 1995)
100,000
DUREZA = 50 mg/L
10,000 X
X
X
COPPER GMAV (ug/L)

XX
XX
XX
1,000 X
X
X
X
X
X
X
X
XXX
X
100 Daphnia XX X
XX
pulex XXX
XXX Fathead
XXX Minnow
X
X
X FAV
10 X
CMC
FCV
1
0.1 1 10 20 50 80 90 99 99.9
PERCENTIL
Extensión del BLM a otros organismos:
Esta es la distribución de probabilidad de los Valores Agudos Promedio de

Género (GMAVs) para Cu. Cada punto representa una LC50 para un
organismo de un género diferente. Los GMAVs varían en cerca de 1000
veces, lo que indica fuertes diferencias en sensibilidad.
El mismo enfoque usado para desarrollar el BLM de fathead minnow BLM

podría aplicarse a otros organismos. Sin embargo, no existen datos de
acumulación en ligando biótico para la mayoría de los organismos.
Con respecto al mecanismo de toxicidad de Cu para organismos acuáticos (y

para otros metales también) hay razones para creer que es
fundamentalmente el mismo. Se deduce, por lo tanto, que el ligando biótico,
el sitio de acción de toxicidad, puede ser el mismo en diferentes organismos.
Si es así, entonces la representación de las interacciones químicas en el

ligando biótico es más universal que lo que se esperaría sobre la base del
amplio rango de sensibilidades ilustrado en la figura.
101
Parámetros del Modelo
Lo Inorgánico
Valores de base de datos termodinámicos
Lo Orgánico
Valores de calibración a mediciones químicas con
NOM
Lo Biótico
Valores derivados de un número limitado de datos de
acumulación
Se supone que la mayoría de los parámetros son
consistentes para otros organismos, ya que los
mecanismos de transporte de iones son similares
LA50 utilizado da cuenta de variación de sensibilidad
entre especies
Valores paramétricos del BLM:
Esta lámina resume los parámetros usados en el BLM.
Los parámetros químicos representan valores termodinámicos que

deben permanecer constantes para todas las aplicaciones del modelo.
Los parámetros del ligando biótico pueden cambiar, pero hay datos
limitados para varios peces.
Durante el desarrollo del BLM hemos supuesto que los valores de los
parámetros de unión son los mismos para todos los organismos, dado
que la enzima afectada es la misma.
Para ajustar la sensibilidad del modelo, el único parámatro a cambiar

es la LA50.
Siguen algunos ejemplos de invertebrados, y después un resumen

general de todos los resultados para invertebrados.
102
Método para Predecir LC50s

Simulación Numérica de Titulación
30
LABORATORY
LABORATORIO
SITE-WATER
AGUA DEL SITIO
25
GILL Cu (nmol/g wet)

20
15
10
LA50
5
0
0 500 1000 1500 2000 2500 3000 3500 4000
Cu disuelto (ug/L)
Realizando una “Titulación Numérica”:
Un uso práctico del modelo es predecir cambios en LC50 como resultado de

cambios en calidad del agua. Para esto, es necesario simular numéricamente
una titulación del metal.
Como primer paso, se ingresa la química de la muestra de agua al modelo. La

titulación numérica se realiza “añadiendo” cada vez más Cu a la mezcla y
calculando el nivel de Cu en branquia. Como se muestra en la figura, el Cu en
branquia simulado para la muestra de laboratorio aumenta en forma
relativamente abrupta a medida que se añade el Cu. Esto se debe a la baja
capacidad de formación de complejos y bajos niveles de cationes
competidores en esta agua.
En contraste, hay que añadir mucho más cobre al efluente para alcanzar el
mismo nivel de Cu en branquia. Al principio el Cu en branquia aumenta
lentamente, ya que los sitios de unión fuerte de la NOM lo acomplejan. Una
vez que éstos se saturan, el Cu en branquia aumenta con una tasa más lineal.
La LC50 de Cu predicha para cada muestra es simplemente la concentración

de Cu disuelto asociada con la LA50 de Cu en Branquia, ~6 nmols/gw de Cu
intercambiable. El BLM predice una LC50 de Cu en el efluente 5 veces mayor
que la del agua de lab.
103
Aplicación a Otros Organismos

Calibración de BLM Interespecífico
L C50 P red ich o p o r BL M 100
+LA50
10 -LA50
1
1 10 100
LC50 Medido
Extensión del BLM a otros organismos:
Entonces, ¿cómo se hace para representar la sensibilidad de la especie?
Es preferible usar un enfoque que sea tan simple como sea posible, hasta
que entendamos mejor los procesos fundamentales.
El uso del BLM de fathead minnow para predecir la LC50 de un organismo

más sensible llevaría a sobrestimar la LC50.
Recuerde que para predecir una LC50 para fathead minnow, se realiza una
titulación numérica. El metal de ligando biótico aumenta con el metal disuelto
y la LC50 es la concentración disuelta que corresponde a la LA50.
Si se aumenta o disminuye la LA50, lo mismo ocurrirá con la LC50 disuelta

asociada. Esta es, cualitativamente al menos, la respuesta.
O sea que el enfoque se usa actualmente para representar la sensibilidad

del organismo es ajustar la LA50, para calibrar el modelo a la sensibilidad
del organismo.
104
Cu BLM: Ceriodaphnia dubia

1000
Pensilvania Copper Group, LC50 Real Medido

Pensilvania Copper Group, LC50 Mayor Medido
Tabla 1, Datos de Docum,ento WQC
100
Predicción LC50 (ug/L)
10
1
1 10 100 1000
LC50 Medido (ug/L)
Extensión del BLM a C. dubia:
Este gráfico muestra resultados de calibración del modelo para

C. dubia. El Valor Agudo Promedio de Especie (SMAV) de C.
dubia es 14 ug/L, lo que la hace una de las especies más
sensibles a cobre. Los datos vienen de dos estudios, uno con
agua extraída aguas abajo de una Planta de Tratamiento de
Aguas en Pennsylvania (Hall and Associates with Environmental
Engineering and Management Associates,1998) y el otro de
documentos del WQC de Cu (USEPA, 1985, 1996)
Los datos abarcan un rango de 2 òrdenes de magnitud en LC50s,

desde unos 4 a 300 ug/L.
Los LC50 de BLM se basan en la calibración para fathead

minnow, excepto que se redujo la LA50 de 6.37 a 0.058 nmol/gw.
Como se aprecia, los resultados predichos están, con pocas

excepciones, dentro de un factor de 2 de las LC50 medidas.
105
Cu BLM: Daphnia pulex

1000
CT DEP (Dunbar, 1996)

LC50 (ug/L) Tabla
Table1,1,Datos de Documento
WQC Document Data WQC
100
CALCULADO
PREDICTED
LC50
10
1
1 10 100 1000
LC50 MEDIDO LC50
MEASURED (ug/L)(ug/L)
Extensión del BLM a D. pulex:
Este gráfico muestra resultados de calibración para D. pulex.

El SMAV para D. pulex es de alredor de 13,2 ug/L, lo que la hace
una especie similarmente sensible. Los datos provienen de dos
estudios, uno del Depto. De Protección Ambiental de Connecticut
DEP (Dunbar, 1996) y el otro de documentos del WQC de Cu
(USEPA, 1985)
Las LC50 medidas van entre 2 y 80 ug/L.
Las LC50 de BLM de nuevo se basan en la calibracíón para

fathead minnow calibration, excepto que la LA50 se redujo de
6,37 a 0,045 nmol/gw.
Como se aprecia, los resultados predichos están, con pocas

excepciones, dentro de un factor de 2 de las LC50 medidas.
106
Cu BLM: Resumen de Invertebrados

1000
D. magna
LC50 (ug/L)
D. pulicaria
H. azteca
C. dubia
D. pulex
(ug/L)
100
Predicted Cu
BLMCALCULADO
10
LC50
1
1 10 100 1000
Measured
LC50 MEDIDO Cu LC50
(ug/L) (ug/L)
Resumen de la aplicación de BLM a invertebrados:
El gráfico muestra un resumen de LC50 predichas versus medidas para

invertebrados. El modelo de especiación del metal es el mismo en todos los
casos. Las densidades de sitios y constantes de unión asignadas al ligando
biótico son también las mismas, siendo la LA50 el único parámetro
organismo - dependiente que se varía.
Como se aprecia, para estos invertebrados el BLM es capaz de predecir

LC50s dentro de un factor de 2 en casi todos los casos.
Si bien ajustar la LA50 para dar cuenta de la sensibilidad de especies no es

necesariamente un enfoque mecanístico, desde un punto de vista práctico,
proporciona una manera simple de alcanzar el objetivo buscado, de poder
predecir LC50s de organismos acuáticos en un rango de condiciones de
química del agua.
Se están desarrollando enfoques mecanísticos para dar cuenta de la

sensibilidad de especie y esto puede llevar a a posteriores modificaciones
del BLM.
107
Agua de Lab Estándar Hipotética:
pH 7.8 SO44 3.4 mg/L

DOC 1.0 mg/L Cl 1.2 mg/L
Ca 11.8 mg/L Alcalinidad 43 mg/L *
Mg 5.0 mg/L
Dureza 50 mg/L *
Na 1.5 mg/L
K 0.6 mg/L
* mg/L como CaCO33
Efecto de la variación en agua de lab:

Gran parte de la variabilidad en las medidas de LC50 en que se
basa el WQC está relacionada con las características del agua
de ensayo.
Aquí examinamos el efecto de normalizar todos los resultados de

ensayos en invertebrados a un solo conjunto de características
de calidad de agua.
Las características que se muestran corresponden a un agua de

lab suave con bajo nivel de DOC.
108
Cambio en LA50 por Especie:

Agua Estándar
De Lab
Cu SMAV Normalizado
Organismo LA50 H = 50 Cu LC50
(nM/G
(nM/Gww)) (ug/L)
(ug/L) (ug/L)
(ug/L)
D. pulex 0.045 13.1 12.3
C. dubia 0.058 14.0 14.5
D. magna 0.055 13.2 14.0
H. azteca 0.24 35.4 30.7
O. mykiss 0.44 41.5 39.5
P. promelas 6.37 115. 124.
Sensibilidad de Especie relacionada con el SMAV

y la LA50.
Esta Tabla resume los valores de LA50 evaluados como

parte del análisis previamente descrito de datos para
invertebrados, más los datos para trucha arcoiris (O. mykiss)
y fathead minnow (P. promelas).
Las dos especies son relativamente insensibles a cobre en

comparación con invertebrados. La mayoría de las LA50 de
invertebrados son cerca de un orden de magnitud menores
que la LA50 de la especie más sensible de pez, la trucha.
Los valores de LC50 normalizados de agua de lab estándar

son similares a sus Valores Agudos Promedios de Especie
(SMAVs).
109
Aplicación a Otros Metales

H+
Ca+2 Superficie de
Na+
GillBranquia
Surface
(biotic
(ligandoligand)
biótico)
Competing
Cationes Cations
Competidores
Complejos
Organic
con
Ligand
Ligandos
Complexes
Orgánicos
Free
Ión Free
Ión
M - DOC Metal ion
Metálico Sitio de
Metal Unión
Binding
Metal ion
Metálico
M+2
Libre (M+2) M+2
Libre (M+2)
deSite
Metal
Inorganic
Complejos con
LigandLigandos
Inorgánicos
Complexes
M OH+
M CO3+
M Cl+
La esencia del esquema del BLM (ver arriba) fue propuesta por primera
vez por Pagenkopf (1983) como el Modelo de Interacción en Sitio de
Branquia (GSIM).
• Aquí no discutiremos elementos básicos de equilibrio químico.
Sin embargo, tales modelos no son nuevos y generalmente son
• Interacciones Metal-Ligando Inorgánico-
(Santore and Driscoll, 1995) sirve como base de los
cálculos de especiación y fue adaptado para incluir las
interacciones descritas en lo que sigue.
• Interacciones metal-materia orgánica (OM)-
• Basado en el Modelo Acuoso Húmico Windermere
(WHAM), Versión 5 (Tipping, 1994)
110
Cu BLM
10000
Fathead minnows, Lab
Fathead minnows, Terreno
+ D. pulex (CT DEP, Dunbar, 1996)
1000
CALCULADO
PREDICTED (ug/L)
LC50(ug/L)
100 +
++
+
+ +
++ +
++
LC50
+ + +
+
10
+
+
1
1 10 100 1000 10000
MEASURED
LC50 MEDIDOLC50 (ug/L)
(ug/L)
Resumen de situación actual de esfuerzos BLM:
Esta figura resume la base de datos clave del BLM de Cu que se ha analizado a la
fecha. Este trabajo fue realizado con el apoyo de la Asociación Internacional del
Cobre (ICA) en estudios que sentaron las bases del BLM.
Recientemente se ha completado la Fase II, con el auspicio de la Water Environment

Research Foundation (WERF) para refinar los componentes toxicológicos y químicos
del modelo.
La EPA está encabezando los esfuerzos para desarrollar un WQC actualizado para
Cu. Este enfoque servirá como ejemplo de cómo desarrollar WQCs actualizados para
otros metales. También están apoyando el desarrollo de la interface para el BLM.
El Instituto Europeo del Cobre (ECI) está apoyando el desarrollo de un BLM crónico
para Cu.
Estudios sobre los efectos dietarios del Cu están o bien en curso o en planificación
por parte de CDA, ICA y WERF, entre otros.
111
Ag BLM
100
Fathead Minnows, LA50 = 8.98 nmol/gw
Rainbow Trout, LA50 = 10.82 nmol/gw
L C 5 0 (µ g /L )
Daphnia magna, LA50 = 1.13 nmol/gw

Ceriodaphnia dubia (Lab.), LA50 = 0.34 nmol/gw
Ceriodaphnia dubia (Site) LA50 = 0.34 nmol/gw
P re d ic te d A g(ug/L)
10
B L MCALCULADO
1
LC50
0.1
0.1 1 10 100
Measured(ug/L)
LC50 MEDIDO Ag LC50 (µg/L)
Resumen de situación actual de esfuerzos BLMDE Ag:
Esta figura resume la base de datos clave del BLM de Ag que se ha

analizado a la fecha. Este trabajo fue realizado con el apoyo de la
Eastman Kodak Company y la International Imaging Industry Association
(IIIA). Los esfuerzos realizados en relación al BLM para plata,
similarmente al cobre, han pavimentado el camino para el desarrollo del
BLM.
La Fase II para Ag está actualmente en desarrollo, con el auspicio de la

Water Environment Research Foundation (WERF) para refinar los
componentes toxicológicos y químicos del modelo.
La EPA planea incorporar el BLM de Ag a un WQC actualizado para la plata

en los próximos años.
La IIIA está apoyando el desarrollo de un BLM crónico para Ag e

investigaciones de los efectos dietarios de la Ag. Se ha desarrollado un
modelo de balance iónico para predecir tiempo de sobrevivencia y
exposiciones a tiempo variable (Paquin et al., 2002).
112
Cd BLM
Datos de Trucha Arcoiris
10000
Davies et al, 1993

* Cusimano et al, 1986
1000
Hollis et al
(ug/L)
Cd LC50 (ug/L)
Pascoe et al
LC50 CALCULADO
Solubilidad
100
de Cd excedida
PREDICTED
*
10
*
1
*
0.1
0.1 1 10 100 1000 10000
MEASURED
LC50 MEDIDO
Cd(ug/L)
LC50 (ug/L)
Resumen de situación de esfuerzos con el BLM para Cd:
Esta figura resume la base de datos clave del BLM de Cd que se

ha analizado a la fecha. Estos estudios de Fase I se realizaron
con el apoyo de la US EPA.
El BLM de Fase I ha sido completado.
Pronto se definirán los planes para la Fase II.
Los dos puntos con LC50s medidos altos están supersaturados

con respecto a solubilidad del Cd.
113
Ni BLM: Resultados Fathead Minnow

1000
Meyer et al., 1997 (1-6g, LA50=291 nmol/g)
(mg/L) Pickering and Henderson, 1966 ( 1-2g, LA50=51 nmol/g)
Schubauer-Berigan et al., 1993 ( < 24 hr old, LA50=6.7 nmol/g)
(ug/L)
LC50
100
CALCULADO
CALCULADO
Predicted (ug/L)
Ni
10
LC50
BLM
LC50
1
1 10 100 1000
Measured
LC50MEDIDO Ni LC50 (mg/L)
MEDIDO(ug/L)
(ug/L)
LC50
Resumen de situación de esfuerzos con el BLM para Ni:
Esta figura resume la base de datos clave del BLM de Ni para

peces que se ha analizado a la fecha. Este trabajo se realizó con
el auspicio de WERF y el apoyo de la Asociación de Investigación
Ambiental de los Productores de Nïquel (NiPERA).
Los datos representan diferentes edades de los peces y se ajustó

la LA50 en cada caso (similar al ajuste para sensibilidad de
especies). Esto ilustra la importancia de usar un estadio de vida
sensible en los ensayos de roxicidad. Los resultados también
ilustran los efectos de pH y dureza.
Los estudios de Fase I para Ni se completaron en 2001.
Actualmente se están desarrollando estudios de la Fase II.
En Europa se está desarrollando un BLM crónico.

114
Ni BLM: Resultados de Invertebrados

100000
D. magna (Chapman et al, 1980)
(ug/L)(ug/L) C. dubia (Schubauer-Berigan et al., 1993)
10000
CALCULADO
LC50Predicted Ni LC50
1000
BLM
100
10
10 100 1000 10000 100000
Measured Ni LC50
LC50 MEDIDO (ug/L)(ug/L)
Resumen de situación de esfuerzos con el BLM para Ni en

invertebrados:

invertebrados que se ha analizado a la fecha. Este trabajo se
realizó con el auspicio de WERF y el apoyo de la Asociación de
Investigación Ambiental de los Productores de Nïquel (NiPERA).
Los estudios de Fase I para Ni se completaron recientemente.

115
Ni BLM: Resultados de Invertebrados

1000
Fathead Minnows, 1-6 g
Fathead Minnows, 1-2 g

100 Fathead Minnows, < 24hr old
(ug/L)(mg/L)
Daphnia magna
Predicted Ni LC50
Ceriodaphnia dubia
10
Ceriodaphnia dubia
BLMCALCULADO
1
LC50
0.1
0.01
0.01 0.1 1 10 100 1000
Measured
LC50 MEDIDO Ni LC50 (mg/L)
(ug/L)
Resumen de situación de esfuerzos con el BLM para Ni en

invertebrados:

invertebrados que se ha analizado a la fecha. Este trabajo se
realizó con el auspicio de WERF y el apoyo de la Asociación de
Investigación Ambiental de los Productores de Nïquel (NiPERA).
Los estudios de Fase I para Ni se completaron recientemente.

116
Pb BLM
1000
Schubaer-Berigan, C. dubia
Chapman D. magna
(mg / L)
Pickering and Henderson, Fathead minnow

100 Schubaer-Berigan, Fathead minnow
LC50
Predicted(ug/L)
10
CALCULADO
1
BLM
LC50
0.1
0.1 1 10 100 1000
Measured Pb(ug/L)
LC50 MEDIDO LC50 (mg / L)
Estudios del Fase I del BLM para Pb realizados en 2002.
Apoyo de la Organización Internacional de Investigación en

Plomo y Zinc (ILZRO).
Los planes para la Fase II están en desarrollo.
La EPA está realizando estudios dietarios crónicos.
Playle ha realizado estudios de acumulación y toxicidad de Pb.

117
Zn BLM
Todos los datos existentes – Trucha arcoiris
100,000
> LC50 Real Mayor
10,000 >
(ug/L)
Zn LC50(ug/L)
Zn LC50 (
CALCULADO
PREDICTED
1000
PREDICTED
LC50
100
10
10 100 1000 10,000 100,000
LC50 MEDIDOZn
MEASURED (ug/L)
LC50 (ug/L)
Resumen de situación de esfuerzos con el BLM para Zn:
Esta figura resume la base de datos clave del BLM de Zn para

trucha arcoiris que se ha analizado a la fecha. Este trabajo tuvo el
apoyo de la Organización Internacional de Investigación en Plomo
y Zinc (ILZRO).
Estudios similares en un BLM para Zn se realizan en la

Universidad de Ghent, con el apoyo de ILZRO.
Los estudios de Fase I se completaron en 2001.
Los estudios de Fase II se completaron en 2003.

118
Resumen
La sensibilidad específica tiene gran

relevancia para el desarrollo de criterios de
calidad sitio-específicos
El BLM ha sido aplicado exitosamente a
una serie de organismos con diverso grado
de sensibilidad a cobre y otros metales.
Actualmente en desarrollo versiones para
Cu, Ag, Cd, Zn, Ni y Pb.
119
Sección 6: Preguntas y
Respuestas
120
Ligando Biótico de
Toxicidad Aguda:
Ejemplos de Aplicaciones
121
Predicción de Toxicidad de Cobre en aguas

Superficiales en Chile
122
Predicción de la Toxicidad de
Cobre en Aguas Superficiales
Chilenas
123
Validación BLM: Ríos y lagos muestreados
IV Region
• Quebrada la Marqueza
• Río Elqui
V Region
• Río Hurtado
• Río Petorca
• Río Grande
• Río La Ligua
• Río Choapa
• Río Juncal
• Río Quilimarí
• Río Colorado
IX Region • Río Aconcagua
• Lago Villarica
• Lago Colico VI Region
X Region • Río Pangal y tributarios
• Lago Chapo VIII Region
• Lago Llanquihue Cuenca del Bio Bio
• Lago Puyehue • Río Itata
• Lago Ranco • Río Laja
• Río Oscuro • Río Malleco
• Río Petrohue • Salto del Indio
X Region • Río Cautín
Isla de Chiloe • Río Bio Bio
• Lago Natri • Río Pehuenco
• Lago Huillinco • Río Ranquil
• Río Huillinco • Río Llanquen
• Río Natri • Río Duqueco
• Río Butalcura
124
Daphnidos utilizados en este estudio
Daphnia Magna, Daphnia pulex, Daphnia obtusa,

USA USA Chile
125
Los
Los criterios
criterios de
de calidad
calidad de
de aguas
aguas se
se basan
basan en
en pruebas
pruebas de
de toxicidad
toxicidad
Concentración de Metal (µg/L)

0 100 200 400 800 1600
48-horas LC50 = 400 µg/L

126
Carbono Orgánico y Cobre en aguas superficiales Chilenas

10.0
8.0
DOC (mg/L)
6.0
4.0
Rios, N de Santiago 2.0

Rios, S de Santiago
Lagos, S de Santiago 0.0
20.0
15.0
Cu (ug/L)
10.0
5.0
0.0
127
Toxicidad de Cobre a Daphnidos en diferentes aguas superficiales

superficiales Chilenas
160
D. pulex
C u LC 50 (ug/L)
120
80
40
0
Rios, N de Santiago
Rios, S de Santiago
160
Lagos, S de Santiago D. magna
C u LC 50 (ug/L)
120
80
40
160
D. obtusa
C u LC 50 (ug/L)
120
80
40
0
128
Distribución de las propiedades Químicas de las aguas

Naturales estudiadas
Dureza, como mg/L CaCO3

10 300
8 A 250 B
DOC, mg/L
200
6
150
4
100
2
50
0 0
N-C S-I S-II N-C S-I S-II
25 9.0
20 C 8.5 D
Cu, ug/L
15 8.0
pH
10
7.5
5
7.0
0
6.5
N-C S-I S-II N-C S-I S-II
129
Efecto de la Materia Orgánica Disuelta y

la dureza sobre la Toxicidad de Cobre
Daphnia obtusa (Chile) Daphnia magna (USA)
160 300
140 A B D = 168
250
LC50, µg/L de Cobre

LC50, µg/L de Cobre
120
200
100
D = 42 D = 84
80 150
60
100
40
50
20 D = 42
0 0
0 1 2 3 4 5 6 0 1 2 3 4 5 6
DOC, mg/L DOC, mg/L

130
Datos de Entrada y Salida del BLM
Parámetro de
Respuesta del Modelo
calidad
Ca2+
H+
M-DOC
DOC
M-Biotic Correlación directa
OH-
Ligand con la toxicidad (LC50)
HCO3- BLM
BLM MOH-
Cl-
MHCO3-
MTotal MCl-
Biotic Ligand
131
Valores óptimos de acumulaciones letales 50% (LA50) para los distintos

distintos
Daphnidos expresados como nmoles de Cu / g de tejido húmedo
Este Trabajo Referencias
Version 1 Version 2 Version 3 Version 1 Version 2 Version 3
D. magna 0.100 3.4 8.0 0.069 11.7 14.1 (11.7-19.2)

D. obtusa 0.140 3.8 6.3 - - -
D. pulex 0.055 1.4 2.6 0.062 - -
132
Parameter/condition BLM Version 1a BLM Version 2b BLM Version 3c

Log K of Gill-Cu2+ 7.40 8.02 8.02
Log K of Gill-CuOH+ 6.20 (-1.30) 7.45 (-0.05) 7.32 (-0.18)
Log K of Gill-CuCO3 - - 7.01 (13.78)
Log K of Gill-Ca2+ 3.60 3.47 3.47
Log K of Gill-Mg2+ - 3.58 3.58
Log K of Gill-H+ 5.40 5.40 5.40
Log K of Gill-Na+ 3.00 3.19 3.19
% Humic Acids 10 0 (0.01) 0 (0.01)
% of measured DOC used 100 50 50
Log K of CuOH+ 6.48 6.48 6.48
Log K of Cu(OH)2 11.78 11.81 11.81
Log K of CuHCO3+ 14.62 12.13 12.13
Log K of CuCO3 6.75 6.77 6.77
Log K of Cu(CO3)2 2- 9.92 10.2 10.2
Log K of CuCl+ 0.4 0.2 0.2
Log K of CuSO4 2.36 2.36 2.36
a BLM Windows Interface, Version 1.0.0 (2002); www.hydroqual.com/winblm

b De Schamphelaere, K.C. & Janssen, C. R. (2002). A. Environ Sci Technol 36, 48
- 54
c De Schamphelaere KAC et al (2002). Comparative Biochemistry and Physiology C Pharmacol Toxicol.
133
Daphnia magna (USA)

Rendimiento del BLM en medios sintéticos y aguas naturales
BLM Version 1 BLM Version 2 BLM Version 3

67% Aguas Sintéticas 83% Aguas Sintéticas 67% Aguas Sintéticas
87% Aguas Naturales 90% Aguas Naturales 66% Aguas Naturales
LC50 modelado, µg/L de Cobre
1000 1000 1000

A B C
100 100 100
10 10 10
1 1 1
1 10 100 1000 1 10 100 1000 1 10 100 1000
LC50 observado, µg/L de Cobre

134
Daphnia obtusa (Chile)

Rendimiento del BLM en medios sintéticos y aguas naturales

1000 1000 1000
A B C
100 100 100
10 10 10
1 1 1
1 10 100 1000 1 10 100 1000 1 10 100 1000

135
Daphnia pulex (USA)

Rendimiento del BLM en aguas naturales

1000 1000 1000
A B C
100 100 100
10 10 10
1 1 1
1 10 100 1000 1 10 100 1000 1 10 100 1000

136
Rendimiento del BLM en aguas naturales y sintéticas

Chilenas para las tres especies de Cladoceros

1000 1000 1000
A B C
100 100 100
10 10 10
1 1 1
1 10 100 1000 1 10 100 1000 1 10 100 1000

137
Conclusiones
Los criterios de Calidad de Agua para metales deben
ser basados en metal disuelto.
El BLM es un modelo robusto que es capaz de
predecir la toxicidad de cobre en la mayoría de casos
(90%).
Previo a la adopción del modelo es necesario
validarlo con especies locales sensibles.
El modelo es muy sensible a la calidad de los
parametros de entrada.
Es necesario determinar el parametro LA50 para
cada nueva especie.
138
Agradecimientos
Germán Villavicencio
Paola Urrestarazu
Claudia Carvajal
Rodrigo Mejías
y
International Copper Association (ICA)
139
Sección 8: Aplicación de
The purpose of this section is to discuss special considerations

related to using and applying the BLM to a given site, or a given
dataset.
140
Introducción
Aplicación del BLM para generar un Criterio

de Calidad de Agua Sitio-Específico
(SSWQC)
Comparación de predicciones de BLM con

resultados de ensayos de toxicidad
El BLM es una herramienta poderosa que puede usarse para

responder muchas preguntas relacionadas con toxicidad y
biodisponibilidad del metal.
Al aplicar el modelo, lo primero que debe definirse es si será

usado para estimar biodisponibilidad del metal en un cuerpo de
agua natural, o si será usado para intentar duplicar valores
medidos de toxicidad del metal.
La distinción puede parecer sutil, pero las mediciones de

toxicidad son sólo estimaciones de la biodisponibilidad. A
menudo, el diseño experimental incluye modificaciones
voluntarias e involuntarias de la muestra de agua.
141
Primero Determine su Objetivo
Predecir concentraciones seguras o tóxicas de

un metal en un cuerpo de agua en base a
variabilidad de la calidad del agua.
Variación espacial
Variación temporal
Verificar la aplicabilidad o capacidad predictiva

del BLM para una especie, cuerpo de agua o
muestra de efluente.
Los datos que requiere recolectar dependen de su objetivo.
Así, primero debe definir el uso que le va a dar al Modelo de

Ligando Biótico.
Después, recolecte los datos apropiados para ese objetivo.
Si quiere predecir toxicidad en condiciones de terreno, debe

medir calidad de agua de las muestras.
Si quiere predecir el resultado de un ensayo en muestras, mida la

calidad del agua durante el ensayo.
Razón: La calidad del agua en el ensayo diferirá de la calidad en

terreno.
142
¿Lo Mismo o Diferente?
Agua Receptora Agua de Exposición

Aplicar el BLM al agua receptora o la de
exposición puede ser diferente debido a:
Aireación y deriva del pH

Diseño del ensayo
Modificación deliberada de muestra
Otras modificaciones de muestra
Muchos factores pueden llevar a cambios de la química de la

muestra cuando se usa en un bioensayo de toxicidad.
Es importante entender estos factores y tratar de dar cuenta de

ellos si va a usar el BLM para reproducir valores medidos de
toxicidad. La premisa del BLM es que la química importa. Por lo
tanto, cambios en la química del agua pueden también alterar las
medidas de biodisponibilidad y toxicidad que se obtengan.
Por supuesto, el BLM también puede usarse para predecir

toxicidad y biodisponibilidad en el cuerpo natural de agua antes
que sea alterado por el procedimiento de ensayo.
143
Efectos de Aireación
Muestra original puede no CO2(g) Aire
estar en equilibrio con
CO22(g) atmosférico
La aireación del agua de

exposición puede cambiar
DIC y pH de muestra
pH de muestras Agua de
dominadas por efluente Exposición
frecuentemente varía al
alza 1 unidad, incluso sin
aireación
Un cuerpo natural de agua puede estar sub- o sobre-saturado con CO2 en

relación a la concentración atmosférica. Cuando se usa una muestra en un
bioensayo de toxicidad, típicamente se la airea para proporcionar oxígeno a los
organismos. Esta aireación establecerá un nuevo equilibrio entre el CO2
disuelto en la muestra y el presente en el gas usado para airear la muestra.
Si aumenta el nivel de CO2 en la muestra, la concentración de Carbono

Inorgánico Disuelto (DIC) aumentará, resultando en un incremento en la
formación de complejos metal-carbonato (disminuyendo la biodisponibilidad).
El aumento en CO2 también reducirá el pH de la muestra. A pH más bajo,

generalmente la biodisponibilidad es mayor.
El efecto neto de aumento en DIC y baja del pH puede aumentar o disminuir la

biodisponibilidad del metal dependiendo del pH, y las concentraciones
específicas de DIC y metal en la exposición.
Si el nivel de CO2 en la muestra disminuye, la concentración de DIC disminuirá

y el pH aumentará. Como en el caso anterior, la biodisponibilidad puede
disminuir o aumentar.
144
Efectos de pH
CO2(g) Aire
Cambios de DIC también
llevan a cambios de pH
HCO33-- + H++ = H22O + CO22(g)
Notar que alcalinidad
permanece cte.
Alk = [OH
-- ] - [H++] + [HCO-3-3 ]
+ 2 [CO332-2- ] Agua de
exposición
Aumentos en DIC provocarán una disminución del pH, debido a

interacciones entre el CO2 disuelto y las moléculas de agua.
Nótese que cambios en DIC debido a aumentos o disminuciones

del CO2 no alteran la alcalinidad (el efecto sobre la alcalinidad de
cambiar el bicarbonato es compensado por el efecto opuesto de
cambiar la concentración de protones).
Por lo tanto, la alcalinidad no se puede usar para predecir el DIC

a menos que también conozca el pH de la muestra.
Como resultados de estos efectos de deriva del pH, cada vez que
se observa una diferencia entre valores de pH de terreno y lab,
es una buena señal de que cambios en el nivel de CO2 han
afectado la muestra.
145
Factores Cinéticos
Diseño de Ensayo Puede Afectar
Especiación
Reacciones Metal - NOM no son instantáneas
Diseño determina tiempo para reacciones

metal - NOM.
Estático – duración de ensayo
Estático con renovación – intervalo de
renovación
De flujo continuo – tiempo de residencia
hidráulico
NOM = Materia orgánica natural
El BLM usa una premisa de equilibrio para predecir interacciones

químicas. Esta premisa puede que no se aplique a un ensayo de
toxicidad porque a menudo el metal se agrega inmediatamente antes
de que se agreguen los organismos a la celda de exposición.
Generalmente hay poco tiempo para que se establezca equilibrio
entre metal y la materia orgánica.
El periodo de tiempo disponible para que procedan las reacciones de

formación de complejos dependerá del diseño del ensayo. Para
ensayos estáticos, estas reacciones pueden ocurrir por la duración
completa del ensayo. Los ensayos de flujo contínuo, por otra parte,
típicamente tienen un tiempo corto disponible para que ocurran estas
reacciones, que es igual al tiempo de residencia hudráulica de la
cámara de ensayo (el tiempo de residencia hidráulica será función de
la tasa de flujo y el volumen de la cámara).
146
Ensayo Estático
Concentraciones de Cu Libre en el Tiempo
1000
1000
Cobre
Cobre Total
Total Disuelto
Disuelto == 1.57E-7
1.57E-7 mol/L
mol/L == 10
10 ug/L
ug/L
L)
(nmol // L)
Libre (nmol
100
100
Cobre Libre
10
10
Cobre
Equilibrio
Equilibrio
11
00 24
24 48
48 72
72 96
96
Tiempo
Tiempo (horas)
(horas)
La cinética de formación de complejos metal-NOM fue estudiada

por Ma et al., 1999.
Aquí se muestra el cambio en CU libre en el tiempo, que se

esperaría en un bioensayo estático dada la cinética de formación
de complejos metal-NOM según Ma et al. (1999). Durante las
primeras 24 horas, la concentración de Cu libre cambia
rápidamente. El equilibrio se establece a cerca de 30 h de
empezado el ensayo. Si la duración del ensayo es 4 días (como
en este ejemplo) el organismo experimentará una concentración
al equilibrio del metal durante la mayor parte del ensayo, pero al
comienzo estará expuesto a una concentración de metal libre
mayor que la que se predice a partir de un modelo al equilibrio.
Nota: en Ma et al., los autores ignoraron la reacción inversa al

derivar su cinética. En este ejemplo la hemos incluído y re-
calculado los parámetros cinéticos.
147
Ensayo Estático con Pre-Equilibrio

1000
1000
L)
(nmol // L)
Libre (nmol
100
100
Cobre Libre
10
10
Cobre
Equilibrio
Equilibrio
Pre-equil.
Pre-equil. Duración
Duración de
de ensayo
ensayo
11
00 24
24 48
48 72
72 96
96 120
120
Tiempo
Tiempo (horas)
(horas)
Se puede usar un período de pre-equilibrio para evitar tener al

organismo expuesto a este período inicial de mayor
biodisponibilidad. En este ejemplo, el organismo experimentará
condiciones de quasi-equilibrio durante todo el ensayo.
148
Ensayo Estático con Renovación

1000
1000
L)
(nmol // L)
Libre (nmol
100
100
Cobre Libre
10
10
Cobre
Equilibrio
Equilibrio
11
00 24
24 48
48 72
72 96
96
Tiempo
Tiempo (horas)
(horas)
Los ensayos estáticos con renovación repetirán este período de

alta biodisponibilidad del metal en la cámara cada vez que se
cambie el agua.
149
Ensayo de Flujo Continuo

1000
1000
L)
(nmol // L)
Libre (nmol
100
100
Cobre
Cobre Libre
Libre con
con 11 hora
hora de
de Residencia
Residencia
Cobre Libre
10
10
Cobre
Equilibrio
Equilibrio
11
00 24
24 48
48 72
72 96
96
Tiempo
Tiempo (horas)
(horas)
Un diseño de flujo contínuo mantendrá condiciones constantes

en el tiempo. Desgraciadamente, amenos que el tiempo de
residencia hidráulica sea adecuado para alcanzar equilibrio (y
con buena mezcla antes de la cámara de exposición) estas
condiciones presentarán una estimación mucho más alta de la
biodisponibilidad que l esperada en equilibrio.
150
Ceriodaphnia Toxicidad Aguda

Efecto de Tiempo de Reacción NOM-Cu
LC50 (µg Total Cu/L)

1 h HRT
250 2 h HRT
6 h HRT
200 24 h HRT
150
100
50
0
0 5 10
DOM (mg/L)
De la Figura 3 de Kim et al. 1999.
El objetivo del estudio era determinar el efecto del período de

equilibrio NOM-Cu sobre la toxicidad aguda. La DOM fue materia
orgánica concentrada del Río Suwannee River. El cobre se dejó
equilibrar por for 1, 2, 6, y 24 h antes de introducir Ceriodaphnia.
151
Comparación de Modelo en 13
Exposiciones Estáticas
10000
L C 5 0 (u g /L ) Fathead Minnow 96h Static Exposures
Erickson et al., 1987
1000
ic te d C u (ug/L)
r e dCALCULADO
100
PLC50
10
10 100 1000 10000
Measured Cu(ug/L)
LC50 MEDIDO LC50 (ug/L)
Predicciones BLM comparadas con exposiciones estáticas:
Como ya se mostró, los valores de LC50 predichos por el modelo

se comparan favorablemente con los medidos en exposiciones
estáticas.
152
Comparación de Modelo en
Exposiciones de Flujo Continuo
10000
Fathead minnow, 96-h flowthrough exposures
Erickson et al., 1987
(ug/L)
(ug/L)
1000
Cu LC50
CALCULADO
Predicted
100
LC50
10
10 100 1000 10000
LC50 MEDIDO
Measured Cu(ug/L)
LC50 (ug/L)
Predicciones del BLM comparadas con exposiciones de flujo

contínuo:
En comparación con resultados de flujo contínuo, sin embargo,

hay claras discrepancias. Como lo indican los cálculos
cinéticos presentados, las exposiciones de este tipo con
tiempos de residencia breves generalmente tendrán
concentraciones de Cu libre en exceso de las esperadas al
equilibrio.
En este caso, los resultados de flujo contínuo son del mismo

laboratorio y con los mismos organismos que los resultados
de ensayos estáticos de la lámina anterior. La única
diferencia es el aparato experimental usado en la
exposición, y la limitaciones cinéticas resultantes que
afectan la comparación.
153
Modificación Deliberada de
Muestras
Hay razones válidas por las que un investigador
puede modificar deliberadamente la química de
una muestra
Ajustes químicos (e.g., para ver efectos de dureza

sobre toxicidad)
Dilución del efluente para simular mezclas aguas
abajo
Según lo requieran organismos (e.g., aumentar
salinidad a 18-30 ppt para Mytilus edulis)
154
Modificación Deliberada de
Muestras
96 h EC50
Fuente de Inicial Final
Sal
1 64 7
2 23 12
3 17 13
4 6 2
5 10 2
6 11 5
7 18 3
Agua Mar 12 9
En caso de aguas usadas con organismos marinos, éstas a

menudo requieren un ajuste de la salinidad para adecuarslas a la
tolerancia del organismo o las especifiaciones metodológicas del
ensayo.
Los métodos también limutan la edad de la muestra, así que los

ensayos se inician generalmente minutos o pocas horas después
del ajuste salino.
La tabla compara siete guas salinas sintéticas y una muestra de

agua de mar natural. Se analizaron químicamente los parámetros
de entrada l BLM pocas horas después y 96 horas después del
ajuste salino.
Se presentan las predicciones de toxicidad para Mytilus edulis,

demostrando un grado considerable de variabilidad entre las
fuentes de salinidad.
155
Modificación Involuntaria
Aireación y efectos de pH
Contribución NOM de alimento
Contribución NOM de secreciones de

organismos
Crecimiento de algas y bacterias en

cámaras de exposición
156
Cuantificación Inexacta de Metal
Concentraciones de metales en ambiente y

ensayo
Usar técnicas limpias para metales
Usar procedimientos QA/QC adecuados

157
Descargas de Condensador
de Aleación de Cu
Técnicas Limpias para Metales
300
(ug/L) (ug/L)
RecuperableCopper 100
10
TotalRecoverable
1 LEYENDA
Rutinario
Cobre Total
Limpio
0.1
20 10 0 -10 -20
Estuario Océano
Distancia de Batería (millas)
Datos: Battelle, 1991
Técnicas limpias
Esta lámina enfatiza la importancia de usar técnicas de análisis y muestreo

limpias para metales. El perfil espacial de Cu muestra datos del Puerto de
Nueva York. El domino espacial se extiende desde el Estuario del Río Hudson,
a la izquierda, hasta la región costera del Atlántico, a la derecha.
El perfil superior fue obtenido con métodos de muestreo y análisis rutinarios.

Los niveles de Cu disuelto superan el WQC aplicable y, contrariamente a lo
esperado, el perfil está uniformemente elevado en todo el estuario, el puerto, y
hasta las regiones costeras. Simulaciones con el modelo no permitieron dar
cuenta de estos niveles elevados.
Se pueden comparar estos datos con los obtenidos por Battelle usando
técnicas limpias de muestreo y análisis. Se aprecia una situación muy diferente.
Primero, los niveles de Cu disuelto son generalmente menores que el WQC y,
como es de esperar, hay una clara caída del Cu disuelto desde el puerto al
océano abierto. Este resultado fue consistente con resultados de simulación de
calidad de agua.
La causa de los niveles elevados es la contaminación de muestras debido a

que no se usaron técnicas limpias.
158
Descargas de Condensador
de Aleación de Cu
Niveles de Descarga versus SSWQC
LIMPIO
RUTINA
Cu DISUELTO (ug/L)
WQC AGUDO
INGESTA
DESCARGA
PERCENTIL
Evaluación de exposición para condensadores de Aleación de Cu:
Se evaluaron niveles de Cu en efluente de condensadores de aleación de

Cu en plantas de energía y de desalinización, para ver si pudieran causar
efectos ecológicos adversos. Aquí se muestran, como distribución de
probabilidades, niveles de Cu de entrada y descarga de instalaciones en
sitios de agua salada. Los bordes superior e inferior de la banda
sombreada muestran las concentraciones de Cu en la entrada y descarga,
respectivamente, estando las últimas asociadas a los puntos.
Los símbolos llenos (~percentil 40 e inferiores) corresponden alos datos

más recientes. Para cada uno de estos casos se usaron técnicas limpias.
También, se detectó una diferencia entre entrada y descarga y todos los
datos están consistentemente dentro del extremo inferior de la distribución,
por debajo del WQC agudo para Cu.
Lo contrario se aplica a los símbolos vacíos (>percentil 40). En la mayoría

la entrada es igual a la descarga, y en todos los casos los datos previos
son de estudios pre-1977 en que no se indica que se hayan usado técnicas
limpias. La igualdad entre Cu de entrada y descarga sugiere contaminación
(al igual como los datos del puerto de NY eran uniformemente altos).
159
Resumen
Importante determinar si se quiere que el
modelo estime la biodisponibilidad en un agua
natural o de laboratorio
Hay muchos factores que pueden afectar la

biodisponibilidad en agua de lab
Necesario considerar factores para usar los

mejores datos en el modelo
160
Ligando Biótico:
Requerimientos de
Análisis Químico
Nota: sección sólo de

referencia; no se
presenta en el curso
161
Introducción
Hasta ahora, hemos visto que la química del agua

juega un papel crítico en la predicción de la
biodisponibilidad y toxicidad de los metales.
Por lo tanto, la caracterización química del agua

es un aspecto crítico en la aplicación del BLM.
En esta sección resumiremos las variables de

calidad de agua más relevantes y los fundamentos
para su medición y uso.
162
Matriz de Variables de Calidad de Agua

Datos: H = Prioridad Alta M = Prioridad Media
Parámetro Ag Al Cd Cu Ni Pb Zn LDM
T/D Metal M/H M/H M/H M/H M/H M/H

M/H a
TOC/DOC M/H M/H M/H M/H M/H M/H
M/H 0.1/1.0
Ca H H H H H H H 0.5
Mg H H H H H H H 0.5
pH H H H H H H H
Alcalinidad H H H H H H H 2
Na H H H H H H H 0.5
(a) Varía con metal
Unidades de LDM mg/L

163
Matriz de Variables de Calidad de Agua

Datos: H = Prioridad Alta M = Prioridad Media
Parámetro Ag Al Cd Cu Ni Pb Zn LDM
K M M M M M M 2.0
Cl H H 0.2
Sulfuro H M H M M M
Fluoruro M
Sílice M
SO44 M M 0.2
Durezaaa M M M M M M M
(a) Usar dureza en vez de Ca and Mg.
Unidades de LDM mg/L

164
LDM y LPC
LDM: Límite de Detección del Método

Concentración más baja que puede ser
detectada por un método analítico.
Valores típicos listados en tablas previas
LPC: Límite Práctico de Cuantificación

Concentración más baja que puede ser
cuantificada por un método analítico.
165
LDM y LPC
Como regla general, el LDM debe ser al

menos entre un medio y un tercio de las
concentración mínima esperada.
Una excepción es cuando la concentración

es menor que el rango de sensibilidad del
modelo.
166
LDM y LPC
Ejemplo 1:
DOC agua de río = 3.0 mg/L
Usar LDM = 1.0 mg/L
Ejemplo 2:
DOC de agua de lab = 0.5 mg/L,
Usar LDM = 0.1 mg/L
(probablemente innecesario ir más abajo)
167
Bases y Directrices: pH
pH = - log10[H+] Alta Prioridad
La toxicidad de la mayoría de los metales es
modificada por el pH
A pH alto, aumenta la formación de hidróxidos y

carbonatos (formación de complejos)
A pH bajo, H++ pueden competir con los metales por

sitios de unión en el ligando biótico (competencia)
Las interacciones de la materia orgánica con los

metales también son modificadas por el pH
La toxicidad es afectada por especiación del metal, que es una

función del pH (formación de complejos) e.g. la distribución de
Cu2+, CUOH-, Cu(OH)2, CuHCO3-, CuCO3 & Cu:OM cambia con el
pH
La toxicidad también es afectada por el pH porque los H+

compiten con los metales por sitios de unión en el ligando biótico
(competencia)
Medir el pH en el recipiente de exposición si se va a usar el BLM

para analizar datos de lab.
Medir el pH en el terreno si se va a usar el BLM para predecir

toxicidad en un sistema natural.
Calibrar el electrodo con estándares que abarque el pH de la

muestra.
Precisión: Se requiere +/- 0,1 unidades de pH

168
Bases y Directrices: TOC/DOC

TOC/DOC Alta Prioridad
La materia orgánica natural puede unir metales
Las medidas de TOC y DOC se usan para cuantificar

NOM
La NOM reduce la biodisponibilidad y toxicidad de los

metales (formación de complejos)
Los complejos metal:NOM son a menudo la fracción

dominante de los metales en sistemas acuáticos
Carbono Orgánico Total y Disuelto

• TOC/DOC indicativos del nivel de Materia Orgánica
Disuelta (NOM)
• NOM afecta la especiación del metal y como los
complejos metal-NOM tiene biodisponibilidad
relativamente baja, NOM reduce la toxicidad
• Preferible usar DOC para evaluar LC50s disueltos y TOC
para LC50s totales
Los organismos pueden contribuir al DOC del agua
Medir DOC en el agua de exposición al inicio y final del ensayo,

especialmente en exposiciones estáticas
LDM Puede depender del tipo de agua

• Agua de lab: 0,1 – 1,0 mg/L
• Agua de río: 1,0 - 10 mg/L
169
Bases y Directrices : Alcal, DIC

Alcalinidad y DIC Alta Prioridad
La alcalinidad se usa para estimar la cantidad

de carbono inorgánico disuelto en la muestra.
El DIC incluye CO22(g), bicarbonato (HCO33--) y

carbonato (CO332-
2-) disuelto
El carbono inorgánico modifica la

biodisponibilidad del metal por la formación de
complejos inorgánicos de metal (e.g., CuCO33 yy
Cu(HCO33--)22)
La alcalinidad puede usarse para estimar el Carbono Inorgán ico Disuelto (DIC) en
la muestra.
El DIC incluye CO2(g), bicarbonato (HCO3-) y carbonato (CO32-)disueltos.
El carbono inorg´nico afecta la disponibilidad del metal por la formación de

complejos metálicos inorgánicos (e.g., CuCO3 y Cu(HCO3)2)
La alcalinidad (Capacidad Neutralizadora Acida, ANC) se mide titulando una

muestra filtrada, y se usa con el pH para calcular el DIC.
Este cálculo supone que DIC es la fuente primordial de ANC en la muestra.
Puede no ser válido si la alcalinidad es < 10 mg/L como CaCO3 o si hay otras
sustancias que contribuyen a la ANC.
Si se mide el DIC directamente, debe evitarse desgasear el CO2 acuoso de la

muestra
Recolecte la muestra en terreno
Use un recipiente de muestreo impermeable a gases
Llene el recipiente al tope (sin dejar un espacio con aire)
Si las aguas de exposición se van a usar para predecir niveles de efecto de

laboratorio recolecte las muestras separadamente.
El LDM adecuado puede depender del tipo de agua.

170
Bases y Directrices: Ca & Mg

Dureza, Ca2+ y Mg2+ Alta Prioridad
Históricamente, es sabido que la dureza mitiga la

toxicidad de los metales.
En el BLM, Ca2+
2+ y Mg2+
2+ compiten con los metales for
sitios de unión en el ligando biótico y la NOM.
Los efectos de Ca2+

2+ y Mg2+
2+ sobre la toxicidad son
diferentes, así que es mejor cuantificar ambos en vez

de la dureza total.
El análisis se puede hacer en el agua original (improbable que

difiera del agua de exposición a mnos que el procedimiento
involucre alguna manipulación).
Si se usan mediciones de dureza total, estimar las contribuciones

fraccionales de Ca y Mg a la dureza (e.g., con una razón Ca:Mg
típica de ese cuerpo de agua.)
171
Bases y Directrices:
Na+, Cl- Alta Prioridad
El Na++ también es un catión competidor.

Niveles relativamente altos de ambos en
condiciones estuarinas.
Se puede hacer el análisis en el agua original.
Cl-- es importante como ligando para algunos
metales (e.g., Ag y Cd).
Na++ y Cl-- importantes para regulación iónica.
Puede ser importante para la toxicidad y la
interpretación del modelo.
172
K+, SO4=
El BLM actual para Cu no incluye efectos

directos.
Puede ser importante para otros metales.
Utiles para los cálculos de balance de cargas.
Se puede hacer el análisis en el agua original.
El modelo de cobre incluye especies de Cl- and SO42- pero casi

no tienen efecto en la especiación de cobre, a menos que estén a
concentraciones muy altas.
La fuerza iónica puede influir la fuerza de la formación de

complejos NOM-metal.
Es buena idea incluir los aniones y cationes principales si es

posible.
Si no hay mediciones de estos iones, se pueden usar

estimaciones.
No es probable que las concentraciones de estos iones se

modifiquen en el agua de exposición (a menos que haya habido
manipulación en el procedimiento experimental).
173
Bases y Directrices: Sulfuro

Sulfuro
Las especies reducidas de sulfuro forman fuertes

complejos metálicos
Es probable que las concentraciones sean bajas
La importancia aumenta cuando las concentraciones

con efecto tóxico son bajas
Mayor importancia para metales más tóxicos
Mayor importancia para organismos sensibles
Mayor importancia para exposiciones crónicas
Las especies reducidas de azufre unen fuertemente muchos metales, y pueden

persistir en aguas óxicas.
Experimentos recientes demuestran que la formación de complejos metal-azufre

mitiga la toxicidad.
Métodos analíticos en desarrollo.
• Las mediciones de HS- pueden subestimar las especies de azufre reducido
• El Sulfuro Reactivo a Acido (ARS) midel el azufre en matrices y coloides

metálicos estables, pero sobrestima la capacidad de formación de complejos
sulfuros (e.g., datos recientes muestran ~10-30% de ARS aguas abajo de
una Planta de Tratamiento de Agua unen plata (Adams and Kramer, 1999))
Medir el ARS en agua original
• Si es bajo, no lo considere más
• Si es apreciable, puede requerir más estudio

174
Salinidad, TSS, Temperatura
Salinidad, Sólidos Suspendidos Totales (TSS)
No requeridos para el BLM

Pueden servir para interpretar resultados de
ensayos
Debe medirse la temperatura ya que puede

afectar la especiación
175
Resumen
Una caracterización química precisa es un pre-

requisito para el uso adecuado del BLM
Para decidir cómo hacer las mediciones, debe

tenerse en cuenta cómo se va a usar el modelo
No todas las mediciones químicas son

esenciales, pero toda información adicional
puede servir en la interpretación de resultados
176
Sección 10:
Demostración del BLM
177
Sitio Web BLM
Las actualizaciones y manuales de usuario

pueden bajarse desde:
www.hydroqual.com/blm
178
Demostración del BLM

Cálculos de especiación de cobre
Cálculos de toxicidad de cobre
BLM-Monte
Simulación Monte Carlo de biodisponibilidad de
cobre
Incluye mezcla de descarga con aguas arriba
179

Modo especiación
Requiere la concentración del metal además

de los demás datos de entrada
Puede usarse para calcular la fracción unida a
materia orgánica y el metal libre
Modo Toxicidad
Usado para predecir efectos tóxicos
180

Archivos de Entrada
Archivo de Parámetros
Viene con el software
Contiene información termodinámica
Especifica metal y organismo
El nuevo software Windows puede usar los archivos
distribuidos con versiones previas
Archivo de Entrada
Creado por usuario
Contiene química del agua
El nuevo software de Windows no puede usar
archivos de entrada desarrollados para versiones
previas
181

Archivos de Salida
Se almacenan en el mismo directorio que el archivo de
Entrada creado por el usuario
Tiene el mismo nombre que el archivo de entrada (con
diferente extensión)
Formato de texto, puede abrirse con Wordpad, o MS
Excel
Dos archivos de Salida con cada simulación:

Simple (*.sim)
Contiene predicción de LC50 prediction, metal libre y
orgánico
Detallado (*.det)
Contiene todas las especies químicas
182
Sección 11: Preguntas y

Respuestas
183
Sección 12:
Literatura Citada
184
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Interim Guidance on Determination and Use of Water Effect Ratios for Metals,” USEPA,
Office of Water, EPA-823-B-94-005a.
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Joint Commission, pp. 9-32.
189
Siglas (Acronismos)
Modelo del Ligando Biótico
Aq+2 – aqueous
ARS – Acid reactive sulfide
BLM – Biotic Ligand Model
CDA – Copper Development Association
C. dubia – Ceriodaphnia dubia
CHESS - Chemical Equilibrium in Soils and Solutions Model
CMC - Criteria maximum concentration
DIC – Dissolved inorganic carbon
DOC – Dissolved organic carbon
D. magna – Daphnia magna
D. pulex – Daphnia pulex
ECI - European Copper Institute
EC – Effect concentration
EC50 – Effect concentration 50%
EDTA - Ethylenediaminetetraacetic acid
FAV – Final acute value
FCV – Final chronic value
FIAM – Free Ion Activity Model
GMAV – Genus mean acute value
GSIM - Gill Site Interaction Model
gw – Grams wet weight
H. azteca – Hyallela azteca (freshwater amphipod)
HRT – Hydraulic residence time
ICA – International Copper Association
ILZRO - International Lead and Zinc Research Organization
LA – Lethal accumulation
LA50 – Lethal accumulation 50%
LC – Lethal concentration
LC50 – Lethal concentration 50%
M - Metal
M2+ - Divalent metal
MDL – Method detection limit
M. edulis – Mytilus edulis (marine/estuarine bivalve, mussel)
MP – Mile point
NiPERA - Nickel Producers Environmental Research Association
NOM – Natural organic matter
190
OC – Organic carbon
OM – Organic matter
O. mykiss – Oncorhynchus mykiss (rainbow trout)
PIMA - Photographic Imaging and Manufacturing Association
P. promelas – Pimephales promelas (fathead minnow)
PQL – Practical Quantification Limit
POTW – Publicly owned treatment works
SAB – Environmental Protection Agency Science Advisory Board
SMAV – Species mean acute value
SSWQC – Site-specific water quality criteria
TOC – Total organic carbon
TIC – Total inorganic carbon
TSS – Total suspended solids
USEPA – United States Environmental Protection Agency
WER – Water effect ratio
WERF – Water Environment Research Foundation
WHAM - Windermere Humic Aqueous Model
WQC – Water quality criteria

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Ray Arnold, Ph.D.

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