Guía de orientación para la discusión del trabajo “Association of dystrophin

and an integral membrane glycoprotein”.

1. ¿Qué metodología se utiliza para purificar a la distrofina a partir del solubilizado de

membranas de músculo esquelético?
2. En la figura 1 para seguir la purificación se utilizan dos estrategias distintas en los
paneles a/c/e y en los b/d/f, ¿cuáles son y qué información le aporta cada una?
3. En las figuras 1a y 1b se analizan el solubilizado total y el eluído de la columna de
(WGA)-Sepharosa, ¿qué diferencia hay entre la calle 1 y la calle 2 en estos dos paneles?
4. En la figura 1c y 1d se analiza la proteína adsorbida a partículas de (WGA)-Sepharosa,
a.- ¿qué diferencia hay entre esta preparación y la utilizada en los paneles 1 a y b.
b.- En la calle 1 se corrió una alícuota de la proteína adsorbida cuando se incuban partículas con
el solubilizado de membranas de músculo esquelético y en la 2 la proteína adsorbida cuando el
solubilizado se incuba con las partículas en presencia de N-acetil-D-glucosamina. ¿Para qué sirve
este tratamiento? ¿Qué diferencia hay entre las dos calles?
c.-¿Qué conclusiones obtiene a partir de estos ensayos?¿A qué proteínas corresponden las
bandas en la figura 1 c y d?
5. Explique qué es lo que se analiza en la figura 1 e y f y qué información obtiene a partir
de la tinción con Coomasie Blue y del Western Blot.
6. La fracción de distrofina aislada mediante la columna de (WGA)-Sepharosa es
posteriormente analizada por intercambio iónico, ¿para qué? Analice y explique la figura 2a y
2b. Discuta qué se sembró en cada calle.