MICROBIOLOGIA

CÓDIGO:

Componente practico

PRESENTADO A:
LICETH VIVIANA CALDERÓN M.

ENTREGADO POR:
IVAN DARIO ROMERO CONDE COD: 1075275002

UNIVERSIDAD NACIONAL ABIERTA Y A DISTANCIA UNAD

ESCUELA DE CIENCIAS AGRÍCOLAS, PECUARIAS Y DEL MEDIO AMBIENTE ECAPMA
PROGRAMA DE INGENIERÍA AMBIENTAL CCAV-NEIVA

30/10/2018
NEIVA – HUILA
 INTRODUCCIÓN

El laboratorio de Microbiología Ambiental esta regido por normas de seguridad e higiene que se debe
cumplir a cabalidad para garantizar la protección contra infecciones de los estudiantes u otro personal
que labore en estas instalaciones, así como garantizar la calidad de las técnicas y la confiabilidad de
los resultados.
Por lo tanto el Presente trabajo contiene información de la práctica de laboratorio de Microbiología
Ambiental realizado el día 21 de Abril del 2018, donde se pudo conocer e identificar sus partes y
nuevamente aplicar el manejo adecuado del microscopio, en la observación se reconocieron los
diferentes microorganismos, estructuras celulares, grupos bacterianos y sus diferentes estructuras de
tejidos.
Seguidamente se evidenciaron los pasos realizados en cada una de las prácticas las metodologías y
la discusión del resultado, las imágenes tomadas y cuestionario con los que se contrastan la imagen
obtenida en la práctica de laboratorio.
 OBJETIVOS

Objetivo general
Identificar diferentes especies de microorganismos como hongos y bacterias mediante toma de
muestras en laboratorio de agua de charco y evaluación microbiológica en alimentos. Realizando
procedimientos de siembra, coloración, tinción óptica y microscópica de estos.

Objetivos Específicos
 Aprender a manipular correctamente el microscopio óptico compuesto.
 Conocer y diferenciar las partes ópticas y mecánicas de M.O.C.
 Emplear técnicas de enfoque y de observación de Micropreparados.
 Determinar las diferencias estructurales en células bacterianas.
 Identificación de las estructuras celulares procariotas y eucariotas.
 Identificación de la estructura fúngica.
 Identificación de la fisiología de los microorganismos.
 Identificación de los diferentes Grupos de microorganismos de interés ambiental.
 Manipulación de bacterias y hongos ambientales en el laboratorio (Unidad 3).
 MATERIALES A UTILIZAR

A. POR ESTACIONES:
 Dos vasos de precipitado de 50-100 mL con 20 mL de agua destilada estéril. X5
 Agitador de vidrio o espátula. X5
 Portaobjetos y cubreobjetos. X5
 Asa bacteriológica de punta redonda. X5
 Mechero de gas. X5
 Azul de Metileno (reactivo). X5
 Microscopio de luz. X5

B. POR TODO EL GRUPO:

 Un vaso precipitado de 100 mL con 90 mL de agua destilada estéril.
 Un recipiente de plástico o vidrio con 20 mL de etanol al 70 %.
 Un recipiente de plástico o vidrio con 20 mL de hipoclorito de sodio (o clorox) al 3 %.
 Una pipeta de vidrio de 1 mL estériles.
 Azul de metileno (reactivo).
 Etanol (reactivo).
 Incubadora ajustada a 25 °C.
 Incubadora ajustada a 37 °C.
 Balanza gramera o analítica.
 Medio gramo de peptona pancreática de caseína (reactivo).
 Dos cajas de Petri con agar nutritivo (AN).
 Unas pinzas metálicas estériles.
 Láminas para cortar o bisturí.
 Dos cajas de Petri con Agar Patata Glucosa (APG).
 Embudo estéril.
 Papel filtro.
 Dos escobillones estériles.
 Agua estéril e hisopos.
 RESULTADOS
En este espacio deben consignar los resultados de la práctica

I. Estación cero 0

A. CRECIMIENTO DE MOHOS EN EL PAN

Disolución en diferentes partes del pan
Descripción de las
observaciones

Inicialmente se disolvieron 2.5 g de azúcar de

mesa en 20 mL de agua destilada,
posteriormente se adicionaron 20 gotas de
Muestra introducida en bolsa trasparente esta disolución en diferentes partes del pan
integral, para luego introducir la muestra en
una bolsa trasparente de cello hermético y por
último se llevó a una incubadora de
temperatura ambiente en un lugar oscuro
donde se dejó por 15 días para observar el
crecimiento de los mohos en el pan integral.
DIAGRAMA DE FLUJO DE OBSERVACIÓN
DE LEVADURAS
 B. OBSERVACIÓN DE LEVADURAS

Descripción de las observaciones

Inicialmente se disolvieron 2.5 g de azúcar de mesa y aproximadamente 5 g de levadura de pan en 20

mL de agua destilada donde se colocó en una incubadora durante 15 min. A 37 °C, para posteriormente
tomar una muestra de esta disolución y disponerla con un asa bacteriológica de punta redonda sobre
un portaobjetos, luego se adiciono una gota de azul de metileno dejando actuar por 3 min y se coloca
un cubreobjetos sobre la muestra, por último se observó en el microscopio las estructuras celulares de
gemas, pared y núcleo:

NÚCLEO Y PARED CELULAR

4x 10x

Núcleo: difuso, generalmente sin clorofila, y que se reproducen por bipartición. Constituyen un
grupo de microorganismos unicelulares muy arcaicos y caracterizados por la ausencia de una
membrana nuclear que delimite su núcleo; por esta razón son llamados organismos procariotas,
como el tipo celular al que pertenecen. Junto con las cianobacterias o algas cianofíceas, forman
parte del grupo de los Moneras, uno de los cinco reinos de la naturaleza.

Pared celular: Es una capa resistente, a veces rígida, porque soporta las fuerzas osmóticas y el
crecimiento, que se localiza en el exterior de la membrana plasmática en las células de las
bacterias. La pared celular protege el contenido de la célula, y da rigidez, funciona como
mediadora en todas las relaciones de la célula con el entorno y actúa como compartimiento celular.
La pared bacteriana se sitúa a continuación de la membrana celular. El componente principal y
diferenciador de la pared bacteriana es el peptidoglucano, un heteropolímero de N-
acetilglucosamina y ácido N-acetilmurámico.
DIAGRAMA DE FLUJO DE OBSERVACIÓN
DE BACTERIAS PROBIÓTICAS
 C. OBSERVACIÓN DE BACTERIAS
PROBIÓTICAS

Descripción de las observaciones

Inicialmente se tomó una gota de yogurt y se mezcló con una gota de agua destilada el cual se dispuso
con un asa bacteriológica de punta redonda sobre un portaobjetos la cual no se observa ningún cambio,
también la muestra se extiende y se seca completamente asistiéndose del calor del mechero, evitando
que se sobrecaliente la muestra, luego se cubre la muestra con etanol durante 10 s para limpiar la parte
grasa donde se dejó escurrir el alcohol y se dejó secar a temperatura ambiente; Cuando la mezcla estuvo
ceca de cubrió con dos gota de azul de metileno y se dejó actuar durante dos Min. Para que secara y
es acá donde se observaron los diferentes grupos bacterianos en el microscopio como los son los
cocos y bacilos.

COCOS
4x 10x 40x
Objetivo 4x, 10x y 40x: Se encuentra microorganismos como cocos de los grupos:

Coco: Tiene forma más o menos esférica. Algunos ocasionan enfermedades a los humanos también
es causante de enfermedades como el de la meningitis, otros resultan inocuos o incluso beneficiosos.

STAPHYLOCOCCUS: Son cocos Gram positivos. Crecen fácilmente sobre casi todos los medios
bacteriológicos, en cultivos su crecimiento es mejor en el medio sal manitol y agar sangre, esto puede
llegar a dar problemas en el corazón ó hígado tales como la pérdida de un hígado es un coco anaerobio
facultativo, esto significa que puede crecer tanto en condiciones con aire como carente de este. Tiene
importancia médica principalmente el S. aureus, y en humanos además de éste, el S. saprophiticus y el
S. epidermidis.

ESTREPTOCOCOS: Son un género de Bacterias Gram positivas, esféricas pertenecientes al filo

Firmicutes y al grupo de las bacterias ácido lácticas. Estas bacterias crecen en cadenas o pares, donde
cada división celular ocurre a lo largo de un eje. En contraste, los Gram positivosestafilococos, que se
dividen usando varios ejes, forman agrupaciones racimosas de células.
Las especies de estreptococus que producen enfermedades son:

- Estreptococos del grupo A: Streptococcus pyogenes producen amigdalitis e impétigo.

- Estreptococos del grupo B: Streptococcus agalactiae producen meningitis en neonatos y

trastornos del embarazo en la mujer.

- Neumococo: Streptococcus pneumoniae es la principal causa de neumonía adquirida en la

comunidad.

- Streptococcus viridans es una causa importante de endocarditis y de abscesos dentales.

- Streptococcus mutans causa importante de caries dental. Pertenece al grupo de

estreptococos viridans.
 COCOS Y BACILOS
100x

Objetivo 100x: Se encuentra microorganismos como bacilos del grupo:

STREPTOBACILLUS: Cualquiera de un género (Streptobacillus) de bacterias en forma de bastón

Gram-negativas no móviles en las que las células individuales a menudo se unen en una cadena;
especialmente uno (S. moniliformis) que es el agente causal de una forma de fiebre por mordedura de
rata.
 DIAGRAMA DE FLUJO DE
RECUPERACIÓN DE HONGOS
ACUÁTICOS VERDADEROS
 II. Estación 2

RECUPERACIÓN DE HONGOS
ACUÁTICOS VERDADEROS
Corte de semillas Semillas en caja de Petri

Descripción de las observaciones

Se dio inicio a esta actividad partiendo las semillas de girasol con agua destilada estéril durante
30 s, manteniéndose cerca de un mechero, posteriormente se realiza un segundo lavado con
etanol durante 30 s y rápidamente elimine el exceso con agua manteniéndose cerca de
un mechero luego se dispusieron las semillas en una caja Petri vacía y se colocó 20 mL agua de
charco, por último se incuba a temperatura ambiente en un lugar oscuro por 15 días.
 DIAGRAMA DE FLUJO DE
RECUPERACIÓN DE HONGOS
TRANSITORIOS POR FILTRACIÓN
 III. Estación 3

RECUPERACIÓN DE HONGOS
TRANSITORIOS POR FILTRACIÓN

Filtración de agua de charco en embudo y papel filtro

Descripción de las observaciones

Se dio inicio a esta actividad disponiendo el papel filtro en un embudo estéril donde permitió fluir la
muestra de agua de charco, para después partirlo cuidadosamente en dos partes, de forma que
cupiera en la caja Petri con el Agar Patata Glucosa (APG) y por último se incuba a 25 °C por
15 días.
DIAGRAMA DE FLUJO DEL AISLAMIENTO
DE BACTERIAS HABITANTES DE LA PIEL
 IV. Estación 4

AISLAMIENTO DE BACTERIAS
HABITANTES DE LA PIEL
Paso del escobillón por toda la mano Caja Petri dividida para cada mano
con Agar Nutritivo

Descripción de las observaciones

Se dio inicio a esta actividad marcando una división en la caja Petri con Agar Nutritivo (AN), luego
se humedeció un hisopo estéril en una solución de agua destilada estéril pasando este mismo por
toda la mano derecha sin lavar estando cerca de un mechero posteriormente pasándolo por la
mitad de la caja Petri después se lavó con agua y jabón la mano izquierda, realizando el mismo
procedimiento que con la mano derecha extendiendo el hisopo en la otra mitad de la caja Petri en
el medio de cultivo y por último se incubo a una temperatura de 37 °C
por 8 días.
DIAGRAMA DE FLUJO DE AISLAMIENTO
DE MICROORGANISMOS ENDÓFITOS
 V. Estación 5

AISLAMIENTO DE MICROORGANISMOS
ENDÓFITOS
Caja Petri dividida para huella de hoja Caja Petri dividida para huella de
con Agar Nutritivo hoja con Agar Pata Glucosa

Descripción de las observaciones

Se dio inicio a esta actividad marcando una división en las dos cajas Petri con Agar Nutritivo (AN)
y Agar Patata Glucosa (APG), posteriormente se le realizo un lavo a una hoja con agua destilada
por 30 s para remover el polvo y la tierra que llegara a tener, realizando un segundo lavado con
etanol al 70% (v/v) durante 30 s y rápidamente se elimina el exceso con agua, se realiza un tercer
lavado con hipoclorito de sodio al 3% (v/v) durante 30 s eliminando el exceso rápidamente con
abundante agua todo este procedimiento manteniéndose cerca de un mechero, partiendo la hoja
en 6 cortes de 1 cm x 1 cm, colocando en cada mitad de las cajas 3 impresiones de los cortes de
la hoja y dejando los cortes en la otra mitad para el aislamiento de los microorganismos endófitos
por último se incuba a una temperatura de 37 °C por 8 días.
 CONCLUSIONES
 El material que se utiliza es fácil de encontrar y el procedimiento es sencillo.
 Se realizó la identificación de los microorganismos gracias al tiñe azul de metileno nos dejó ver,
una buena abundancia de microorganismos se localizaron de inmediato, demostrando también
una correcta utilización del microscopio.
 Se observaron e identificaron estructuras celulares como gemas, pared y núcleo microscópicas.
 Se observaron e identificaron diferentes grupos bacterianos como los son los cocos y los
bacilos.
 la práctica fue de mucha ayuda para complementar la teoría y tener un conocimiento más
acertado sobre de las estructuras celulares, los grupos bacterianos y los microorganismos.
 BIBLIOGRAFIA

Bibliografía
 Biografias y Vidas. (2004). Recuperado el 27 de 04 de 2018, de nucleo:
https://www.biografiasyvidas.com/tema/bacterias.htm
 Función de vacuolas. (2016). Recuperado el 26 de 04 de 2018, de Las vacuolas son organelas
propios y únicos de las células de las plantas y algas. : http://funcionde.com/vacuolas/
 GARCIA, V. (2002). INTRODUCCIÓN A LA MICROBIOLOGÍA. Recuperado el 27 de 04 de
2018, de PARED CELULAR, NÚCLEO Y GEMAS:
https://books.google.com.co/books?id=K_ETVnqnMZIC&pg=PA109&lpg=PA109&dq=PARED+
CELULAR,+N%C3%9ACLEO+Y+GEMAS&source=bl&ots=ZhslBqoFWi&sig=rUG0VqH07i5ZV
IsPSPGg93BYSvg&hl=es&sa=X&ved=0ahUKEwjC3seZwNvaAhVqoFkKHU5GCD8Q6AEIWjA
M#v=onepage&q=PARED%20CELULAR%2C%20N
 GARCIA, V. (2201). INTRODUCCIÓN A LA MICROBIOLOGÍA. Obtenido de PARED CELULAR,
NÚCLEO Y GEMAS.
 jo. ( 2 de octubre de 2014). Bacterias, Cocos y Bacilos. Recuperado el 24 de 04 de 2018, de
Aspectos generales de las bacterias: https://es.slideshare.net/Tiiinoo/aspectos-generales-de-
las-bacterias-uii
 MARTINEZ, P. E. (30 de noviembre de 2011). BACTERIAS PATOGENAS. Recuperado el 24
de 04 de 2018, de COCOS:: http://bacterpato3b.blogspot.com.co/2011/11/cocos.html
 Merriam. (1828). Recuperado el 26 de 04 de 2018, de https://www.merriam-
webster.com/dictionary/streptobacillus