FACULTAD DE CIENCIAS AMBIENTALES

CARRERA DE INGENIERÍA AMBIENTAL

“DETERMINACIÓN DE TRIGLICÉRIDOS EN
MICROORGANISMOS DE ORIGEN LAGUNAR”

Bilbao Soto Valeria, Lloclla Gamarra Claudia, Pampacata Sanchez Romina, Ramos
Monzon Ana & Lazarte Acosta Belen Alexandra

Docente: Vélez Azañero Armando

2018
INTRODUCCIÓN

Los lìpidos son un grupo de macromolèculas orgànicas importantes para la vida, son
productoras de energìa que actúan como reserva energètica de las cèlulas y de los
organismos; ademàs tienen funciones estructurales y de transporte (Solomon,
2013). Los àcidos grasos son un grupo importante en la mayorìa de lìpidos; ya que
determinan su comportamiento, estos son àcidos carboxìlicos con cadenas
carbonadas (Audesirk, 2012). Los triglicèridos son un grupo de lìpidos simples
compuestos por un alcohol unido a tres àcidos grasos que tienen funciones de
aislamiento y almacenamiento de energìa (Mcmurry, 2012). Los lìpidos son
insolubles en agua debido a su apolaridad, pero solubles en solventes orgànicos
(Morano, 2009). En presencia de agua los lìpidos se asocian formando dos capas;
esta propiedad representa el fundamento para la formaciòn de las membranas
celulares (Cervantes & Hernández, 2015).

La eutrofizaciòn es el proceso de cambio de un estado tròfico a otro de nivel

superior por adiciòn de nutrientes alterando las caracterìsticas fisicoquìmicas
iniciales del cuerpo de agua; dicho proceso es acelerado por actividades
antropogènicas y evidenciado por el aumento desmesurado poblaciones de
fitoplancton, algas asociadas y macrofitas (Villaseñor, 2001). La agricultura,
actividad base para la actual supervivencia humana, es uno de los principales
factores de la eutrofizaciòn de aguas superficiales (FAO & Ongley, 1997). Las
lagunas costeras, que ocupan aproximadamente el 14% de la zona costera del
planeta (Mitsch & Gosselink, 1993; Nichols & Allen, 1981), son los cuerpos de agua
màs afectados (Zouiten, 2012), generando grandes pèrdidas por la modificaciòn de
las especies ìcticas, mortandad de peces, impedimento para la navegaciòn,etc
(Ledesma, et al, 2013).

El objetivo del presente trabajo fue realizar la extracciòn de triglicèridos en

microorganismos de origen lagunar para la determinaciòn cuantitativa de
triglicèridos por mètodos colorimètricos y determinar el grado de eutrofizaciòn del
cuerpo de agua.
MÉTODOS Y MATERIALES

Preparación de la muestra

Se identificó una laguna contaminada y se extrajo un volumen aproximado de 1.5 L

de agua de una zona ubicada a un metro de la orilla con ayuda de un cucharon de
muestreo. Se colocó un litro de la muestra en un tubo Imhoff, 12 horas previas al
inicio del experimento.

Luego de las 12 horas, con la ayuda de una pipeta de 5 mL, se retiró el agua hasta
dejar un aproximado de 10 mL y tratando de no suspender la muestra; posterior a
esto, el precipitado se añadió a tubos de centrífuga de 15 mL. Antes de pasar al
centrifugado se pesaron los tubos obtenidos y se corrigieron los pesos desiguales.
Se centrifugó a 3000RPM durante 10 minutos, al término se eliminó el
sobrenadante.
Determinación cuantitativa de la muestra
Para la determinación cuantitativa, se le añadió 2 mL de agua destilada al
precipitado y se homogeneizó; luego se añadió 2 mL de Metanol y se agitó por dos
minutos, seguido a esto se añadió cloroformo y se agitó por dos minutos, luego se
añadió 2 mL extra de cloroformo, se homogeneizó y se dejó reposar durante de un
minuto, por último añadimos 2 mL de agua destilada, homogeneizar y dejamos
reposar durante un minuto, luego se llevó a centrifugar el contenido a 3000RPM
durante 15 minutos. Al término se extrajo 2 mL de la zona basal del tubo y se colocó
y se incubó por 5.
Por último se realizó la medición con el espectrofotómetro, se colocó un tubo con la
muestra con el uso de una micropipeta de 100 um, uno con estándar de
triglicéridos, y otro tubo con el blanco.
Para el análisis estadístico, en relación a la laguna control, se trabajó con
programas de T-STUDENT y SPSS.

RESULTADOS

Experiencia Nº1
Las absorbancias obtenidas por los diferentes grupos de laboratorio fueron evaluadas para
determinar posteriormente la concentración de triglicéridos, además se tomó nota de la
concentración de oxígeno disuelto y la temperatura que presentaba la laguna de estudio tal
y como muestra la tabla 1. Todas las baterías de tubo fueron analizadas con un blanco y un
estándar, este último de concentración ya conocida, 200 mg/dL. La longitud de onda
empleada en la práctica fue de 520 nm. No se observan similitudes exactas en los valores
de concentración obtenidos por cada grupo, pero sí presentan un incremento y disminución.
los datos obtenidos en ambos grupos fueron tomados como repeticiones para el análisis

Tabla 1. Concentración de triglicéridos, oxígeno disuelto y temperatura de la laguna

contaminada.

[Trigliceridos] [Oxigeno Disuelto] Temperatura

mg/ml ppm °C

0.021985695 5.99 21.4

0.184435553 5.8 21.4

0.002442855 6.64 21.2

0.122549893 6.14 21.3

0.162857 5.99 21.4

0.10911419 5.86 21.4

0.178735558 6.64 21.6

0.274006903 9.39 23.6

0.08631421 9.36 23.5

0.098528485 8.53 23.7

Experiencia Nº 2.

Para poder ejecutar el análisis estadístico comparativo se tomó en cuenta los resultados de
la concentraciones obtenidos anteriormente (Tabla 1) y los datos de la Laguna control tal y
como se expresan en la Tabla 2. El ecosistema control, brindado por el profesor, posee las
mismas condiciones que la laguna contaminada evaluada en la práctica, y solo presenta 5
repeticiones de los 3 factores de estudio, concentración de triglicéridos, oxígenos disuelto y
la temperatura

Tabla 2. Concentración de triglicéridos, oxígeno disuelto y temperatura de la Laguna Control

[Triglicéridos] [Oxígeno Disuelto ] Temperatura

mg/ mL ppm °C

0.022 12 20

0.0215 11,5 20.1

0.023 11,9 20.5

0.026 11,5 21

0.022 12.1 21.9

Experiencia Nº3
Las comparaciones estadísticas realizada de la concentración de triglicéridos, oxígeno
disuelto y la temperatura entre la laguna contaminada y la laguna control arrojó los valores
de varianzas para cada variable Tabla 3. El valor de la comparación de temperaturas de
ambos lagos resultó cercana pero para el caso de las de concentración de triglicéridos y
oxígeno presentaron una diferencia significativa.

Tabla 3. Comparación estadística de las varianzas de concentración de triglicéridos,

concentración de oxígeno disuelto y temperatura.
Prueba de Levene para
la igualdad de varianzas
 F Sig.

Triglicéridos Se han asumido varianzas 9,605 ,000

iguales

No se han asumido
varianzas iguales

Oxígeno Disuelto Se han asumido varianzas 47,595 ,000

iguales

No se han asumido
varianzas iguales

Temperatura Se han asumido varianzas 1,608 ,240

iguales

No se han asumido
varianzas iguales

Experiencia Nº4
Con los datos obtenidos de la media y varianzas de ambas lagunas se establecieron
diagramas de cajas y bigotes de concentración de triglicéridos, oxígeno disuelto y la
temperatura entre la laguna contaminada y la laguna control. En la laguna contaminada, hay
mayor concentración de triglicéridos, sin embargo, en la comparación con la laguna control,
arrojan resultados muy alejados tal y como expresa la Figura 1, de igual modo se observa
el resultado de la Figura 2 para el factor concentración de oxígeno disuelto, este último en la
laguna control tiene una diferencia significativa con la laguna contaminada, ya que tiene
menor cantidad de oxígeno. Para el caso de la temperatura no presenta mayor varianza y
,los resultados de la Figura 3 se muestran cercanos, están en un promedio de valores.
 Fig. 1.Diagrama del Test comparativo de la concentración de triglicéridos entre la laguna
contaminada de la UCSUR y la laguna control

Fig. 2. Diagrama del Test comparativo de la concentración de Oxígeno Disuelto entre la Laguna
contaminada de la UCSUR y la Laguna contro

Fig. 3. Diagrama del Test comparativo de la temperatura entre la Laguna contaminada de la

UCSUR y la Laguna control.
DISCUSIÓN

Para la actividad Nº1 para el estudio del factor concentración de triglicéridos, que son
lípidos empleados para el almacenamiento de energía en depósitos de grasas,
generalmente dentro de células especiales rodeadas por una membrana fosfolipídica y una
red de colágeno relativamente débil. Los triglicéridos son a menudo denominados depósitos
de grasa (Simopoulos et al., 1991). .En el análisis estadístico comparativo se determinó una
varianza significativa entre la laguna contaminada y la laguna control, una concentración
mayor de triglicéridos presente en lagunas y embalses neotropicales es un potencializando
para el crecimiento y desarrollo de especies, como algas, bacterias que limitan el manejo
de adecuado de especies, la cantidad de gases disueltas en el ecosistema G. Roldán.
(1992).
La presencia de estos compuestos orgánicos naturales a gran escala tiene propiedades
tensoactivas “surfactantes” similares a los jabones, influyen por medio de la tensión
superficial en la superficie de contacto entre dos fases de este. En función de su mayor o
menor dispersión en agua, y su mayor o menor estabilización de las micelas o coloides
Yamane T. (1987). Muchos autores establecen a los triglicéridos como con bio-tensoactivo
los cuales muestran un potencial mayor sobre los tensoactivos químicos para aplicaciones a
nivel industrial y ambiental; el primero de ellos es su inocuidad con el ambiente asociada a
una toxicidad prácticamente nula y a una fácil biotransformación Abalos A., Pinazo A.,
Infante M.R., Casals M.E., García F. y Manresa A. (2001). La temperatura también es un
factor clave que incide directamente en la solubilidad de los tensoactivos en soluciones
acuosas, y cuyo efecto ha sido observado principalmente en soluciones micelares de
tensoactivos no iónicos (Timar–Balazsy e Eastop 1998).

Para la actividad Nº2 sobre el factor de concentración de oxígeno disuelto en la laguna

contaminada y la laguna control estudios anteriores demostraron que las lagunas con un
bajo porcentaje de oxígeno disuelto y limitada biodiversidad de organismos (Perez C, Ana y
Rodrigue, Alexis, 2008)
El oxígeno disuelto determina si en los procesos de degradación dominan los organismos
aerobios o los anaerobios, lo que marca la capa agua de las lagunas tropicales de
inundación cidad del agua para llevar a cabo procesos de autopurificación. Además, si su
concentración es muy baja contribuye a que los organismos sean más susceptibles al
envenenamiento con metales pesados y plaguicidas (Gaunt y Barker 2000).

A partir de los datos obtenidos, se observó que la laguna control presenta mayor
concentración de oxígeno disuelto por lo cual, en comparación a la laguna contaminada, por
lo cual se evidencia la existencia de procesos de eutrofización, debido a que existe una
tendencia en la sobresaturación en oxígeno de las aguas. (José Montalvo, Ileana García,
Sandra Loza, Santa C. Esponda, María E. César , Roberto González de Zaya y Lyanis
Hernández, 2008)

Además, el oxígeno disuelto también depende de la temperatura (Evelyn Peña, 2007).

Aguas más cálidas son capaces de disolver menores cantidades de oxígeno. Por esto, una
descarga de agua caliente puede significar la disminución del OD a niveles por debajo del
límite necesario para algunas formas de vida, como se observa en los datos obtenidos
donde la laguna estudiada presenta mayor temperatura y menor presencia de OD.
(Goyenola, G., 2007)

La actividad Nº3 que plantea el factor temperatura del agua de la laguna, la cual se
establece por la radiación en las capas superiores del líquido, estando ligada a la energía
cinética de sus moléculas Bonilla, M., & Guillot, G. (2003). Para ambos ecosistemas
estudiados presentan una similitud en cuanto a sus valores de varianza y media, según el
Test- comparativo estadístico, pero realizando un análisis interno de cada una de ellas
presenta una variabilidad, que no es significa, pero esto puede depender del terreno que
drenan, la naturaleza de las rocas, la profundidad de la surgencia y fenómenos magmáticos
que puedan existir Gunkel, G. (2003).
Sin embargo las variaciones de temperatura afectan a la solubilidad de sales y gases en
agua y en general a todas sus propiedades, tanto químicas como a su comportamiento
microbiológico Sierra, C. A. (2011). Es necesario resaltar que en la temperatura de las
aguas profundas de embalses y lagos de nuestras latitudes experimentan una secuencia
cíclica caracterizada por dos periodos: (A) uno de mezcla térmica con temperatura similar
en la profundidad, y (B) otros de estratificación térmica con aguas cálidas en superficie y
más frías en el fondo e imposibilidad de mezcla vertical en capas de agua Aguirre, N.
(1994).
Fuentes anteriores determinan que la estratificación térmica en los lagos crea diferencias de
densidad que tienen un papel importante en la regulación de la mezcla vertical, y está a su
vez regula la distribución de los iones químicos y de las partículas en suspensión, incluido el
fitoplancton, con respecto a la profundidad. Debido a la atenuación relativamente rápida de
la luz en profundidad, la fotosíntesis se realiza solamente en las aguas superficiales
Richerson (1987). Además las poblaciones planctónicas pueden mezclarse tan
profundamente que quedan limitadas por los bajos niveles de luz; y normalmente, la
producción es más elevada en períodos de estratificación baja o justo después de un
período de mezcla importante cuando se restablece la estratificación HUTCHINSON y
LOFFLER (1956). De esta manera se considera el factor hidroclimatológico más importante
que dirige los procesos biológicos en los ecosistemas TALLING, (1969) & BAXTER (1965).

CUESTIONARIO
¿Cuáles son las ventajas energéticas de los lípidos frente a moléculas como los
carbohidratos y proteínas?
Las ventajas energéticas de los lípidos es almacenamiento de energia mas importante de la
velila en forma de triglicéridos; ya que estos son los principales sustratos energéticos,
almacenados en el citosol de las células del tejido adiposo y en la membrana de la célula
vegetal o organelas como cloroplasto o plastidios( JR Wagner y Cuellas, 2011; Buchanan,
Gruissmen y Jones, 2000)

¿Cuál es la importancia de los Sulfolípidos y Galactolípidos en las plantas?

Los sulfolipidos y galactolipidos son lipidos que constituyen la membrana del tilacoides. Los
galactolípidos constituyen el 80% de los glicerolípidos de la membrana, además estos
galactolípidos tienen un alto contenido de ácidos grasos poliinsaturados, como el ácido
linoleico, y este alto contenido de ácidos grasos da un gran fluidez a la membrana tilacoidal
(J. AZCÓN-BIETO y M. TALÓN, 2013)

¿Por qué los esfingolípidos pueden comportarse como fosfolípidos y glucolípidos?

Esfingolípidos son los lípidos de membrana que incluyen en su estructura las denominadas
bases esfingoides. Estos se pueden comportar como fosfolipidos porque compoenen un
grupo de cabeza polar y dos colas no polares. El núcleo de los esfingolípidos es la larga
cadena de aminoácidos de alcohol, la esfingosina.. Esfingolípidos son componentes de
todas las membranas pero son particularmente abundantes en la vaina de mielina. Por otra
parte, estos constituyen la mayoría de los denominados glucolípidos de las membranas, es
decir, lípidos que poseen uno o más azúcares unidos formando parte de su zona hidrofilica.(
Sabán, RJ, 2009)

¿Dónde se encuentran principalmente los triglicéridos en plantas y animales?

En las plantas los lípidos se encuentran en las membranas celulares como glicolípidos y
fosfolípidos, y como triacilglicéridos, los últimos como sustancias de reserva, en cuerpos
oleosos (esferosomas) en las semillas. En las membranas de los cloroplastos y en los
plastidios de los tejidos no fotosintéticos. (García Mateos, 2008)
En los animales, los triglicéridos se sintetizan en el retículo endoplasmático de las células
del organismo, pero principalmente en el hígado; se encuentran almacenados en células del
tejido adiposo, en mínima proporción se almacenan en células del músculo esquelético y
cardiaco. (Carbajal, A., 2008)

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