CRECIMIENTO BACTERIANO

INTEGRANTES:

 ANCHIRAICO CRUZ, María de Jesús

 ARTEAGA PONCE, Carlos Alberto.
 ESTELA ORIHUELA, Lukas Leonardo.
 GONZALES SAAVEDRA, Andree.
 LLONTOP RELUZ, Alex Jeancarlos.
 INTRODUCCIÓN

La célula bacteriana es esencialmente una maquinaria de síntesis capaz de duplicarse a

sí misma. El proceso de síntesis para el crecimiento bacteriano involucra unas 2000
reacciones químicas de una amplia variedad. Una vez sintetizados los polímeros, el
crecimiento continúa con el ensamblaje y formación de nuevas estructuras celulares
que finalizan con la división en dos células hijas. En una medio apropiada física y
nutricionalmente, un cultivo se reproduce continuamente como células vegetativas, los
nutrientes absorbidos y metabolizados permiten crecer al microorganismo.
CONCEPTOS BÁSICOS

a) Crecimiento

Es definido como un incremento ordenado de todos los constituyentes y estructura celular. En

muchos microorganismos, este incremento continúa hasta que la célula se divide en dos
nuevas células: Fisión binaria El crecimiento microbiano conlleva usualmente a un incremento
en el número de células. Es importante distinguir entre el crecimiento individual de células y
el crecimiento de poblaciones de células:

 Crecimiento individual

Es el incremento en el tamaño y peso y es usualmente un preludio a la división celular.

 Crecimiento poblacional

Es el incremento en el número de células como una consecuencia del crecimiento y división

celular.

b) Tasa de crecimiento

Es el cambio del número de células o masa por unidad de tiempo.

c) Generación

Intervalo para la formación de dos células provenientes de una.

d) Tiempo de generación

Tiempo que tarda una población en duplicarse. Se puede definir también como la cantidad de
tiempo requerida para completar un ciclo de división.

FACTORES QUE INFLUYEN EN EL CRECIMIENTO

 Factores externos
 Condiciones ambientales o culturales: pH, T°, Aw, O2, CO2
 Condiciones nutricionales: Tasa C/N 10:1, 12:1
 Factores internos
 Capacidad metabólica
MEDIDA DEL CRECIMIENTO MICROBIANO

Se mide por cambios sucesivos en el número de células o por el peso de la masa de las células.
Existen varios métodos para contar las células o estimar la masa de éstas.

A) Recuento de células

1) Conteo de células al microscopio

Se emplea un dispositivo graduado con 25 cuadrados cuyo volumen y área es conocido. Ej.:
Cámara de Petroff-Hausser, cámara de Neubauer, hemocitómetro.

Limitaciones:

- Es muy tedioso, no es práctico para uun gran número de muestras.

- No es muy sensible, se necesitan al menos 106 bact/ml para que sean observadas al
microscopio.

- No distinguen células vivas de muertas.

2) Conteo de células viables

Una célula viable es definida como aquélla que es capaz de dividirse y formar una colonia en el
medio de cultivo. El conteo en placas es el método más utilizado. Pueden ser:

 Diseminación en placa (siembra en placa por extensión)

Se asume que cada colonia surgió de una simple célula, contando el número de colonias uno
puede calcular el número de células viables en la muestra.

 Método de vaciado en placa

B) Medida de la masa celular

En muchos estudios es necesario determinar el peso de las células más que el número.

1) Peso seco

Se determina el peso seco o peso húmedo de una alícuota de la población separada por
centrifugación. El peso seco es por lo general el 20-25 % del peso húmedo.

2) Turbidimetría

A través de un colorímetro o espectrofotómetro midiendo la turbidez en unidades de

absorbancia. Debe prepararse curva estándar para cada organismo estudiado.
CICLO DEL CRECIMIENTO POBLACIONAL

Si analizamos el crecimiento microbiano en el tiempo, éste describe una típica curva de

crecimiento que puede ser dividida en fases distinguibles. La curva de crecimiento puede
dividirse en diversas fases: fase lag, fase exponencial, fase estacionaria y fase de muerte.

a) Fase lag o de retraso

Cuando una población microbiana es inoculada en medio fresco, el crecimiento generalmente

no principia de inmediato sino después de un cierto tiempo, llamado fase lag que puede ser
breve o largo, dependiendo de las condiciones. Si un cultivo que crece exponencialmente es
inoculado al mismo medio bajo las mismas condiciones de crecimiento no se observa la fase
lag y el crecimiento exponencial continúa a la misma velocidad. Sin embargo, si el inóculo se
toma de un cultivo viejo (fase estacionaria) y se inocula en el mismo medio, generalmente se
presenta la fase lag, aún cuando las células del inóculo estén vivas.

Esto se debe a que las células generalmente agotan diferentes coenzimas esenciales u otros
constituyentes celulares y se requiere de cierto tiempo para su resíntesis. Un retraso también
se presenta cuando el inóculo está formado por células dañadas (pero, no muertas) por
tratamientos con calor, radiación o sustancias químicas, debido al tiempo necesario para que
las células puedan reparar dicho daño. También se observa cuando una población se transfiere
de un medio de cultivo rico a uno pobre. Esto sucede debido a que para que continúe el
crecimiento en un medio de cultivo en particular, es necesario que las células tengan un
complemento íntegro de enzimas para la síntesis de los metabolitos esenciales que no están
presentes en dicho medio.

Cuando se les transfiere a un medio diferente, se requiere cierto tiempo para la síntesis de
nuevas enzimas Es una fase de preparación y adaptación al medio, su duración depende del
medio de cultivo y el estado fisiológico de las células vivas.

b) Fase exponencial

Es una consecuencia del hecho de que cada célula se divide para formar dos células, cada una
de las cuales también se divide para formar dos células más y así sucesivamente. La mayor
parte de los organismos unicelulares crecen exponencialmente. La velocidad de crecimiento
exponencial varía mucho de un organismo a otro. Por ejemplo: Salmonella typhi crece muy
rápidamente en cultivo, con un tiempo de generación de 20 – 30 ‘, Mycobacterium
tuberculosis, crece muy lentamente, con sólo una o dos duplicaciones por día. Las condiciones
ambientales, T°, composición del medio de cultivo, afectan a la velocidad de crecimiento
exponencial así como las características del microorganismo.

En general, las bacterias crecen con mayor rapidez que los organismos eucariotas y los
eucariotas pequeños se desarrollan más aprisa que los grandes Cada célula que se divide en
dos. La tasa de crecimiento es exponencial.
c) Fase estacionaria

El crecimiento exponencial se detiene, los nutrientes indispensables se agotan, no hay

incremento o decremento en el número de células o masa, hay limitación de nutrientes y
acumulación de sustancias tóxicas. Los microorganismos son fisiológicamente activos y viables.
En un sistema cerrado no se puede llevar a cabo indefinidamente el crecimiento exponencial

d) Fase de muerte

Si la incubación continúa después que una población alcanza la fase estacionaria, las células
pueden seguir vivas y continuar metabolizando, pero lo más probable es que mueran. Si esto
último sucede, la población se encuentra en la fase de muerte. Durante esta fase, el conteo
microscópico directo puede permanecer constante pero la viabilidad disminuye lentamente.

En algunos casos, la muerte se acompaña por lisis celular, dando lugar a una disminución del
conteo de viabilidad.

EFECTO DE LA CONCENTRACIÓN DE NUTRIENTES

La concentración de nutrientes puede afectar tanto a la velocidad de crecimiento como al

rendimiento del crecimiento de un microorganismo. A concentraciones muy bajas de
nutrientes, la velocidad de crecimiento se reduce, mientras que a niveles moderados y altos de
nutrientes llega a ser máxima. Si la concentración aumenta aún más la tasa de crecimiento no
se modifica La dependencia de la tasa de crecimiento con la concentración de nutrientes fue
descrita por J. Monod en 1950 y recuerda la cinética enzimática establecida por la ecuación de
Michaelis & Menten. La concentración de nutrientes afecta la tasa de crecimiento microbiano y
el rendimiento en masa de los microorganismos. A una tasa máxima de crecimiento, el
incremento en la concentración de nutrientes da lugar a un aumento en la biomasa total a
cosechar.

CULTIVO EN LOTE (BATCH)

Es el crecimiento de microorganismos en un volumen fijo de nutrientes que continuamente es

alterado hasta su agotamiento por el crecimiento. Se realiza sin intercambio de materia con los
alrededores. Este sistema ofrece como principal característica su simpleza, tanto desde el
punto de vista de equipo necesario como de su operación. Al mismo tiempo, esta modalidad
de cultivo presenta limitaciones, como la falta de control sobre diversos parámetros del cultivo
y el hecho que las células se desarrollan en un estado fisiológico poco definido y cambiante.
CULTIVO CONTINUO

Es un sistema de flujo de volumen constante al que se le agrega continuamente medio y del

cual sale un dispositivo que permite la eliminación constante del medio excedente. Puesto que
un sistema de este tipo se encuentra en equilibrio, el número de células y su estado nutritivo
permanecen también constantes, considerándose entonces que el sistema se encuentra en un
estado estable. El dispositivo más frecuente para cultivo continuo es el llamado quimiostato.

 QUIMIOSTATO

Es el dispositivo más comúnmente usado para cultivo continuo. Su diseño y manejo permite el
control de la densidad de la población y de la tasa de crecimiento del cultivo. Consiste
básicamente en un tanque agitado que opera con dos elementos de control: la tasa de flujo y la
concentración de un nutriente limitante tal como la fuente carbonada o nitrogenada. Los
demás nutrientes en el medio se encuentran en exceso y junto al nutriente esencial
determinado como factor limitante son aportados al tanque continuamente desde un
reservorio, al mismo tiempo que se saca del recipiente el exceso de organismos y de medio.

En el quimiostato, la tasa de crecimiento se controla por la tasa de flujo o la tasa de dilución

(velocidad a la que se bombea el medio en el tiempo), mientras que la densidad de la
población está controlada por la concentración del nutriente limitante. Si la tasa de dilución se
incrementa y la concentración de nutrientes es constante, la densidad de la población es
constante y la tasa de crecimiento se elevará. El nutriente limitante será completamente usado
en estas condiciones. Si la tasa de dilución se eleva muy alta, los microorganismos pueden ser
removidos en su totalidad fuera del recipiente antes de que se reproduzcan dado que la
velocidad de flujo superaría a la velocidad de crecimiento. Cuando el sistema está en equilibrio,
el número de células (densidad de la población) y el estado nutricional permanecen
constantes, a esto se le conoce como “estado estable” o “estado sostenido”.

CRECIMIENTO DIÁUXICO

El crecimiento Diáuxico es un tipo crecimiento microbiano bifásico que tiene lugar

cuando hay presentes dos sustratos diferentes que pueden ser utilizados como fuente
de carbono. En este tipo de crecimiento microbiano se observa una curva de
crecimiento bifásica debido a la utilización secuencial distintas fuentes de carbono. El
metabolismo del organismo es selectivo para uno de los sustratos y cuando la agota,
comienza a metabolizar el otro. El crecimiento Diáuxico en los microorganismos es una
consecuencia de la represión por catabolito, una vez agotada esta primera fuente de
energía cesa temporalmente el crecimiento y luego continúa creciendo utilizando la
otra fuente de energía.

Represión por catabolito

En este tipo de represión, la síntesis de diversas enzimas no relacionadas, es inhibida
cuando las células crecen en un medio que contiene glucosa. La represión por
catabolito ha sido también llamada EFECTO GLUCOSA, por haber sido la glucosa la
primera sustancia con la cual se observó este tipo de represión.
Proceso del Crecimiento Diáuxico

Se da lugar cuando un microorganismo en un medio que contiene dos fuentes de

energía: glucosa y lactosa. La enzima β-galactosidasa, responsable de la fermentación
de la lactosa, es inducible, pero su síntesis está sometida a la represión por catabolito.
De esta manera, cuando hay glucosa en el medio, la β- galactosidasa no es sintetizada y
el organismo crece sólo a expensas de la glucosa. Cuando se agota la glucosa, cesa la
represión por catabolito y después de un período de latencia, se sintetiza la β-
galactosidasa y el microorganismo puede continuar creciendo, utilizando la lactosa
como fuente de energía.

Otros tipos de sustratos:

• Mezcla etanol metanol

• Mezcla glicerol-metanol

• Mezclas derivadas del carbono.

Mecanismo de Acción de la Represión

La ARN polimerasa inicia la transcripción del ADN uniéndose al promotor, sin embargo
en el caso de las enzimas represibles por catabolito, esta unión es estable sólo cuando
otra proteína llamada Proteína Activadora del Catabolito(CAP) o Proteína Activadora
del Gen se une también al promotor. Esta proteína es alostérica (Además de generar
fuerza mecánica, las proteínas alostéricas pueden utilizar la energía de la hidrólisis del
ATP para realizar otras formas de trabajo, como el bombeo específico de iones al
interior o al exterior de la célula) y aparentemente lo que le confiere a ella la
configuración complementaria a la del promotor para que se pueda unir a él, es su
reacción con el monofosfato de adenosina cíclico (AMP cíclico).

En sentido general la represión por catabolito está mediada por la concentración

intracelular de monofosfato cíclico de adenosina (AMPc), concentración que es
inversamente proporcional a la concentración de glucosa en el medio de cultivo.
Cuando la célula crece en presencia de glucosa el nivel intracelular de AMPc es bajo, a
causa de que la glucosa inhibe la actividad adenilciclasa (E.C.4.6.1.1). Cuando la glucosa
se consume totalmente aumenta la concentración de AMPc rápidamente y forma un
complejo con la .proteína receptora de AMPc., complejo que actúa sobre el promotor
AOX1, induciendo la utilización de otras fuentes de carbono.