PROBLEMAS DE CROMATOGRAFÍA

1. Después de la administración oral de griseofulvina (PM 352.77) a un paciente, se

cuantificó su metabolito en orina (desmetilgriseofulvina), mediante el método de
cromatografía de líquidos.
Tratamiento de la muestra: Se tomaron 3 mL de orina y se extrajeron con 10 mL de
butanol-benceno 1:1. El extracto se evaporó a sequedad y el residuo se reconstituyó en
0.4 mL de una solución metanólica de estándar interno de 4(m-hidroxifenil) 1-isopropil 7
metil 2(h) quinazolinona (0.25 mg/mL), inyectando 5 mcL de esta solución al
cromatógrafo.
Solución estándar. Se preparó una solución metanólica conteniendo 0.25 mg/mL de
estándar interno y 0.5 mcL de estándar de desmetilgriseofulvina, inyectando 5 mcL al
cromatógrafo.
Condiciones cromatográficas:
A: Heptano
B: Metanol:isopropanol 1:1
Utilizando gradiente desde 100% de A has 6 % de B, detector de UV a 254 nm.

a) Calcular la concentración de desmetilgriseofulvina en cada mililitro de la muestra de

orina. (resolver por altura)
b) Calcular la cantidad total de desmetilgriseofulvina eliminados en los 200 mL de orina.
c) Explicar qué es un estándar interno y cuál es su función.
d) Explicar en qué consiste un sistema cromatográfico de gradiente.
Cromatograma A: estándar interno altura 7.6 cm, desmetilgriseofulvina 8.3 cm.
Cromatograma B: estándar interno altura 8.3 cm, desmetilgriseofulvina 9.1 cm.
Griseofulvina 2.4 cm.

2. El peso de 20 comprimidos de diazepam (PM 284.74) fue de 3 g. Después de pulverizarlos,

se tomo una muestra de 152 mg de polvo y se colocó en un matraz aforado de 100 mL, se
agregaron 50 mL de metanol:agua 6:4 se agitó por 10 min y se aforó. Se filtró, del filtrado
se tomó 1 mL y se aforó a 10 mL con solución de 2.5 mcg/mL de estándar interno
(nitrazepam) en metanol:agua. Se inyectaron 25 mcL de esta solución al cromatógrafo de
líquidos. Se preparó una solución estándar de diazepam de pureza 99.8 %, pesando 10 mg
en un matraz de 100 mL, disolviendoy aforando con metanol:agua. De esta solución se
tomó 1 mL y se diluyó a 10 mL con solución de estándar interno. El tiempo de retención
del diazepam fue de 7.62 min y el del nitrazepam de 3.06 min.

a) Calcular el contenido de diazepam por comprimido.

b) Explicar el efecto que tiene el tamaño de partícula de la resolución y sobre el tiempo de
retención de los compuestos.
Resultados:

Problema:

Tiempo de retención (min) Altura del pico (cm)

3.06 9.3

7.62 4.9

Estándar
3.06 8.2

7.62 8.5

3. Se determinó benzidamina (PM 309. 4) en tabletas por cromatografía gas-líquido,

empleando como estándar interno maleato de piridamida. La técnica empleada fue la
siguiente:

Condiciones cromatográficas. Fase estacionaria: OV-17 al 3% sobre chromosorb WHP

80/100. Gas acarreador: nitrógeno a 30 mL/min. Temperaturas: inyector 250°C, horno 235
°C, detector 250 °C. Detector de ionización de flama.

Preparación de soluciones:

Solución de estándar interno: 500mg de maleato de piridamida se disolvieron y aforaron

en 50 mL de cloroformo.

Solución estándar: 125 mg de benzidamina se disolvieron y aforaron a 50 mL de

cloroformo.

Preparación estándar de inyección: en un matraz aforado de 10 mL se colocaron 1 mL de

solución de estándar interno y 2 mL de estándar de benzidamina; se aforó con cloroformo.

Preparación de la muestra: 10 tabletas con un peso promedio de 102 mg/tab, se

pulverizaron y se tomó una muestra de 250 mg, la cual se disolvió en cloroformo y aforó a
50 mL se filtró, del filtrado de está solución se tomaron 2 mL, se mezclaron con un mL de
solución de estándar interno y se aforaron a 10 mL con cloroformo.

Después de inyectar 5 mcL de cada solución, las áreas bajo la curva fueron las siguientes:

Preparación estándar: benzidamina 227.5 m2

Maleato de piridamida 122.5 mm2

Preparación problema: benzidamina 232.9 mm2

Maleato de piridamida 132.1 mm2

 a) Calcular el contenido de principio activo por tableta
b) Explicar el efecto de la temperatura y el flujo de gas acarreador sobre la resolución y
sobre el tiempo de retención de los compuestos.
c) Mencionar las diferencias fundamentales entre un detector de ionización de flama y
uno de captura de electrones.

4. El peso de 20 comprimidos de diazepam fue de 3 g. Después de pulverizarlos, se tomó una

muestra de 152 mg de polvo y se colocó en un matraz aforado de 100 mL. Se agregaron 50
mL de una mezcla metanol-agua (6:4), se agitó por 10 minutos y se aforó. Se filtró y del
filtrado se tomó una alícuota de 1 mL y se aforó a 10 mL con solución del estándar interno
(solución de nitrazepam de 2.5mcg/mL en metanol.agua). Se mezcló y se inyectaron 25
mcL de esta solución al cromatógrafo de líquidos. Paralelamente se corrió una solución
estándar de diazepam de referencia (pureza 99.8%), pesando 10 mg y se disolvieron en
una mezcla metanol:agua (6:4) aforando a 100 mL. De esta solución se tomó un mL y se
aforó a 10 mL con solución del estándar interno de nitrazepam. Se inyectaron 25 mcL de
esta solución. A partir de los siguientes resultados determine el contenido de diazepam
por comprimido.

Solución problema

Área del diazepam 765717

Área del nitrazepam 739993

Solución estándar

Área del diazepam 1368512

Área del nitrazepam 675460