UNIVERSIDAD NACIONAL DE INGENIERIA

FACULTAD DE INGENIERIA QUIMICA Y TEXTIL

DEPARATAMENTO ACADEMICO DE INGENIERIA QUIMICA

Informe Nº4
LABORATORIO DE QUÍMICA ORGÁNICA 1
QU325 A
TEMA: Cromatografía de capa fina y de columna
ALUMNOS
Murga Obispo, Kelly
DiazAlarcon, Juan
Tafur Palomino, Jhonatan
Nota del Informe
PROFESORES:
Emilia G. Hermoza Guerra
Tarsila Tuesta Chávez
PERIODO ACADEMICO: 2018-2

REALIZACION DEL LABORATORIO: 24 / 10/2018

ENTREGA DE LABORATORIO: 19/11/2018

Lima-Peru
 Índice
1. OBJETIVOS ....................................................................................................................................... 1
2. FUNDAMENTO TEÓRICO ................................................................................................................. 1
3. DATOS .............................................................................................................................................. 4
4. DIAGRAMA DE FLUJO DEL PROCESO ............................................................................................... 5
5. DISCUSIÓN DE RESULTADOS ........................................................................................................... 6
5.1 Cromatografía de Columna: .................................................................................................... 6
5.1.1 Observaciones: ................................................................................................................ 6
5.1.2 Explicación: ...................................................................................................................... 6
5.2 Cromatografía de capa fina: .................................................................................................... 7
5.2.1 Observaciones: ................................................................................................................ 7
5.2.2 Explicaciones ................................................................................................................... 8
6. CONCLUCIONES ............................................................................................................................... 8
7. BIBLIOGRAFIA .................................................................................................................................. 9
8. ANEXOS............................................................................................................................................ 9
8.1 Cálculos de cromatografía de columna: .................................................................................. 9
8.2 Aplicación industrial Monitorización terapéutica de metotrexato en pacientes leucémicos
mediante cromatografía líquida de alta resolución. ......................................................................... 10

I
 Cromatografía de capa fina y de columna

1. OBJETIVOS
 Realizar técnicas de separación e identificación de pigmentos naturales por cromatografía.
 Conocer y comprender las distintas técnicas cromatografías.
 Conocer los fundamentos físico-químicos implicados en los procesos de separación por
cromatografía.

2. FUNDAMENTO TEÓRICO

¿Qué es la CROMATOGRAFIA?
La cromatografía es un método poderoso de separación de compuestos. Es una de las técnicas más
empleadas para separar los componentes de una mezcla para su estudio respectivo .Toma en
cuenta el movimiento de una mezcla que se mueven a varias velocidades de separación,
notando que uno se mueve más fácilmente que el otro, generando que se separen mediante
bandas característica de cada compuesto de la mezcla.

Figura 1 Resolución de enantiómeros por cromatografía (Wade, 2005)

1
Tipos de cromatografía
Existen diferentes criterios de clasificación de la cromatografía:
 Por la naturaleza de sus fases:
 Cromatografía líquido - líquido
 Cromatografía gas - líquido
 Cromatografía líquido -. sólido
 Cromatografía gas - sólido
 Atendiendo al proceso químico-físico que va a protagonizar el proceso de separación:
(siendo este el criterio más coherente de clasificación):
 Cromatografía de Adsorción (líquido - sólido o cromatografía de fases normales).
 Cromatografía de Reparto (o líquido - líquido), se basa en las características de
solubilidad relativa de los solutos entre la fase móvil y una fase estacionaria de un líquido
no polar. La fase líquida se impregna a un soporte inerte de sílice o, en el caso de
cromatografía de fase invertida, se une químicamente.
 Cromatografía de Intercambio iónico.
 Cromatografía de Exclusión.
 Con base en la naturaleza del soporte en el que se aloja la fase estacionaria:
 Cromatografía plana:
-Cromatografía en papel
-Cromatografía en capa fina (TLC)
 Cromatografía en columna:
-Cromatografía de gases (GC)
-Cromatografía líquida (LC)
- cromatografía líquido - líquido
- cromatografía sólido – líquido
CROMATOGRAFIA CAPA FINA
En este tipo de cromatografía se caracteriza por el grado de elución de sustancias que
dependerá de la polaridad así como la del eluyente a utilizar, luego el adsorbente se colocara
en forma de una capa adherida encima de pequeñas placas de vidrio. Existen adsorbentes que
poseen un indicador de fluorescencia por el cual identificaremos las muestras, si a pesar de
esto no se muestra los componentes coloridos se recurrirá a otras técnicas.

2
Rf es el factor de retardo o retraso, que mide la movilidad relativa de cada componente con
respecto al máximo posible, la distancia recorrida por el frente de fase móvil.
Componente 1: Rf = a / D
Componente 2: Rf = b / D
Componente 3: Rf = c / D

CROMATOGRAFIA COLUMNA
Se caracterizan por tener una fase estacionaria que se encuentra dentro de una columna de
vidrio de 5 a 30 mm de diámetro por la que se hace pasar una fase móvil líquida o gaseosa
que estará en permanente movimiento. Según la afinidad de las moléculas por la fase móvil o
la estacionaria, éstas se separaran. La elección del disolvente es crucial para una buena
separación. Dicho disolvente pasa a través de la columna por efecto de la gravedad o bien por
aplicación de presión. A continuación se introduce la muestra por la parte superior de la
columna y se eluye con el disolvente elegido, recogiéndose por lo general en tubos de ensayo.

Figura 2: Esquema de cromatografía en columna. (fcn, 2016)

3
3. DATOS
Tabla 1: hoja de seguridad (www.merckmillipore.com)

Hexano Hoja de seguridad

Estado: liquido incoloro Inflamable

Punto de fusión: -95.6ºC
Punto de ebullició:69ºC
Densidad(20ºC):0,66g/mL

Acetona Hoja de seguridad

Estado: liquido Nocivo

Punto de fusión: -94ºC
Punto de ebullició:56.5ºC
Densidad(25ºC):0.797
g/mL

Alúmina Hoja de seguridad

Estado: solido
Punto de fusión: 2050ºC
Punto de ebullició:2977ºC
Densidad(20ºC): 3.2 a 4
g/mL

4
4. DIAGRAMA DE FLUJO DEL PROCESO

5
5. DISCUSIÓN DE RESULTADOS

5.1 Cromatografía de Columna:

Extracción Color

carotenos amarillo
Clorofila Pardo olivo

Extracción Color

carotenos amarillo
Clorofila Pardo olivo

Extracción Color
carotenos amarillo
Clorofila Pardo olivo

5.1.1 Observaciones:
 Al momento de introducir el n-hexano a la columna de cromatografía no se observó
burbujas si se hubiera observado se siguiere eliminar las burbujas aplicando golpes
suaves con los dedos.
 Al llenar lentamente la columna con alumina algunos pequeños solidos de este se
pegaban a las paredes de la columna por la cual se aplico golpes suaves con los dedos.
 La muestra del pigmento en todo momento estaba por encima de la alumina y la arena
lavada.
 La extracción del caroteno es un líquido amarillo.
 Para extraer más rápido el caroteno utilizamos la bomba de vacío.
 El adsorbente se sostiene con algodón para retener las partículas finas.

5.1.2 Explicación:
 Para la extracción del caroteno utilizamos la acetona debido a su polaridad, escasa
selectividad y amplio margen de solubilizacion.
6
  La alumina es solo un adsorbente.
 Mientras que los carotenoides son bastante estables y solo se han descrito oxidación e
isomerización posteriores al desarrollo de la cromatografía, las clorofilas son muy
lábiles se degradan por el calor, los ácidos y por acción de una enzima clorofilas del
propio tejido vegetal. En medio débilmente acido se transforma fácilmente en
feofitinas a y b sustancia de color pardo oliva.
 Es necesario ir cambiando a solventes más polares para efectuar la elusión de los
compuestos.
 Al llevar a cabo la cromatografía es importante mantener siempre el nivel del solvente
arriba de la columna de adsorbente.

5.2 Cromatografía de capa fina:

5.2.1 Observaciones:

 Al preparar la cubeta, el papel

introducido se humedece
 En el caso del hexano puro, el nivel
no asciende mucho comparado al de
los otros eluyentes.

 El nivel de humedad hasta donde

había llegado el eluyente se
desvanece con rapidez
 En el caso del hexano puro, la fase
amarilla (caroteno) se nota un poco
más alejada del punto de partida, en
cambio los puntos de clorofila no
sufrieron desplazamiento
 En el caso de hexano-acetona 3:1, se
aprecia una mejor distinción de los
pigmentos
 En el caso del hexano-acetona 5:1, es
aquí donde los carotenos (amarillo)
asciende lo más alto y hay poca
distinción entre los 2 tipos de
clorofilas (a y b)
 Se observa un punto extraño color
verde oliva.

7
Tabla de resultados de factor de retardo

Factor de retador RF

Pigmento Hexano puro 3Hex – 1 Acetona 5Hex- 1acetona

Clorofila a 0 0.25 0.125

Clorofila b 0 0.1 0.025

caroteno 1 0.875 1

5.2.2 Explicaciones
 El papel al interior que recubre las paredes del vaso de precipitado sirve para saturar la
atmósfera del vaso con el vapor del disolvente y así prevenir la evaporación del eluyente
desde la placa cromatográfica.

 El eluyente o fase móvil (hexano puro) no asciende mucho por el gel de sílice (fase
estacionaria) debido que este gel a ser altamente polar hay cierto rechazo y casi nada de
ascenso del hexano por la placa. Además como las clorofilas son más polares respecto a los
carotenos, estas clorofilas se mantuvieron al mismo nivel de partida ya que hubo más
afinidad a la adhesión con la fase estacionaria.

 En el caso de la mezcla hexano-acetona 3:1, al tener esta mezcla un componente polar

asciende por el sílice pero las clorofilas son desplazadas lentamente debido a que sienten
mayor afinidad a permanecer en la fase estacionaria, pero aun así se distinguen ambos
pigmentos debido a la polaridad de la fase móvil. Los carotenos al tener mayor carácter
apolar tienen una velocidad de desplazamiento más rápida ya que en la fase móvil
predomina la apolaridad.

 En el caso de la mezcla hexano-acetona 5:1 ,a comparación de la última mezcla hexano-

acetona 3:1, esta tiene mayor carácter apolar y por lo tanto no se aprecia mucha la
separación de clorofilas que en la otra mezcla 3:1. Nuevamente se aprecia que los carotenos
tienen mayor afinidad en permanecer en la fase móvil.

 El punto extraño, color verde oliva se debe a la aparición de feofitinas.

6. CONCLUCIONES
 El principal factor para controlar el movimiento en los diferentes compuestos en una
cromatografía es la polaridad del solvente.
 El factor de retardo varía ya que se cambió de eluyente por lo que en esta experiencia
no puede servir para identificar componentes pero sí para describir el comportamiento
de los componentes, es decir, a menor factor de retardo significa una sustancia con
más afinidad a la fase estacionaria y por ende más polar
 El eluyente o fase móvil que mejor sirve para distinguir los pigmentos de la espinaca
es el de la proporción hexano-acetona 3:1.
8
7. BIBLIOGRAFIA
fcn. (2 de julio de 2016). Recuperado el 24 de septiembre de 2018, de
http://www.fcn.unp.edu.ar/sitio/quimicabiologica1/wp-content/uploads/2016/02/7-2016-teoria-
Unidad-6-Purificacion-de-proteinas.pdf

Moreno, J. J. (diciembre de 2010). Conservadores quimicos utilizados en la industria alimenticia.

Buenavista,saltillo coahuila,Mexico: Universidad Autonóma Agraria Antonio Narro.

Nemer, B. V., Enri ́quez, J. L., Serrano, M. d., & Infante, A. F. (2009). Manual pedagógico de prácticas
de química general en microescala. México, D.F.: Universidad Iberoamericana, Departamento de
Ingenieri ́a y Ciencias Qui ́micas : Centro Mexicano de Qui ́mica en Microescala.

R.H. Petrucci, W. H. (2003). QUIMICA GENERAL. Prentice Hall.

sciencedirect. (s.f.). Recuperado el 24 de septiembre de 2017, de

https://www.sciencedirect.com/science/article/pii/S1888400817301101

Universidad de Sevilla,Facultad de Química. (2015). Prácticas de Química Organica. Departamento de

Química Orgánica , 56.

Wade, L. (2005). LA QUIMICA ORGANICA. Prentice-Hall Hispanoamericana.

8. ANEXOS

8.1 Cálculos de cromatografía de columna:

distancia recorrida por el pigmento
Fr =
distancia recorrida por el eluyente
Para hexano puro: d eluyente = 0.3 cm ; d clorofila a =0 → Fr = 0
d clorofila b = 0 → Fr = 0
d caroteno = 0.3 →Fr =1

Para hexano-acetona 3:1 deluyente = 4 cm ;d clorofila a =1 → Fr = 0.25

d clorofila b = 0.4 → Fr = 0,1
d caroteno = 3.5 → Fr = 0,875

Para hexano-acetona 5:1 deluyente = 4 cm; d clorofila a =0.5 → Fr = 0.125

d clorofila b = 0.1 → Fr = 0,025
d caroteno = 4 → Fr = 1

9
8.2 Aplicación industrial
Monitorización terapéutica de metotrexato en pacientes leucémicos mediante
cromatografía líquida de alta resolución. (sciencedirect)
La cromatografía líquida de alto rendimiento con detector ultravioleta puede ser utilizada para la
determinación de MTX ( La monitorización terapéutica de metotrexato)con propósitos clínicos, ya
que es simple, rápida, de bajo costo y altamente específica. Estas cualidades son imprescindibles en
un método bioanalítico aplicado a la monitorización terapéutica de fármacos. Algunas estrategias
basadas en esta técnica han sido publicadas en los últimos anos. Las mismas se caracterizan por el
uso de un estándar interno y diferentes pretratamientos de muestra, tales como la desproteinización
con nitrato de plata y la costosa extracción en fase sólida. En ninguno de estos 2 métodos se
demuestra la separación del MTX de sus metabolitos, llamando la atención la no detección del 7-
hidroxi-metotrexato. Utilizando un método sencillo y altamente eficiente basado en cromatografía
líquida de alta resolución con detección ultravioleta se puede determinar el MTX en plasma humano.

10