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Lima, Perú
2018
ÍNDICE
pág.
RESUMEN……………………………………………………………………… 3
INTRODUCCIÓN………………………………………………………………. 4
OBJETIVOS……………………………………………………………………. 5
MARCO TEÓRICO……………………………………………………………. 6
RESULTADOS………………………………………………………………… 16
DISCUSIÓN DE RESULTADOS…………………………………………….. 24
CONCLUSIONES……………………………………………………………… 26
RECOMENDACIONES……………………………………………………….. 27
CUESTIONARIO..……………………………………………………………... 28
FUENTES DE INFORMACIÓN………………………………………………. 34
ANEXOS………………………………………………………………………... 35
APÉNDICE……………………………………………………………………… 36
2
RESUMEN
El poder de resolución del ojo humano, es decir, su capacidad para distinguir entre
dos objetos puntuales que se encuentran muy próximos, es de alrededor de 0,2 mm
en el mejor de los casos. Debido a ello, una parte muy sustancial de la gran
diversidad de seres vivos que constituyen nuestra biosfera escapó a la observación
humana hasta épocas muy recientes: se trata del grupo de seres vivos que hoy
denominamos microorganismos.
3
INTRODUCCIÓN
Los microorganismos son seres vivos invisibles a nuestra simple percepción que
todos nosotros tenemos. Pueden ser parte de distintas clases, abarcado hongos,
bacterias, algas, etc. Puede decirse que algunos de ellos son los primeros seres
vivos en aparecer sobre la faz de la tierra y hay algunas teorías que incluso
estipulan el origen de la vida fuera de ésta, con microorganismos provenientes del
exterior de la misma. Este tipo de formas de vida en general se componen de una
sola célula, aunque también existen organismos con más de una.
4
OBJETIVOS
5
MARCO TEÓRICO
CULTIVO DE BACTERIAS
FIG.1 CULTIVO DE
BACTERIAS
CARACTERISTICAS
6
INDICACIONES
Esterilidad. Fundamental recordar que todos los medios de cultivo han de estar
perfectamente estériles para evitar la aparición de formas de vida que puedan
alterar, enmascara o impedir el crecimiento.
Especies bacterianas.
FIG. 2: MUESTRAS EN
EL LABORATORIO
7
MEDIOS DE CULTIVOS:
Una placa de agar, un ejemplo de crecimiento medio bacteriano. Las líneas y los
puntos naranjas son colonias bacterianas. Ver FIG. 3
FIG.3: MEDIO
DE CULTIVO
8
CLASIFICACIÓN
SEGÚN SU ORIGEN
9
TIPOS DE MEDIOS DE CULTIVO
Agar nutritivo:
El agar nutritivo es un medio de cultivo usado normalmente como rutina
para todo tipo de bacteria. Es muy útil porque permanece sólido incluso a
relativamente altas temperaturas. Además, el crecimiento bacteriano en
este agar lo hace en la superficie, por lo que se distinguen mejor las
colonias pequeñas. Ver FIG.4
En un caldo de nutrientes, la bacteria crece en el líquido, y aparece como
una sustancia espesa, con colonias difícilmente observables.
El agar nutritivo contiene normalmente:
0,5% de peptona;
0,3% de extracto de carne/extracto de levadura;
1,5% de agar;
Su almacenamiento es a 2°C - 30°C
Es muy higroscópico y PH casi neutro (6,8 ± 0,2) a 25 °C.
FIG.4 BIOXON
10
Caldo nutritivo:
0,5% de peptona;
0.3% de extracto de carne
11
Agar sabouraud:
15% de agar
40% de dextrosa
10% de peptona
Referencia:
American Public Health Association, American Chemical Society,
Association of Official Agricultural Chemists (1920).
12
PREPARACION DE LAS PLACAS PETRI
Las placas de Petri se preparan vertiendo el medio fundido y estéril dentro de ellas
y en un ambiente aséptico (por ejemplo en la proximidad de la llama de un
mechero Bunsen) es conveniente homogenizar el medio en el transcurso de la
operación para evitar que el agar sedimente en el fondo del recipiente y no se
distribuya por igual en todas las placas.
El agar es una sustancia gelatinosa que se usa para cultivar bacterias. Está hecho
de un tipo de alga roja que proporciona una superficie de crecimiento ideal para
muchos tipos distintos de bacterias. Algunos tipos de agar contienen nutrientes
añadidos (como la sangre de oveja), lo cual ayuda a promover un crecimiento
bacteriano más sólido. Ver FIG.8
FIG.8 PLACA
PETRI
13
2) Preparación de las placas Petri
Las placas de Petri deben estar bien esterilizadas antes de usarlas para
cultivar bacterias; de otro modo, los resultados del experimento podrían
verse afectados. Las placas de Petri recién compradas deben venir
esterilizadas y selladas en empaques de plástico.
Saca la placa de Petri de su paquete y separa las dos mitades. Con mucho
cuidado, vierte la solución de agar caliente en la mitad inferior de la placa
de Petri, solo lo suficiente para formar una capa por encima del fondo de
la placa.
Vuelve a colocar rápido la mitad superior de la placa de Petri para evitar
que las bacterias transmitidas por el aire contaminen el experimento.
Reserva la placa de Petri durante 30 minutos a 2 horas, hasta que la
solución de agar se enfríe y se endurezca (cuando esté lista, se parecerá
a gelatina cuajada).
3) Refrigera las placas de Petri hasta que estén listas para su uso.
14
4) Coloca las placas de Petri en un lugar oscuro y cálido.
Este viene a ser el último proceso de la preparación de placas Petri, ya que por
último se debe colocar en un lugar donde los rayos uv o simplemente la luz natural
puedan cambiar el estado alterando la placa Petri.
Deja las placas de Petri en un lugar oscuro y cálido donde las bacterias puedan
desarrollarse sin perturbaciones, durante varios días. No olvides almacenarlas
boca abajo, de modo que las gotas de agua no interrumpan el crecimiento de las
bacterias. Ver FIG.9
Deja que las bacterias se desarrollen durante 4 a 6 días, ya que eso les
dará a los cultivos suficiente tiempo para crecer. Una vez que las bacterias
empiecen a crecer, podrías notar un olor particular que proviene de las
placas.
Referencias:
http://www.stevespanglerscience.com/lab/experiments/growing-bacteria
15
RESULTADOS
Cantidad de
Ninguno Moderado Abundante
crecimiento
Distribución de
Trasparente Turbidez Película
crecimiento
Olor Imperceptible Imperceptible Pútrido
Tabla 1
Grupo N° 1
Ambiente Baño de varones 2° piso
N° de hongo 4
- Penicillium (3)
- Aspergillus (4)
Tipo de hongo
- Candida spp (1)
- Levadura (2)
- Penicillium: forma circular oscura con
bordes bancos.
Algunas características - Aspergillus: de un color verde oscuro.
- Candida spp: de un color blanco circular.
- Levadura: de color rojizo y blanco.
Tabla 2
16
Datos del grupo N°2:
N° de Colonias 23 20 13 1 3 4 42
X1=2mm
X2=3mm X1=0.5mm
X1=3mm X22=1mm
X3=3mm X2=0.5mm
X2=1mm X23=1mm
X4=1mm X3=0.5mm
X3=0.5mm X24=1mm
X5=2mm X4=1mm
X4=4mm X1=3mm X25=1mm
X6=3mm X5=1mm
X5=Irregu. X2=2.5mm X26=1mm
X7=4mm X6=1mm
X6=4mm X3=Irregular X27=1mm
X8=4mm X7=1mm
X7=2mm X4=2mm X28=1mm
X9=2mm X8=1mm
X8=1mm X5=1mm X29=1mm
X10=3mm X1=3mm X9=1mm
X9=1mm X6=2mm X1=3mm X30=1mm
X11=5mm X2=1mm X10=1mm
X10=1mm X7=1mm X2=4mm X31=1mm
Tamaño X12=1mm
X11=1mm X8=4mm
X1=3mm
X3=4mm
X3=1mm X11=1mm
X13=7mm X4=2mm X32=1.5mm
X12=1mm
X12=1mm X9=1mm X33=1.5mm
X14=2mm X13=1mm
X13=1mm X10=1mm X34=1.5mm
X15=2mm X14=1mm
X14=1mm X11=1mm X35=1.5mm
X16=8mm X15=1mm
X15=1mm X12=1mm X36=2mm
X17=3mm X16=1mm
X16=1mm X13=2.5mm X37=2mm
X18=2mm X17=1mm
X17=1mm X38=2mm
X19=1mm X18=1mm
X18=1mm X39=2mm
X20=4mm X19=1mm
X19=1mm X40=3mm
X21=2mm X20=1mm
X22=3mm X41=3mm
X21=1mm
X23=4mm X42=4mm
Tabla 3
17
Ambiente Biblioteca
Tabla 4
Procedimiento C:
Grupo 2
Tabla 5
18
Ambiente Laboratorio de Fisicoquímica
Tabla 6
Datos del grupo N° 3
N° 1 N° 2 N° 3
Grupo N°3
Tubo estéril Tubo no estéril Tubo estéril
Pipeta estéril Pipeta estéril Pipeta no estéril
Tabla 7
19
Grupo N° 3
Procedimiento C
Número de hongos 2
Tabla 8
Factores de crecimiento
Tiempo de exposición/días de
15 minutos / 6 dias
reproducción
Tabla 9
FIG.10 CRECIMIENTO DE
BACTERIAS
20
Datos del Grupo N°4:
Placa Placa
Placa N1º Placa N°2
N°3 N°4 No
Estéril Estéril
estéril estéril
Sector
Grupo Laboratorio D:
Sector
de Fisico Inocu-
Sector A: Sector C: Inocu-
2 Quimica lador
Pelo B: Huella lador
no
estéril
estéril
Número
de 35 3 5 1 1 3 -
colonias
X1=6.5 X19=6
X2=9 X20=3
X3 =6 X21=13
X4=1
X22=1.4
X5=8
X23=1.2
X6=3
X24=1.9
X1=4.5
X7=2 X25=4 X1=3
X1=3 X2=2.5
Tamaño X8=4.5 X26=1 X1=6 X1=6.5 X2=3.5
X2=3.5 X3=2 -
(mm) X9=2.3 X27=2,2 X3=2.5
X3=3 X4=3
X10=5 X28=25
X5=2.7
X11=2 X29=2
X12=3 X30=4.2
X13=1.8 X31=2
X14=3 X32=7
X15=1
X33=1.1
X16=2.3 X34=3
X17=2.9 X35=1
X18=4.5
Liso
x1,x3,x4,x6,x10,
x13,x14,x15,x17,
X1=liso
x20,x23,x24, x25, X1=liso
X1=liso X2=liso
x29, x30, x31, X1=liso X1=liso X2=liso
Margen X2=liso X3=liso -
x33, x34 X3=liso
X3=liso X4=liso
Lobular
X5=liso
x2, x8, x19, x21,
x27, x32
Ondular
(FIG.11)
21
Todas
X1=pla Todas
Todas son Todas son son X1=plano
Elevación no son -
lanas planas planas
planas
x5, x7, x9, x11,
x12,Crema
x16, x18,
xx22
1,, xx826
, ,x9x,28x,16,
x18,xx3519, x22,
X1=Amari
x24, x26, x28,
llo
x32, x33, x35
X2=Amari
Amarillo X1=Anar
llo
x2, x6, x10, x11, anjado
X1=Amarillo X3=Amari
Pigmenta- x12, x14, x17, X1=amaril X1=am X2=Anar
X2=Crema llo -
ción x20, x25, x29, lo arillo anjado
X3=Crema X4=
x31, x34 X3=Crem
Anaranja
Anaranjado a
do
x5, x13, x21, x27,
X5=Crem
x30
a
Blanco
x3, x4, x7, x15,
x23
Todas son
Todas
Caracterís- opacas Todas son Es Es Son
son -
ticas excepto x22 y opacas opaca opaca opacas
opacas
x28
Tabla 10
Factores de crecimiento
Procedimiento C:
Tabla 11
22
Tabla de datos del Grupo 5:
Grupo N° 5
Tabla 13
FIG.11 FIG.12
23
DISCUSIÓN DE RESULTADOS
En el grupo N°1:
En el Grupo N°2:
En esta muestra del aula vacía, se encontraba con la puerta abierta y con
2 ventanas abiertas y 2 no cerradas.
En el Grupo N°3:
24
Luego, fomentaremos que la cantidad de crecimiento de la pipeta estéril,
con tubo no estéril, es moderado, con una distribución de crecimiento
formando sedimento, de olor imperceptible.
En el Grupo N° 4:
En este grupo, se puede notar que en la placa N°1 se puede ver que
existen 35 colonias de márgenes lisos, lobular, ondulantes con elevaciones
planas, de colores opacos translucidos.
Por otra parte, en la placa N° 2, en la sección A (pelo) de 10 colonias. se
sabe que las 5 son lisas y planas, de una pigmentación blancas humo de
color opacas translucidas.
En la placa N°2 de la sección B (alrededor de la huella), de colonias de
márgenes de lisos ondulante irregular, planas de color blancas humo y
opacas.
Por consiguiente, En la placa N°2 de la sección C (I. Estéril), de 2 colonias
ondulantes y plana, de color blanco tenue opaca translucida.
En el Grupo N° 5:
25
CONCLUSIONES
26
RECOMENDACIONES
27
CUESTIONARIO
28
Faringitis causada por (Streptococcus pyogenes)
Es una enfermedad que afecta al aparato respiratorio superior,
provocado por la bacteria Streptococcus pyogenes que se transmite a
través del aire, generando un dolor a la garganta muy doloroso.
SINTOMAS:
Dolor que empeora al hablar, Sequedad de la garganta, Fiebre, Dolor
de cabeza, Erupciones cutáneas.
SINTOMAS:
Sequedad de la garganta, Fiebre, Dolor de cabeza, Erupciones
cutáneas, Amigdalitis o amígdalas rojas e inflamadas, Dolores
musculares o articulares, Voz ronca, Ganglios inflamados en el cuello.
29
El grupo de agente de Estreptococos, son las que producen mayores
enfermedades respiratorias como:
Rhizopus nigricans
Alternaria:
30
Sus esporas son las causantes de la alergia, y, al igual que los
pólenes, son transportadas por el aire hasta la nariz o bronquios del
alérgico, causando la rinitis o asma.
Las esporas se pueden distribuir de una en una, o en largas
cadenas, y pueden crecer en colonias visibles, de color negro o gris.
Aspergillus:
Penicillium:
31
Sacharomyces cerevisae:
5. A.- ¿Cuáles son los ingredientes del agar nutritivo, caldo nutritivo y agar
sabourand?
Extracto de Extracto de
3.0 g 1 g/L Glucosa 40.0 g/L
carne carne
Cloruro de Cloruro de
5.0 g 5 g/L Tripteína 5.0 g/L
Sodio Sodio
Peptona 17.0 g Peptona 5 g/L Peptona 5.0 g/L
Agar 12.5 g Agar 15 g/L Agar 15 g/L
Extracto de
Agua destilada 1L 2 g/L Cloranfenicol 0.05 g/L
levadura
32
B.- ¿Qué clase de nutrientes proporciona cada uno de los ingredientes?
33
FUENTES DE INFORMACIÓN
Recuperado de:
http://hongos-alergénicos.reviberoammicol.com/files/019.PDF
Recuperado de:
http://www.unavarra.es/genmic/microgral/Tema%2002.%20Cultivo%20de
%20microorganismos.pdf
34
ANEXOS
FIG. A FIG. B
FIG. C FIG. C
35
APENDICE
Balanza Calibrada
Papel Kraft
Espátula
Probeta
Vaso
Vagueta
Mechero Bunsen
Trípode
Rejilla
2 guantes de asbesto
Algodón
1. DIAGRAMA DE FLUJO
36
Mezclar 23 gr de peptona, extracto
de carne y agar (5, 3 y 15grms
respectivamente)
AGAR NUTRITIVO
AGAR SABOURAUD
37
Vaciar el tubo de ensayo en cada uno
de los tres Petri esterilizados y 1 no
esterilizado.
PROCEDIMIENTO “A”
1
Zona B: Huella 3
digital
Zona C: Inoculador
estéril
No abrir esta
Zona D: Inoculador placa
no estéril
38
PROCEDIMIENTO “B”
Exponemos 15 minutos en un
determinado ambiente de la facultad
PROCEDIMIENTO “C”
39