Cromatina espermática: quebrando paradigmas

Sperm chromatin: breaking paradigms

Hace décadas, se pensaba que los espermatozoides tenía una cromatina no funcional,
inerte, sin la capacidad de transcripción. Se creía en ausencia de la matriz nuclear y la
presencia de las histonas del núcleo sería un error en el embalaje de la cromatina, lo que
podría interferir con la fertilidad en el macho. Hoy sabemos que entre las estructuras
toroidales, unidades básicas de la cromatina espermática muy compactado, hay algunas
regiones que contienen secuencias de nucleosomas, estos por lo general se unen a una
proteína de la matriz nuclear. La cromatina espermática es muy organizado y es
metabólicamente portador funcional del genoma del macho, llevando diferentes tipos de
ARN, las cuales, junto con los nucleosomas son importantes señalización epigenético
paterna, e influir en el desarrollo embrionario temprano. Por lo tanto, alteraciones de la
cromatina no sólo interfieren con el proceso de fecundación, sino que también influyen en
el desarrollo embrionario, lo que refuerza la necesidad de un análisis de la cromatina en la
evaluación de machos reproductores.

Palabras clave: cromatina.epigenética , el esperma , la matriz nuclear .

Abstract

Decades ago, it was thought that spermatozoa had a chromatin nonfunctional, inert,
without the ability to transcription. It was believed in the absence of nuclear matrix and the
presence of the core histones would be an error in the chromatin packaging, which could
interfere with male fertility. Today we know that between thetoroidal structures, basic units
of highly compacted sperm chromatin, there are a few regions containing nucleosome
sequences, these usually being attached to a nuclear protein matrix. The sperm chromatin
is highly organized and is metabolically functional carrier of male genome, carrying
different RNA types, which, along with the nucleosomes are important paternal epigenetic
signaling, and influencing early embryonic development. Therefore, chromatin alterations
not only interfere with the fertilization process, but also influence the embryonic
development, which reinforces the need for chromatin analysis in the evaluation of
breeding males.

Keywords: chromatin, epigenetic, nuclear matrix, spermatozoon.

Introducción
El esperma de los mamíferos tiene dos componentes principales, la cabeza y la cola o
flagelo. La cabeza consiste en acrosoma, el núcleo y en menor medida, las estructuras del
citoesqueleto y el citoplasma. El núcleo es haploide, que contiene sólo un miembro de cada
par de cromosomas, y la cromatina se vuelve altamente condensada durante la última fase
de la espermatogénesis (Eddy, 2006). Durante la espermatogénesis en los mamíferos, las
histonas somáticas, proteínas nucleares básicos, serían reemplazados parcial o totalmente
por nucleoproteínas específicos de esperma, conocidos como protaminas o proteínas de
queratina que tener un carácter más básico rico en arginina y cisteína oxidada (Bloch,
1969). Los estudios han mostrado que la permanencia de las histonas somáticas o la
aparición de anomalías en protaminas podrían conducir a la formación de los trastornos de
condensación de la cromatina (complejo ADN-proteína) de los espermatozoides, que se
afloja con efectos sobre la fertilidad (Gredhill, 1966; Evenson et al, 1980 ;. Mello, 1982).

Hace algunas décadas, se pensaba que los espermatozoides maduros poseen una cromatina
no funcional, inerte, sin capacidad de transcripción. Se creía que no existía la matriz
nuclear que compone la cromatina de los espermatozoides y que la presencia de las histonas
en el núcleo del espermatozoide sería un error en el proceso de compactación de la
cromatina. En contraste con las células somáticas, en el que la unidad básica de la
cromatina es el nucleosoma, que consiste en un octámero de histona rodeado de
aproximadamente 150 pares de bases (pb) de ADN, la unidad básica de cromatina
protamina espermatozoides de mamíferos sería el toroide (HUD et al. 1993), en el que
aproximadamente 50.000 pares de bases de ADN está estrechamente envuelta por
protaminas, formando una estructura en una "rosquilla" (hilo) o toroide. Una constitución
de este tipo sería importante en la protección y el mantenimiento de la estabilidad del ADN
y permitir que todo esto de ADN para ser transportado por el esperma ocupan un volumen
mucho menor que si fuera en forma de nucleosomas (Balhorn, 1982).
Los cambios en la cromatina de los espermatozoides

Hay pruebas de que este proceso de condensación del ADN puede ser incompleta, lo que
resulta en una menor estabilidad del núcleo y una mayor susceptibilidad a la
desnaturalización del complejo ADN-proteína, que se ha asociado con la infertilidad en el
hombre y diversos animales. Esta inestabilidad podría conducir a daños nucleares ADN, lo
que podría persistir durante el desarrollo embrionario, y la inducción de apoptosis
fragmentación del embrión en el desarrollo temprano conduce a la muerte o posterior
(Twigg et al., 1998).

Los toros tienen espermatozoides con morfología, motilidad y enzimas normales tienden a
comportarse como subfértiles. Animales fértiles Incluso probadas pueden tener intervalos
de subfertilidad de causa desconocida. Se encontró que, en la mayoría de los casos, esto es
debido a los cambios en la compactación de la cromatina de los espermatozoides (Beletti y
Mello, 1996). Fue a través de la reacción de Feulgen Gledhill (1966) diferenció el primer
tiempo con el esperma de ADN-proteína anómala complejo en los toros con subfertilidad.
Inicialmente, la mayor intensidad de la tinción en las cabezas de estos espermatozoides se
supone que es un contenido de ADN superior. Sin embargo, con el uso de
microespectrofotometrıa UV, se encontró que esta diferencia en la respuesta a la reacción
de tinción de Feulgen era debido a un cambio en el ADN cinética hidrolítica (despurinación
más rápido) debido a cambios en el complejo proteína-ADN, por lo que es más sensible y
más suelto hidrólisis. Por lo tanto, los espermatozoides con cromatina laxa mancha más
intensamente cuando se utiliza la reacción de Feulgen.

Actualmente, un gran número de métodos se utiliza para la identificación de cambios en la

estabilidad de la cromatina de los espermatozoides. Uno de los métodos más utilizados es el
análisis de la estructura de la cromatina de esperma (esperma estructura de la cromatina de
ensayo - SCSA) usando naranja de acridina para evaluar la susceptibilidad de ADN
desnaturalizante (Evenson et al., 1980). Los espermatozoides se somete a un tratamiento
ácido suave, se tiñeron con naranja de acridina y evaluado en citometría de flujo. A través
de los gráficos generados por citometría de flujo es posible cuantificar los espermatozoides
con fluorescencia verde y rojo, que son respectivamente espermatozoides con cromatina
normal y anormal. Mello (1982) desarrolló un método para la evaluación de la cromatina
con el uso de azul de toluidina, un colorante catiónico que exhibe fenómeno metacromática,
es decir, cambio de color inducido por la resonancia entre los electrones de las moléculas
de colorante. En este método se evalúa la capacidad de las moléculas de colorante
ligaremse a grupos fosfato del ADN, que está directamente relacionada con la
compactación del ADN.

Es importante que la solución de azul de toluidina es a pH 4,0, se asegura que fosfatos sólo
se ionizan, y no otros sitios posibles (aniones) se tiñen de unión. Mancha normal de
esperma verde, pero aquellos con anormalidades en la compactación de la cromatina en la
mancha violeta. Esto es debido al hecho de que, en la cromatina de esperma normal, la
mayoría de los grupos fosfato está bloqueado por protaminas en consecuencia menos
moléculas de colorante se unen al ADN y por lo tanto no se produce en el fenómeno
metacromasia, lo que resulta en una coloración verde en azul claro. Ya en los cromatina
espermática con poco comprimido, sería más conexiones con las moléculas de colorante,
que permiten la resonante electrones entre moléculas, lo que resulta en color desde el azul
oscuro a magenta. Sin embargo, sólo muy intensos cambios en la cromatina serían
identificados por este método. La sensibilidad de este proceso puede mejorarse mediante
hidrólisis ácida antes de la tinción. Así, las células de esperma normales, que se
caracterizan por altamente compactado de la cromatina, son poco afectados por hidrólisis y,
en consecuencia, el lavado es todavía azul claro. Por otra parte, los espermatozoides con
cromatina espermática, con ligeras modificaciones, identificado como normal sin
protaminas de hidrólisis han extraído parcialmente, permitiendo a las moléculas de
colorante ligadas a los grupos fosfato de ADN, de modo que estos espermatozoides para
pasar a la tinción anómala. Incluso con tratamiento ácido previo, continúa la evaluación de
los cambios en la cromatina espermática que tiene una subjetiva, y puede haber variaciones
entre los examinadores. Para reducir al mínimo la subjetividad, Beletti et al. (2004, 2005),
utilizando análisis de imágenes por ordenador de semen frotis teñidos con azul de toluidina,
tratados previamente con HCl 4N. De esta manera, los colores se diferencian por los
valores de píxeles, lo que reduce la subjetividad y permite que el grado de cambio. Además
de reducir la subjetividad, esta metodología permite la evaluación simultánea y
morfometría de cada cromatina de esperma, de modo que se puede correlacionar estas dos
características (Beletti et al, 2005 ;. Smith et al, 2008 ;. Y Beletti Kanayama, 2011).
Utilizando esta metodología, Beletti et al. (2004) demostraron la existencia de varios tipos
de cambios en la cromatina con variaciones en la ubicación y la intensidad de
descompresión. Tales autores sugerido una relación entre la ubicación de estos cambios con
la matriz nuclear. Estos tipos de cambios pueden tener diferentes etiologías y consecuencias
sobre la fertilidad de los hombres.

Beletti y Mello (1996), el estudio de toros donde el mayor porcentaje de espermatozoides

con patología cabeza (toros subfértiles), observaron que algunos de estos animales
mostraron frecuencia de espermatozoides con ADN-proteína compleja anómala similar a
los toros de alta fertilidad. Así, aunque el hallazgo de niveles más altos de inducida
asociado metacromasia con subfertilidad o cualquier situación subfertilidad se caracteriza
por la presencia de núcleos con la propiedad citoquímica.

En el ganado vacuno, Dobrinski y Barth (1993) mostraron que los jugadores considerados
de baja fertilidad tenían altas tasas de espermatozoides con ADN dañado. Los autores
observaron una estrecha relación entre el número de patologías espermáticas y el número
de espermatozoides con ADN dañado. Tienes Watson (2000) señaló que el esperma
presentar ADN dañado como una de las causas responsables del fracaso de la inseminación
artificial.

Tales cambios en la cromatina podrían interferir con la fertilidad masculina de diferentes

maneras, dependiendo de la severidad de la condición. Con cambios en la cromatina de
esperma graves serían cambiar la forma de la cabeza y por lo tanto en sus hidrodinámica,
que conduce a la motilidad inadecuada al interferir directamente en el proceso de
fertilización. Otros cambios menores no interferir con la motilidad del esperma y, por tanto,
el proceso de fertilización, pero poseen daños en el ADN que hacen que la unión de los
pronúcleos masculino y femenino, y por lo tanto serían estrangular el cigoto.

Incluso los cambios más ligeros no podían interferir con la fertilización y el desarrollo
embrionario temprano, pero podrían interferir con etapas posteriores del desarrollo
embrionario, lo que podría conducir a la muerte embrionaria con reabsorción fetal
consecuente o aborto. Sin embargo, en situaciones menos frecuentes, el embarazo podría
expirar, pero los recién nacidos poseen las alteraciones genéticas de diversos tipos e
intensidades.
Por microscopía electrónica de transmisión, en los laboratorios del Instituto de Ciencias
Biomédicas de la Universidad Federal de Uberlândia, se encontró alta correlación negativa
entre los cambios en la compactación de la cromatina espermática de pavos y tasa de
eclosión de los huevos. Sin embargo, no se obtuvo una correlación significativa entre estos
cambios y la tasa de fecundidad de estos huevos, evaluaron cinco días de incubación
(Araújo, 2013; UFU, información personal). Así, se ha demostrado que los cambios en la
compactación de la cromatina identificadas por microscopía electrónica de transmisión
poco o nada interfieren con el proceso de fertilización. Sin embargo, cuando el esperma que
lleva este cambio fertilizar el óvulo, es probable que conduzca a la muerte del embrión
durante su desarrollo

Rompiendo paradigmas

Aunque estos métodos y conceptos descritos hasta ahora son consistentes con los resultados
y La mayor parte de las observaciones de la investigación, todavía había varios puntos por
aclarar. Sería la cromatina espermatozoides totalmente inerte? En realidad no hay matriz
nuclear esperma? La presencia de histona es error en el proceso de compresión de la
cromatina?

Recientemente, el esperma se han reconocido como siendo altamente organizada y

metabólicamente conductores funcionales del genoma masculino. Además de la unidad
básica bien conocida de mamíferos esperma cromatina, la protamina toroide, otra
disposición de la cromatina es el nivel Organización ADN en dominios estructurales en
forma de bucles 20 a 50kb (Ward et al., 1989; Kramer y Krawetz, 1996). Se propuso
modelo de "rosquilla mango" para la estructura de la cromatina de esperma, lo que sugiere
que ambos niveles de la organización están relacionados (Sotolongo et al., 2003). En este
modelo, cada dominio en forma de bucle de ADN se condensa en una sola protamina
toroide. Estos dominios asa en forma de se adjunta a la proteína de la matriz nuclear en
lugares llamados anexión de las regiones de la matriz (Marte).

Así que hoy es prácticamente acepta la existencia de la matriz nuclear esperma. Mientras
que la composición de la matriz nuclear no se conoce totalmente, hay pruebas de que
algunos de sus componentes son (. Chamán et al, 2006) de la topoisomerasa II B, actina,
miosina y citoqueratinas espectrina, glutamina posiblemente carbamilfosfato sintetasa
dependiente, aspartato transcarbamilasa, dihidroorotase (DAC ;. Carrey et al, 2002
(Ocampo et al., 2005); Ocampo et al., 2005) y transcriptasa inversa (Giordano et al., 2000).
La fracción de nucleasa hipersensible, probablemente se une a una estructura nucleosomal
típica conectando cada toroide y los mangos unido a la matriz nuclear (Sotolongo et al.,
2003), potencialmente por la topoisomerasa II B (Shaman et al., 2006). Las regiones de
nucleasa sensibles se han reportado cerca de las regiones de la matriz, los bucles asociados
con el dominio en el ADN de esperma humano, que es similar a la de la cromatina aumento
de la transcripción en las células somáticas (Chang et al., 1995). Estos son indicios de que
tal vez el ADN de esperma no es tan inerte como se pensaba anteriormente. Asimismo, se
sabe que el núcleo del espermatozoide y también tiene la transcriptasa inversa, También
cuenta con varios tipos de ARN no codificantes, probablemente producidas durante la
espermatogénesis.

Aunque las funciones de estos ARN son aún desconocidas, se especula que serían
importantes para el control de genes en el desarrollo embrionario temprano y epigenética
(Dadoune, 2009 ;. Johnson et al, 2011; Carrel, 2012).

Otro concepto reciente e importante es que el cambio de la existencia de las histonas núcleo
del espermatozoide no necesariamente se caracteriza como un error en la compactación de
la cromatina. De hecho, entre las estructuras toroidales de la cromatina de esperma, hay
regiones que contienen secuencias de los nucleosomas, por lo general contiene ADN
hipometilado. Tales regiones son propensos a tener papel importante en el desarrollo
embrionario temprano y la herencia epigenética paternal. De hecho, desde hace algún
tiempo escribimos acerca de la importancia de la epigenética y el llamado "improntas"
paternal. Sin embargo, sólo la existencia de estructuras toroidales limitar la señalización de
cambios en el ADN epigenética, tales como metilación y acetilación.

La existencia de las regiones que contienen nucleosomas, incluso en pequeñas cantidades,

pero con una ubicación estratégica, amplía enormemente las posibilidades de señales
epigenéticas padres, ya que las histonas son sitios epigenéticos señalización importantes
(Johnson et al, 2011 ;. Carrel, 2012). Estos nuevos conceptos pueden ayudar e incluso
cambiar las interpretaciones de los comentarios de la cromatina esperma. Métodos para
evaluar la fragmentación del ADN (Tunel, cometa, la dispersión de la cromatina
espermática; Kadirvel et al, 2012; .. Karoui et al, 2012) identificaría sólo los cambios más
intensos en el ADN. Tener los que valoran la compresión o el estado de la cromatina (azul
de toluidina, SCSA ;. Strong et al, 2012; Oliveira et al., 2012) probablemente también
influenciada por los cambios epigenéticos. De este modo, la correlación entre la cromatina
alteraciones frecuentes identificados por estos métodos y muerte embrionaria temprana
puede no necesariamente ser causada por la fragmentación del ADN, pero los cambios
epigenéticos.

Conclusiones

Intercalados entre las estructuras toroidales de la cromatina espermática, hay algunas

regiones que contienen secuencias de los nucleosomas, ubicados estratégicamente, que
generalmente están unidos a la matriz nuclear. Estas regiones son importantes en la
señalización epigenética paternal. Junto con las regiones de la cromatina que contiene
nucleosomas, no codificante RNAs se encuentran en el núcleo de esperma parece ser
importante en el desarrollo embrionario temprano. Por lo tanto, el esperma altamente han
organizado la cromatina y son metabólicamente conductores funcionales del genoma
masculino. Tales conceptos ponen de relieve la necesidad de una evaluación de la
cromatina de esperma no sólo en la fragmentación del ADN, sino también como cambios
epigenéticos, muchos de los cuales pueden ser identificados al evaluar la compactación de
la cromatina.

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