CAPITULO Se sabe que muchas sustancias turalesy inti vided de encima especi stu de as in «enzinainibdey, evar mediante fa cindticaenaimdtica, sla base de desarol farmacos mode olor The Image Wo Regulacién alostérica de la actividad enzimatica |. Disefio de farmacos A a c 7 . A. Inhibicién con B. Inhibicén no competitive . Inhibicién ma 357358 Capitulo 12 Cinética, inibiciény regulacin de as enzimas Los primeros enzimologists, que a menudo trabgjaban con preparaciones eru- das de levaduras 0 células de higado, apenas podian observar la conversiGn de Jos sustratos en productos caalizada por enzimas, hasta ese momento, no puri- ficadas. Por lo tanto, a medicién de la velocidad de esas reacciones se transfor- ‘m6 en una herramienta poderosa para caracterizar la actividad enzimética, La aplicacién de modelos matemticos simples a la actividad enzimatica bajo con- diciones variables de laboratoro, y en presencia de sustratos competidres o de Inibidoresenzimsticos hizo posible la deduecign de las probables funciones fi- siol6gicas y de los mecanismos reguladores de varias enzimas. El estudio de las velocidades de las reacciones enzimaticas, o de la cinética de Ins enzimas, no es menos importante en el presente de lo que lo fue a prin- ipo del siglo XX. En muchos casos la velocidad de una reaceién y emo esa velocidad cambia en respuesta a diferentes condiciones revela la via que siguen los reactvos y, por Io tanto, indica el mecanismo de la reaccidn. Los datos de la cinética combinados con la informacién detallada de la estructura de una enzi- ma y de sus mecanismos cataltticos, proporcionan una de ls pstas més podero- sas sobre el funcionamiento biolégico de una enzima y puede sugert las formas dde moificarla con propésitos terapéutices. Comenzaremos nuestra consideracién sobre la cinstica enzimtica repasando Ja cinética quimica. Luego, deduciremos las eouaciones bésica de In cingtica de Jas enzimas y describiremos los efectos de los inhibidores sobre éstas. También consideraremos un ejemplo de la regulaciGn enzimtica que resalta varios aspec- {0s del funcionamiento de Tus enzimas. Finalmente descrbiremos algunas apli- caciones pricticas de la inhibicién de las enzimas, como el desarollo de inhibi- dores enzimticos como férmacos. [Ej Cinética de las reacciones Dentro de las téenicas més poderosas para elucidar fos mecanismos cata- liticos de las enzimas se encuentran las mediciones cinéticas de las reacciones catalizadas por enzimas. La cinética enzimética es una rama de la cinética q mica, por Jo tanto, comenzaremos esta seccién con un repaso de los prineipios de la cinética quimica, A Cinética quimica Una reaceién de una estequiometria global A—>P donde A representa a los reactivos y P a los productos, puede realmente producir- se a través de una secuencia de reacciones elementales (procesos moleculares sim- ples) como Ahh P Aqui, I) I> simbolizan los intermediarios de la reaccién. Cada reaccién ele- ‘mental puede caracterizarse respecto del nimero de las especies que reaccionan y de la velocidad a la que interactéan. La descripcién conjunta de cada reaccién elemental constituye ta descripcién del mecanismo del proceso de reaccién glo- bal, Aun una reaccién compleja catalizada por enzimas puede analizarse en t ‘minos de las reacciones elementales que la componen. Orden de reaccién. A temperatura constante, a velocidad de una reaccidn ele- ‘mental es proporcional a la frecuencia con la que las moléculas que reaccionan se ‘einen. La constante de proporcionalidad se conoce como una constante de velo- ‘cidad y se simboliza con k. Para la reaccign elemental A — P, la velocidad instan- tinea de aparicién del producto o desaparicién del reactivo, que se llama velocidad (©) de la reaccién, es a(P) _ _ all ode de {Al [1241]Secci6n 12-1 Cinética de las eacciones 359 Bn otras palabras, la velocidad de la eacci6n en cualquier punto del tempo es propoeional ala concentracion del reactivo A. Este es un ejemplo de una rea: dn de primer orden, Dado que la velocidad tiene como unidad molar por se- gundo (M - s~), la constante de velocidad de primer orden debe tener como ut dad la inversa de segundos (¢"!). El orden de una reaccién elemental corresponde «fa molecularidad dela veaccin, que es el nimero de moléculas que deben co- Tsionar en forma simultdnea para generar wn producto, Pot lo tanto, una reaceién elemental de primer orden es unimolecular. CConsiere la eacin elemental 2A > P Esta reaccin bimolecular es una re accién de segundo orden y su velocidad instantinea se describe por ala) v= SN = AP [122] En este caso la velocidad de Ia reaccidn es proporcional al cuadrado de la concen tracidn de A y la constante de velocidad k de segundo orden tiene unidades M"!- 5 ‘La reaceién bimolecular A + B —> P también es una reaccin de segundo or- den, con una velocidad instantdnea descrita por —aAl _ _ 4B) dt dt ‘Aqui se indica que Ia reaccién es de primer orden para [A] y de primer orden para (B] (véase célculo ilustrativo 12-1). Las reacciones unimoleculares y bimo- leculares son comunes, Las reacciones termoleculares son inusuales, debido a que la colisién simulténea de tres moléculas es un acontecimiento poco frecuente. Se desconocen las reacciones de cuarto orden © mayores. ve = K{AI[B] [12-3] Ecuaciones de velocidad. Una ecuacién de velocidad describe el progreso de tna reacién en furcgn del tiempo, y puede dedise dels ecuaciones que des Cron la velocidad de reac istantnes, De exe modo, una ecvacién de Vel- Cidad de primer orden seobiene «pari dl eordenaminto de la ec. 12-1 ta) MAL gintal = —k at 4 gy = aaa (124) Y al inegrar ta desde Aly I concentra nil de A, hasta [A la concen traci de A a emo ainta} = ~k [at fc aimat= + a Esto da como resultado InfA] = Inf}, ~ ke [12] 6 al aplicar el anilogaritmo on ambos érminos de la eouacién (Al = [Al 27) sm + D,y se pede graticar como nla figura 12-1. Por lo tanto, si una reacci6n es de primer orden, un gritico de In(A] en fancin de ¢ mostrar una inea recta cuya pendiente es ~k (a constante de velocidad de primer orden negativa), y cuyainterscceién en el ee InfA] es InfA]. ‘Una de ls caracterstias distintvas de una reaccién de primer orden esque el tiempo para que la mitad del reactvo inci se descomponga, el tempo medio 0 la semivida (vida media, tj, es una constante y or lo tanto es independiente de la concentracininivial de reactivo. Eso se demuestra fcilmente al susiur la [A] por [Aly/2 cuando ¢= ty» dentro de la ec. 12-6 y eondenara ny (CD CALCULOS ILUSTRATIVOS 12-1 Determine fa velocidad de la eacein elemental XYZ cuando la muestra contiene 3 uM X y 5 UM Y, y lak para Ia reacciGn es 400. Ms Utilice la ec, 123 y asegtrese de que todas las unidades sean Ins correcta: 400. Ms} uM) »M) 400 M-*-s9G x 10° M) (x 10*M) x10 °Mos? = 6nM-s ! nA, Pendionte = Inca ° Tiempo Figura 12-1 Grifico de una ecvacién de velocidad de bvimer oe, La penciente dela line recta que se obtiene ‘cuando se grafica IA] en funcin del tempo es la constant de velocidad k