PRODUCCION DE ANTIBIOTICOS

Microbiologia industrial
 ANTIBIOTICO
•Los antibióticos son moléculas usadas en el tratamiento
de infecciones por bacterias, de ahí que se les conozca como
antibacterianos.
•Se utilizan en medicina humana, animal y horticultura.
•Normalmente los antibióticos presentan toxicidad selectiva, siendo muy
superior para los organismos invasores que para los animales que
los hospedan, aunque ocasionalmente puede producirse una reacción
adversa medicamentosa, como afectar a la flora bacteriana normal del
organismo.
 TIPOS DE ANTIBIOTICOS
•1.- Betalactámicos. Poseen en su estructura el anillo betalactámico,
compuesto por 3 átomos de carbono y 1 de nitrógeno. (penicilinas,
cefalosporinas, etc)
•2.- Macrólidos. Consiste en un anillo lactónico con azúcares aminados, como
la eritromicina producido por Streptomyces erythreus.
•3.- Aminoglicósidos. Consisten en azúcares aminados y un anillo
aminociclitol, como la estreptomicina.
•4.- Tetraciclinas. Que tienen en su estructura el grupo naftaleno (4 anillos), y
son producidas por el género Streptomyces.
•5.- Polipeptídicos. Poseen una cadena de aminoácidos algunas veces circular,
como bacitracina, producida Bacillus subtilis.
•6.- Polienos. Compuestos que contienen tres o más dobles enlaces, como;
nistatina (antifungico) y anfotericina B.
•7.- Otros antibióticos. El Cloranfenicol posee una estructura simple de
nitrobenceno. Lo produce Streptomyces venezuelae aunque debido a su
simplicidad resulta más económica su síntesis química.
 MECANISMO DE ACCIÓN
•Tienen capacidad de inhibir una reacción bioquímica específica y esencial,
para la célula procariota.
•Para que el antibiótico haga efecto es necesario que llegue al foco infeccioso,
penetre en la célula bacteriana y alcance intracelularmente la concentración
necesaria.
•Una vez dentro de la célula, el antibiótico puede ser bacteriostático
(macrólidos, tetraciclinas, cloranfenicol) si inhibe la multiplicación de forma
reversible, o bactericida (betalactámicos, aminoglicósidos, polipeptídicos,
polienos) si tiene un efecto letal.

•Pueden ejercer su acción en una de las siguientes formas:

•1.- Inhibición de la síntesis de la pared celular
•2.- Alteración de la membrana citoplásmica
•3.- Inhibición de la síntesis proteíca
•4.- Bloqueo de la síntesis de los ácidos nucleicos
 1.- Inhibición de la síntesis de la pared celular.
•Los antibióticos ß-lactámicos son inhibidores específicos de la síntesis de
peptidoglicano, componente de la pared celular bacteriana. Son análogos
estructurales de la D-alanil-D-alanina que se unen a las transpeptidasas y las
inactivan irreversiblemente.
•Las células en crecimiento, están contínuamente sintetizando nuevo
peptidoglicano y transportándolo al sitio adecuado en la pared celular.
•Algunos antibióticos (Bacitracina, Betalactámicos) reaccionan con alguno de
los enzimas que se requieren para completar este proceso originando que la
célula desarrolle puntos frágiles en su pared celular.
•Estos antibióticos son bactericidas ya que la célula debilitada está sujeta a
lisis.
•La mayor parte de estos antibióticos son activos frente a células en
crecimiento.
2.- Alteración sobre la membrana citoplásmica

• Sustancias que modifican la permeabilidad, permiten la salida de iones K

y macromoléculas como los ácidos nucleicos.
•Sin embargo, como la membrana celular en células microbianas y
animales tienen similitudes, la mayor parte de estos antibióticos son tóxicos
para los humanos.
•Polimixinas. Interaccionan con los fosfolípidos de las membranas
bacteriana.
•Polienos. (Nistatina, anfotericina B) son activos frente a hongos ya que
forman complejos con los esteroles de las membranas de las células
fúngicas.
3.- Inhibición de la síntesis proteica

• Estos compuestos (estreptomicina, gentamicina, tetraciclinas,

cloranfenicol, eritromicina) reaccionan con el complejo ribosoma-
mRNA.
• Aunque las células animales también tienen ribosomas, son diferentes
en tamaño y estructura de los ribosomas de los procariotas (80S y 70S)
por lo que estos antimicrobianos tienen una acción selectiva frente a
bacterias.
 PENICILINAS
•Son del grupo de los β-lactamicos.
•Existe diversidad de penicilinas. Algunos
hongos del género Penicillium sintetizan de
forma natural la penicilina G.
•Debido a la aparición de resistencias, se han
desarrollado otras familias siguiendo dos
estrategias: la adición de precursores de la
cadena lateral al medio de cultivo, lo que se
traduce en la producción de penicilinas
biosintéticas; y la modificación química de la
penicilina obtenida por la fermentación, dando
lugar a las penicilinas semisintéticas.
•La estructura básica de las penicilinas es el
ácido 6-aminopenicilánico (6-APA). Es un
anillo tiazol con un anillo ß-lactámico
condensado.
•El 6-APA lleva una parte variable acilada en la
posición 6.
 ….Penicilinas

•Son lábiles en medio ácido y pueden ser inactivadas por hidrólisis del anillo
ß-lactámico con penicilinasas.
•Debido a su baja toxicidad pueden ser utilizadas grandes dosis de penicilina,
solamente un pequeño porcentaje de pacientes desarrollan alergia (0,5-2%).
•Las penicilinas naturales son efectivas contra numerosas bacterias Gram +.
•Algunas penicilinas son menos efectivas frente a Bacterias Gram - debido a
que la membrana externa bloquea su paso al interior, aunque las penicilinas
sintéticas y cefalosporinas tienen efecto también frente a Bacterias G -.
•Amoxicilina. Es una amino penicilina. Actúa contra un amplio espectro de
bacterias, tanto Gram positivos como Gram-negativos.
 PROCESO PRODUCTIVO
•Si la fermentación de penicilina se lleva a cabo sin adición de precursores
de la cadena lateral se producen las penicilinas naturales. De estas sólo es
útil la bencilpenicilina (Penicilina G); los otros compuestos deben ser
eliminados durante la etapa de recuperación del producto.
•La fermentación puede ser controlada mejor añadiendo un precursor de
la cadena lateral, de forma que solamente se produzca una penicilina
deseada. Más de 100 penicilinas biosintéticas han sido producidas de esta
forma.
•Utilizando el ácido fenoxiacético, como precursor de la cadena lateral, se
obtiene la penicilina V (fenoximetilpenicilina), que es particularmente
estable en medio ácido y puede suministrarse por vía oral al contrario de lo
que ocurre con la penicilina G que es hidrolizada en el estómago.
 Penicilinas naturales, semisinteticas y sinteticas

•Actualmente la produccion de penicilina, que utilizan cepas de P chrysogenum es de 10-

20 g/l.
•El gran avance en la produccion de penicilina se logro gracias a los metodos de mutacion
y selección de cepas de P. chrysogenum productoras de peniclina, asi como al desarrollo
de medios de cultivo especificos y al avance en las tecnologias de fermentacion.
(Ontiveros, 1996)
 Biosíntesis de penicilina
•Se produce por medio de un dipéptido
compuesto de ácido L-a-aminoadípico (L-a-
AAA) y L-cisteína.
•Luego se une la L-valina por epimerización,
formando del tripéptido d-(L-a-aminoadipil)-L-
cisteinil-D-valina.
•El primer producto de la ciclación del tripéptido
que puede ser aislado es la isopenicilina N,
pero no se conocen las reacciones bioquímicas
que conducen a este intermediario.
•La bencilpenicilina se produce en el
intercambio de L-a-AAA (L-a-aminoadípico) con
ácido fenilacético activado.
•El 6-APA, se excreta en ausencia de un
precursor de la cadena lateral.
•Se conocen varios mecanismos
reguladores en la biosíntesis de la
penicilina.
•El aminoácido lisina es sintetizado a partir de
la vía que origina el ácido L-a-aminoadípico de
forma que la penicilina y la lisina comparten
una ruta biosintética ramificada común.
•La lisina inhibe la síntesis de penicilina
debido a que inhibe por retroalimentación a la
homocitrato sintasa, un enzima implicado en la
síntesis de L-a-AAA. Si el L-a-AAA es
deficiente, no puede sintetizarse penicilina.
•Sin embargo, la retrorregulación por lisina no
parece ser una etapa limitante en la
biosíntesis de penicilina. La biosíntesis de
penicilina se ve afectada por la concentración
de fosfato y también muestra una clara
represión catabólica, particularmente por
glucosa.
 Requerimientos nutricionales.
•Fuente de carbono.
•La fuente de carbono empleada industrialmente es la lactosa, y en la etapa final
se adiciona con glucosa o sacarosa, para inducir la B-galactosidasa
•Fuente de nitrógeno.
•Hasta la década del 70 se usó "corn-steep liquor”, hoy se prefiere el uso de; la
harina de semilla de algodón, extractos y peptonas, y la harina de soja.
•El suministro de amonio y azufre se hace como (NH4)2.SO4, a niveles de 20 mM.
•Cuando el cultivo esta limitado en nitrógeno cesa la producción de penicilina, la
cual se restablece al ser la fuente de carbono la limitante.
•El requerimiento de grandes cantidades de NH4+ puede deberse a su necesidad
en la síntesis de glutamato, requerido para producir valina y cisteína.
•El fósforo se adiciona como sales de fosfato a niveles entre 250 y 500 mg/L.
•Precursores.
•Para obtener un determinado tipo de penicilina, se debe alimentar, un precursor.
• El requerimiento de fenilacetato sódico, es 0.47 g/L para penicilina G, y de
fenoxiacetato de sodio, 0.50 g/L para penicilina V.
 Caracteristicas del proceso
•La producción de penicilina G o V, se hace por cultivo
aerobio en medio líquido, empleando reactores de 40 y
500 m3, con una relación de 0,5 - 1,0 (vol de aire/vol de
líquido-min).
•La mayoría de la masa celular es obtenida en las
primeras 40 horas, luego el crecimiento continúa con
valores mínimos de P, hasta unas 200 horas.
•Los agitadores utilizados son de tipo turbina, y durante el
proceso se controla la temperatura, caudal de aire,
velocidad de agitación, pH y velocidad de agregado de
nutrientes.
•Se han seleccionado cepas de P. chrysogenum, que dan
menor viscosidad en los caldos, incrementando la
transferencia de oxígeno.
•El empleo de técnicas de mejoramiento genético posibilitó
el aumento de rendimientos y la obtención de nuevas
cepas que no producen pigmentos, lo cual facilita la
purificación.
 Purificación de la penicilina
•Extracción.

•La extracción con solventes es la base para la separación y purificación de la

penicilina.
•
•El primer paso es separar el micelio del medio de cultivo, con un filtro rotatorio a
vacío.
•El filtrado rico en penicilina se envía a un intercambiador de calor a 0 - 4 °C,
para detener la degradación enzimática y química durante la posterior extracción.
•La extracción de penicilina se puede realizar en una o más etapas sucesivas,
con una acidificación del caldo filtrado con H2SO4 o H3PO4 al 10% P/V y con el
agregado de un agente surfactante (0,003 - 0,1% P/P, en el solvente),
realizándose luego la concentración en extractores centrífugos.
•El solvente conteniendo penicilina se puede tratar con carbón para separar
pigmentos y otras impurezas.
•Cristalizacion y secado.

•En caso de hacerse la cristalización a partir de un solvente se requiere exceso

de Na+ o K+, y los cristales formados se recuperan en un filtro rotatorio a
vacío.
•Estos cristales son lavados y presecados con un solvente volátil que también
separa impurezas coloreadas.
•El secado definitivo se puede realizar con aire caliente, vacío o calor radiante.
•La penicilina cristalina G o V así obtenida, puede ser convertida a 6-APA para
obtener nuevas penicilinas semisintéticas
Producción de penicilina
Referencias

• Ontiveros Arredondo Carlos. Biosintesis y regulacion de antibioticos

B-lactamicos en penicillium chrysogenum. Instituto Politecnico
Nacional. Elementos, No 24. Vol. 3, pp 23-25. Mexico, 1996.
• Martin J.F y Liras P. Enzymes involved in penicillin, cephalospoin and
cephamicyn biosynthesis. Advances Biochemical Engineering, Editor
Fiechter. A., Springer-Verlag, New York, 1988, pp 153-187.