UNIVERSIDAD DE LA AMAZONIA

FACULTAD DE CIENCIAS BÁSICAS

BIOQUÍMICA

Tercer Examen Parcial de Bioquímica Grupo de Química

Primer Semestre 2017

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Resuelva los siguientes ejercicios Cinética Enzimática. Si requiere de usar Excel y graficar
puede utilizar la herramienta pero debe entregar impresa la respuesta.

1. Ensayo actividad de una enzima. La enzima málico deshidrogenasa cataliza la reducción de

oxaloacetato con NADH, a malato y NAD+. En el siguiente experimento se siguió la desaparición
del NADH, midiendo su absorbancia a 340 nm (e = 6220 M-1 cm-1). Si se emplearon 35 ng de
proteína de la preparación enzimática, en una celda de 3 mL, para este experimento, determine
la actividad de la enzima en unidades internacionales y la actividad específica de esta
preparación.

tiempo (min) 0.00 0.10 0.20 0.30 0.50 0.85 1.50 2.00
Absorbancia 1.34 1.28 1.26 1.22 1.16 1.10 1.02 0.99

2. Efecto de la concentración de enzima. En el siguiente experimento con la enzima fosfatasa

ácida de semillas de trigo germinadas se varió la conc entración de la enzima en celda a dos
concentraciones de sustrato y se obtuvieron los resultados siguientes:

[enz] (ml) [FP] 0.1 mM [FP] 10 mM

Vel (nmol/min) Vel (nmol/min)
5 1.920 6.307
10 4.059 13.169
15 5.956 19.145
20 7.766 25.694
25 9.479 32.282
30 11.844 37.882

a. ¿Cómo varia la velocidad de la reacción en función de la cantidad de enzima añadida?

b. ¿Qué pasa si dividimos la velocidad registrada por la cantidad de enzima añadida al ensayo?
c. ¿Utilizando la ecuación de Michelis-Menten explique sus respuestas a las preguntas
anteriores?

3. Cinética de una enzima. La actividad de la Acetil-CoA carboxilasa, medida con tres diferentes
concentraciones de enzima y a diferentes concentraciones de sustrato fué la siguiente:
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BIOQUÍMICA

[Enz] (mg de proteína) 0.1 0.2 0.5

[AcetilCoA] (mM) ¯ Vel (mmol/ min)
0.05 0.275 0.546 1.373
0.14 0.482 1.001 2.502
0.23 0.580 1.185 2.891
0.32 0.642 1.385 3.463
0.50 0.755 1.494 3.656
0.59 0.766 1.497 3.810
a. Calcular para cada experimento el valor de Km y el valor de Vmax.
b. ¿Son los valores de Km y Vmax iguales o diferentes?
c. Explique si lo que observó es lo que esperaba obtener
d. Sabiendo que la enzima pesa 220 000 g/mol, haga una gráfica de Vmax vs mmol de
enzima.
e. ¿Qué representa la pendiente de esta gráfica?
f. ¿En qué se parece el valor anterior a la Actividad específica = Vmax/mg de proteína
en mmol min-1 mg de enzima-1?
g. ¿Qué pasa con la medida de actividad específica cuando la enzima no está pura?

4. Problema sobre un ensayo de actividad enzimática . Considere a la enzima Invertasa, que

cataliza la hidrólisis de Sacarosa a fructosa y glucosa. Esta enzima posee una Km para sacarosa
de 0.5 mM y una constante catalítica de 175 min -1. Si se mide su actividad en presencia de 0.25
mM de sacarosa con 25 µmol de enzima en la celda.

a. ¿Qué velocidad de catálisis se observará?

b. ¿Qué fracción representa esto de la Vmax que se podría calcular en esta reacción
si se variase la cantidad de sacarosa?
c. ¿Cuánto sustrato habría que añadir para que la velocidad observada alcance
0.95% de la Vmax?
d. ¿Qué importancia podría tener esto para la posible aplicación industrial de la
enzima? - Explique sus respuestas.