Identificación de Flavonoides, Compuestos Fenólicos,

Taninos y Lactonas Sesquiterpénicas en extractos orgánicos

de Matricaria Chamomilla (Manzanilla)
Carolina Rocio Alfaro Molina,[1] Rocío del Pilar Condori Solis,[1] María José García Tejada,[1] Mabel Clarita
Pinto Coronel,[1] Alexandra Sucapuca Palma[1]
[1]
Laboratorio de Farmacognosia II, E.P. Farmacia y Bioquímica, Facultad de Ciencias Farmacéuticas Bioquímicas y
Biotecnológicas; Campus Universidad Católica Santa María, Arequipa, PERÚ.

ABSTRACT
Introduction: Matricaria chamomilla is an annual herbaceous plant 60 cm tall, aromatic, with a thin root, branched
stem, short petiole leaves and with flower heads belonging to the family Astereaceae. It is emmenagogue (stimulates
menstruation), anti-inflammatory, antiseptic and antalgic (relieves pain) as in cases of arthritis. Objectives: To extract
and identify the flavonoids, phenolic compounds, tannins and sesquiterpene lactones present in leaves and flowers of
Matricaria Chamomilla. Materials and methods: The dry vegetal material was subjected to percolation with ethanol,
the extracted extract was re-extracted with different solvents (Benzine of petroleum, acetate of ethyl and n-butanol)
obtaining 3 fractions, which were studied by means of CCF in order to determine flavonoids A second extraction was
made with fresh sample in a reflux system, the extract was divided into test tubes for the various reactions. The
phenolic compounds were identified with NaOH and FeCl3, the sesquiterpene lactones with the ferric hydroxamate
assay, Tollens reagent and Baljet reagent. For the tannins, reactions were performed with 5% K2Cr2O7, (CH3COO)
2Pb 5%, FeCl3 1% and KI 5%. Results: The Rf given by the chromatography for flavonoids were: 0.94 for quercetin
and 0.28 for routine. In the identification reactions, it was positive for sesquiterpene lactones, phenolic compounds and
tannins. Conclusions: The presence of Flavonoids was verified thanks to CCF: Quercetin and Rutin. Identification
reactions for Sesquiterpene Lactones, Phenolic Compounds and Tannins showed mostly positive results, except for the
reaction for gallic tannins with KI.
Keywords: Matricaria Chamomilla, flavonoids, phenolic compounds, sesquiterpene lactones, tannins.

RESUMEN
Introducción: Matricaria chamomilla es una planta herbácea anual de 60 cm de alto, aromática, de raíz delgada, tallo
ramificado, hojas de pecíolo corto y con cabezuelas florales que pertenece a la familia Astereaceae. Es emenagoga
(estimula la menstruación), antiinflamatoria, antiséptica y antiálgica (alivia el dolor) como en casos de artritis.
Objetivos: Extraer e identificar los flavonoides, compuestos fenólicos, taninos y lactonas sesquiterpénicas presentes
en hojas y flores de Matricaria Chamomilla. Materiales y Métodos: Se sometió el material vegetal seco a percolación
con etanol, el extracto obtenido fue re-extraído con diferentes solventes (Bencina de petróleo, acetato de etilo y n-
butanol) obteniendo 3 fracciones, las cuales se estudiaron mediante CCF a fin de determinar flavonoides. Se realizó
una segunda extracción con muestra fresca en un sistema de reflujo, el extracto fue dividido en tubos de ensayo para
las diversas reacciones. Los compuestos fenólicos se identificaron con NaOH y FeCl 3, las lactonas sesquiterpénicas
con el ensayo de hidroxamato férrico, reactivo de Tollens y de Baljet. Para los taninos se realizaron reacciones con
K2Cr2O7 5%, (CH3COO)2Pb 5%, FeCl3 1% y KI al 5%. Resultados: Los Rf dados por la cromatografía para
flavonoides fueron: 0.94 para la quercetina y 0.28 para la rutina. En las reacciones de identificación dió positivo para
lactonas sesquiterpénicas, compuestos fenólicos y taninos. Conclusiones: Se comprobó gracias a CCF la presencia de
Flavonoides: Quercetina y Rutina. Las reacciones de identificación para Lactonas Sesquiterpénicas, Compuestos
Fenólicos y Taninos arrojaron en su mayoría resultado positivos, salvo la reacción para taninos gálicos con KI.
Palabras Clave: Matricaria Chamomilla, flavonoides, compuestos fenólicos, lactonas sesquiterpénicas, taninos.
1.- INTRODUCCIÓN (Marco Teórico)
Matricaria chamomilla es una planta herbácea anual de 60 cm de alto, aromática, de delgada raíz, tallo ramificado, hojas de pecíolo corto y
con cabezuelas florales que pertenece a la familia Astereaceae. Toda la planta exhala un olor penetrante y agradable con pétalos blancos y
centro amarillo. Gracias a la presencia de flavonoides en sus flores y consecuentes propiedades antioxidantes de algunas polihidroxiflavonas
es que la manzanilla se usa en la subsistencia de grasas o jugos de frutas, trastornos del sistema respiratorio, como quelante de metales y
muchas otras propiedades ventajosas para la salud humana. En el Perú crece en cualquiera de las regiones mientras se ubique de preferencia
entre 500-3000 m.s.n.m. La floración se da a partir de abril y continúa hasta la primavera. 1
En medicina tradicional las flores son usadas en infusión como antiespasmódica y sedante; además posee propiedades calmantes, tónicas,
digestivas, febrífugas, anti neurálgicas, carminativas.2 Esta comúnmente indicada para dolores abdominales, cólicos intestinales, hiper-
meteorismo, afecciones nerviosas, cistitis, reumatismo, inflamaciones bucales, furúnculos, abscesos, eczemas, conjuntivitis, hemorroides y
enfermedades infecciosas. Sus propiedades medicinales se conocen desde la antigüedad ya que se utilizaba para combatir ataques de nervios
y fiebre.3 Hoy la manzanilla es reconocida por sus propiedades calmantes y relajantes. Es emenagoga (estimula la menstruación),
antiinflamatoria, antiséptica y antiálgica (alivia el dolor) como en casos de artritis. 4 De esta planta (de las flores) pueden obtenerse dos
derivados: el aceite esencial y los extractos hidro-alcohólico, ambos tienen usos medicinales, alimenticios y cosméticos. El extracto hidro-
alcohólico, es hidrosoluble, se usa comúnmente como como antiinflamatorio, antipirético, antiespasmódico, ansiolítico, vulnerario,
desodorante y antibacteriano. El contenido de flavonoides en el extracto hidroalcohólico de flor de manzanilla es el factor de calidad.5

La Matricaria chamomilla tiene diferentes componentes químicos, entre los más destacados son el mirceno con 0.26%, el 1,8-cineol con
0.57%, el ch-azuleno con 1.05%, el farneseno con 15.42%, el óxido de bisabolol con 46.11% entre otros. (Tabla N° 1)

Tabla N°1

Tabla N°2
 Luteolol
 Apigenol
FLAVONOIDES  Quercetina

 Matricina
 Matricarina
 Precursoras del camazuleno alfa-bisabolol
 Óxidos de bisabolol A, B y C
LACTONAS  Óxido de Bisabolona
SESQUITERPÉNICAS  Sales minerales
 Umbeliferona
 Herniarina
CUMARINAS  Mucilagos Urónicos

Entre los principales metabolitos de la Matricaria chamomilla tenemos a los flavonoides como luteolol, apigenol y quercetina; lactonas
sesquiterpénicas como la matricina, matricarina, precursoras del camazuleno alfa-bisabolol, óxidos de bisabolol, óxido de bisabolona y sales
minerales; por último, tenemos cumarinas como umbeliferona, herniarina, mucilagos urónicos. (Tabla N°2). La Matricaria chamomilla
también presenta compuetsos fenólicos y taninos.
2.- MATERIALES Y MÉTODOS
2.1.- Material Vegetal
El material vegetal seco (hojas y flores) de Matricaria Chamomilla (Manzanilla) fue obtenido del Mercado San Camilo, Arequipa, cuya
procedencia es Lambayeque. Los tallos fueron eliminados permaneciendo, para su uso, las ramas más delgadas, las hojas, los pedúnculos de
las flores en su mayoría y partes pulverizadas de flores. Esto para el caso de la extracción por percolación y posterior fraccionamiento. En el
caso de la extracción por reflujo se consiguió material vegetal fresco que fue seleccionado de la misma manera.

2.2.- Extracción
2.2.1.- Elaboración del extracto etanólico de Matricaria Chamomilla mediante Percolación

La elaboración del extracto fue hecha utilizando la técnica de percolación, para ello 10 g del material vegetal seco, previamente seleccionado
con cuidado, fueron puestos a maceración en 200 ml de etanol 96° en un beaker de 250 ml de capacidad durante 24 horas. Se diseñó el
sistema de lixiviación en una pera de decantación en la cual se colocó el material ya macerado, 50 ml fueron obtenidos a fin de tener una
solución de extracto etanólico al 20% que se llevó a sequedad consiguiendo un extracto seco.

2.2.2.- Fraccionamiento del Extracto etanólico

El fraccionamiento fue realizado con 3 solventes orgánicos de diferente polaridad (Bencina de Petróleo, Acetato de etilo y n-butanol)
iniciando el primer fraccionamiento con 10 ml de Bencina de Petróleo y el extracto seco (extracción sólido-líquido), de esta primera fracción
se separó la fase líquida del residuo mediante filtración.

El residuo sólido fue reincorporado y lavado con un total de 20 ml de agua destilada, a esta fase acuosa se le agregaron 10 ml de Acetato de
Etilo y se procedió a la re-extracción mediante suaves movimientos en la pera de decantación. Se separó la fase acuosa de la orgánica, esta
última fue almacenada siendo el segundo fraccionamiento. Para el último fraccionamiento se hizo uso de la fase acuosa y 10 ml de n-butanol
haciendo una extracción líquido-líquido.

Finalmente se consideraron las 3 fracciones de la siguiente manera: Primera fracción (En Bencina de Petróleo), Segunda fracción (Acetato de
Etilo) y Tercera fracción (Butanólica). Se refrigeraron las fracciones a una temperatura estimada de 4°C

2.2.3.- Digestión a Reflujo

Se elaboró nuevamente un extracto etanólico esta vez con el material fresco puesto a reflujo. Para esto se pesaron 40 g del material vegetal
fresco que fueron dispuestos a dos sistemas simultáneos de reflujo cada uno utilizando 20 g de muestra en 100 ml de etanol. Pasados 15
minutos de ebullición se procedió a filtrar y concentrar la muestra a 7 ml necesarios para las futuras identificaciones de compuestos
fenólicos, lactonas sesquiterpénicas y taninos.

2.3.- Identificación de Flavonoides

Los extractos fueron evaluados mediante CCF, con sílica gel, empleando como fases móviles: acetato de etilo – ácido acético – ácido
fórmico – agua en proporciones 2 – 0.2 – 0.2 – 0.5 para la identificación de flavonoides. Los patrones usados fueron: rutina y quercetina
sembradas por separado para la comparación. Mediante el perfil cromatográfico realizado se observó en cuál de los solventes se captó mejor
el estándar.

2.4.- Identificación de Lactonas Sesquiterpénicas

2.4.1.- Ensayo de hidroxamato férrico

En un tubo de ensayo se mezcló hidroxilamina clorhídrica e hidróxido de potasio, la mezcla se agregó a otro tubo con 1 ml del extracto
etanólico obtenido por reflujo. Se calentó hasta la obtención de un color naranja, una vez enfriado se aciduló con HCl finalmente se puso a
reacción con FeCl3 siendo positivo en caso diese coloración violeta.

2.4.2.- Ensayo de Baljet

Se preparó el reactivo de Baljet con NaOH y ácido pícrico saturado, y se agregó 1 ml de reactivo a 1 ml de extracto etanólico. La
identificación positiva es demostrada por colores que varían entre naranja y rojo oscuro.

2.4.3.- Prueba de Tollens

El extracto fue tratado en un tubo de ensayo 1:1 con reactivo de Tollens. Para la reacción positiva se presenta un espejo de plata.

2.5.- Identificación de Compuestos Fenólicos

2.5.1.- Ensayo con Cloruro Férrico

A partir de 1 ml de extracto etanólico se realizó una prueba de identificación cualitativa colorimétrica para compuestos fenólicos, en la cual
se utilizó el método de cloruro férrico agregando 0.5 ml (FeCl3 al 5%). Un cambio de color azul o verde oscuro indica la presencia de
compuestos fenólicos.

2.5.2.- Ensayo con Hidróxido de Sodio

Una segunda prueba de identificación cualitativa fue llevada a cabo con 1 ml del extracto y 1 ml de NaOH 0.01N, la coloración positiva varía
entre un color más amarillento a uno anaranjado rojizo.

(mioooooooooo)
IDENTIFICACION DE METABOLITOS:
A.-LACTONAS SESQUITERPÉNICAS
PROCEDIMIENTO:

1.-Ensayo con hidroxamato férrico: a 1ml del extracto de Matricaria chamomilla le agregamos
etanol y posteriormente una solución de clorhidrato de hidroxilamina 10% y KOH 0,5N.
Calentamos la mezcla hasta que aparezca una espuma de color transparente. Se enfría y
acidula con HCl 20%, luego se añade cloruro férrico 1% y observamos la coloración.
2.-Ensayo de Baljet: mezclamos dos soluciones antes de poner en contacto con 1ml del
extracto (Solucion A: 1ml de ácido pícrico sol.saturada y solución B: 1ml de NaOH 0,01N).
Luego observamos la coloración.
3.-Prueba de Tolles: Agregamos el Rx. De Tollens (AgNO3/NaOH/Amoniaco) a 1ml del extracto
y observamos.

RESULTADOS:
1.- El ensayo con el hidroxamato férrico es positivo ya que observamos cloración violeta oscuro
y en teoría debería ser violeta.
2.- la identificación con el ensayo de Bajlet dio positivo a serquiterpenlactonas ya que
teóricamente debe dar coloraciones de naranja a rojo oscuro y el nuestro dio color naranja.
3.- la prueba de Tollens dio positivo a lactonas α,β y β,γ- insaturadas formando un pequeño espejo
de plata.

B.-TANINOS:
PROCEDIMIENTO:
1.- K2Cr207: a 1ml del extracto añadimos 1ml de K2Cr207 0,1N.
2.- (CH3-COO)2 Pb: a 1ml del extracto añadimos 1ml de (CH3-COO)2 Pb al 5%.
3.- FeCl3: a 1ml del extracto añadimos 1ml de FeCl3 al 1%.
4.- KI: a 1ml del extracto añadimos 1ml de KI al 20%.

RESULTADOS:
1.- positivo para taninos con la identificación con K2Cr207 dando una coloración parda-
amarillenta.
2.- La identificación con el (CH3-COO)2 Pb nos dio positiva formando un precipitado.
3.- positivo para taninos galicos con la identificación con FeCl3 dando una coloración azul-
negruzca.
4.-la identificación con el KI nos dio positiva para taninos gálicos con una coloración leve de
rosado-naranja.

Identificación de Taninos
Reacción con Dicromato de Potasio
A 1 ml del extracto se le agregó 1 ml de K 2Cr2O7 al 5% reportándose la reacción como positiva con un precipitado pardo
amarillento.

Reacción con Acetato de Plomo

A 1 ml del extracto se añadió 1 ml de (CH3COO)2 Pb 5%
Esta reacción es positiva con la formación de precipitado.

Reacción con Cloruro Férrico

Esta reacción fue utilizada para diferenciar taninos gálicos de condensados. A 1 ml del extracto se le agregó 0.5 ml de FeCl 3 al
1%
La diferenciación es dada gracias a la coloración.
Taninos gálicos: azul negrusco
Taninos condensados: marrón o verde
Reacción con Yoduro de potasio
A 1 ml de la muestra se agregó 0.5 ml de KI al 5%
Los resultados positivos se evidencian con coloraciones de rosado a naranja.
RESULTADOS
Identificación de Flavonoides
Se sembró los siguientes extractos: bencina de petróleo, acetato de etilo, y n-butanol, en ese mismo orden, obteniendo los
siguientes resultados de Factor de Referencia:

a) RF: 4.0/4.2 = 0.95 bencina de petróleo

b) RF: 1.5/4.2 = 0.35 acetato de etilo
c) RF: 1.4/4.2 = 0.33 n-butanol

1 2 3
Fig. 1: Perfil cromatográfico CCF del extracto etanólico de Matricaria Chamomilla (Manzanilla), empleando (1) bencina de petróleo,
(2) acetato de etilo, (3) n-butanol.

Para los estándares: rutina y quercetina, se obtuvieron los siguientes RF

a) RF: 3.6/3.8 = 0.94 quercetina

b) RF: 1.1/3.8 = 0.28 rutina
 1 2
Fig. 2: Perfil cromatográfico CCF empleando patrones de (1) quercetina y (2) rutina.

Identificación de Lactonas Sesquiterpénicas, Compuestos Fenólicos y Taninos

Tabla 3. Ensayo fitoquímico

Metabolito Reacción Coloración Identificación

Hidroxamato Férrico Violeta +

Lactonas
Baljet Naranja rojizo +
sesquiterpénicas
Tollens Espejo de plata +

Cloruro Férrico Azul oscuro +

Compuestos Fenólicos
Hidróxido de Sodio Coloración amarillenta +

Precipitado Pardo
Dicromato de Potasio +
amarillento

Taninos Acetato de Plomo Precipitado +

Cloruro Férrico Azul oscuro + para taninos gálicos

Yoduro de potasio Amarillo tenue -

Ensayo de hidroxamato férrico

Fig. 3 reacción positiva para lactonas sesquiterpenicas con hidroxamato férrico

Ensayo de Baljet
Fig. 4 reacción positiva para lactonas sesquiterpenicas con Baljet
Prueba de Tollens
Fig. 5 reacción positiva para lactonas sesquiterpenicas con Tollens

Ensayo con Cloruro Férrico

Fig. 6 reacción positiva para compuestos fenólicos con cloruro férrico

Ensayo con Hidróxido de Sodio

Fig. 7 reacción positiva para compuestos fenólicos con hidróxido de sodio
Reacción con Dicromato de Potasio
Fig. 8 reacción positiva para taninos con dicromato de potasio

Reacción con Acetato de Plomo

Fig. 9 reacción positiva para taninos con acetato de plomo

Reacción con Cloruro Férrico

Fig. 10 reacción positiva para taninos galicos con cloruro férrico
Reacción con Yoduro de potasio
Fig. 11 reacción negativa para taninos con yoduro de potasio

CONCLUSIONES

 Mediante los perfiles cromatográficos realizados a los extractos etanólicos de la especie vegetal M. Chamomilla y el
recorrido observado por el extracto de bencina de petróleo, permite establecer la posible presencia de flavonoides con la
fase móvil en la figura 1.
 Los perfiles cromatográficos para la M. Chamomilla muestran manchas cuyos parámetros de desplazamiento en la placa
son semejantes a la figura 2.
 Las reacciones de identificación para Lactonas Sesquiterpénicas, Compuestos Fenólicos y Taninos arrojaron en su
mayoría resultado positivos, salvo la reacción para taninos con yoduro de potasio.

()otro trabajo()

3 conclusiones

En este trabajo de investigación pudimos realizar la extracción, identificación y cuantificación de los metabolitos secundarios conocidos
como compuestos fenólicos, flavonoides y alcaloides por el método de maceración y percolación posteriormente para la cuantificación de
alcaloide se realizó el método analítico de retrovaloracion además de realizar la separación por fases con 10 mL de cloroformo.

Siendo la principal característica en esta práctica sus principios como cardiotónico, para lo cual se realizo las pruebas
cualitativas de identificación descritas anteriormente. Para la cuantificación de alcaloides se utilizaron 6.0g de hojas de palma
real desecada en la estufa, y llevadas a retrovaloracion para su cuantificación de alcaloide lo cual nos generó un gasto de
18.5mL de hidróxido de sodio 0.02 N, lo cual llevándolo a concentración.
0.02 meq x 18.5 =0.37 meq --------------- NaOH 0,02N

0,02 meq x 20ml= 0.4 meq ---------------- H2SO4 0,02N

0,4 – 0,37= 0,03 meq de alcaloides totals en 6.0g de las hojas de la planta Tanacetum vulgare L. ‘palma real’.

4. Discusiones
Los resultados de nuestra investigación los comparamos con los resultados de la tesis realizada por Br. Chávez Gonzales, Luz Marina y Br.
Gutiérrez Condori, Darwin Armando, en la Facultad De Farmacia Y Bioquímica de la Escuela Académico Profesional De Farmacia Y
Bioquímica de la Universidad Wiener quienes realizaron uno de los pocos estudios con respecto a la identificación de alcaloides y su
respectiva cromatografía en capa fina en la especie vegetal Tanacetum vulgare L. ‘palma real’ de nuestra parte realizamos la cuantificación
de alcaloides por el método de retrovaloracion el cual no se describe en la tesis sin embargo en ella presentan métodos mas complejos como
HPLC y cromatografía de gases, sin embargo pudimos encontrar las similitudes necesarias con respecto a la identificación de alcaloides,
compuestos fenólicos y flavonoides.

REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS
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AISLADO DE CAVIA PORCELLUS; Kevin Cosavalente Burgos, Vilma Guardia Casas, Iván Miguel Quispe Díaz, Segundo
Ruiz Reyes, Edmundo Venegas Casanova, Armando Cuéllar Cuéllar. REV. PERSPECTIVA 17 (3), 2016: 314-325 - ISSN
1996-5389
2.-ACEITE ESENCIAL DE Matricaria chamomilla L. (MANZANILLA); Qriselda A. G. MALINSKAS, María N. SANTI de
BONGIOANNI y Juan A. RETAMAR.Anales de SAIPA - Sociedad Argentina para la Investigación de Productos Aromáticos
JORNADAS NACIONALES DE ACTUALIZACIÓN SOBRE RECURSOS AROMÁTICOS Y MEDICINALES Volumen IX -
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3.-ACTIVIDAD CITOTÓXICA Y LEISHMANICIDA IN VITRO DEL ACEITE ESENCIAL DE MANZANILLA
(MATRICARIA CHAMOMILLA); Yesmit Karina Ríos R., Astrid Carolina Otero J., Diana Lorena Muñoz H., Mónica
Echeverry R., Sara María Robledo R., Maira Alejandra Yepes C. Rev. Colomb. Cienc. Quím. Farm. Vol. 37 (2), 200-211, 2008
4.-Medicamentos Tradicionales Herbarios: https://www.minsal.cl/portal/url/item/7d98ad06d34283d5e04001011f016dbb.pdf
5.-OPTIMIZACIÓN DEL PROCESO DE EXTRACCIÓN DE FLAVONOIDES DE FLOR DE MANZANILLA
(MATRICARIA RECUTITA L.); José C. Meneses–Reyes, Ramón M. Soto–Hernández, Teodoro Espinosa–Solares y Martha E.
Ramírez–Guzmán. Agrociencia vol.42 no.4 México may./jun. 2008

6.- EVALUACIÓN FITOQUÍMICA DE HOJAS DE EXCOECARIA LUCIDA SW. (AITÉ) (EUPHORBIACEAE) Y AISLAMIENTO E
IDENTIFICACIÓN DE UN HEMITERPENOIDE; MSc. Ania Ochoa Pacheco, DrC. Julio César Escalona Arranz, DrC. Josean
Fechine Tavares, DrC. Marcelo Sobral Da Silva; Rev Cubana Plant Med vol.20 no.1 Ciudad de la Habana ene.-mar. 2015

PRUEBAS GENERALES PARA LACTONAS SESQUITERPÉNICAS Y LACTONAS INSATURADAS; Enviado por orlando_omsl22 • 23
de Febrero de 2016
UNIVERSIDAD INTERAMERICANA PARA EL DESARROLLO ESCUELA PROFESIONAL DE FARMACIA Y
BIOQUIMICA CURSO : FARMACOGNOSIA TEMA : “DETERMINACIÓN DE TANINOS” PRÁCTICA : N° 08 CICLO : V
ALUMNOS :  Toledo Medina Franklin Lima – Perú 2013