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OBJETITO
MARCO TEÓRICO
Los medios semisólidos e preparan en tubos, se inoculan con aguja de siembra (asa
recta) o pipeta pasteur; en este último caso es necesario calentar el medio y cuando
se encuentra en estado líquido y a una temperatura de aproximadamente 42ºC se
agrega el inóculo, se homogeniza y se deja solidificar. Estos medios se emplean
para estudiar la movilidad de los microorganismos y para favorecer la separación de
microorganismos con diferentes requerimientos de oxígeno.
Técnicas de siembra:
En esta siembra se debe tener mayor cuidado, puesto que un contaminante del
aire puede superar en crecimiento al microorganismo de estudio, por lo tanto, se
deber tomar las siguientes precauciones:
Mantener inclinado el tubo que contiene el cultivo que se va a transferir, de
modo que los microorganismos del aire caigan en las paredes externas del
tubo y no en la bica de este.
Los tapones se deben mantener en la mano contraria a aquella que
contiene el tubo, sosteniéndolos entre el dedo menique, el anular y el dedo
del corazón. Nunca deben colocarse sobre la mesa de trabajo o algún otro
lugar.
Flamear la boca de tubo antes de cerrarlo después de la siembra o
inoculación.
Esterilizar el asa adecuadamente (toda porción que entra en contacto con
el medio de cultivo)
Sumergir el asa en el medio de cultivo, sin tocar las paredes del tubo.
Enfriar el asa en una parte del medio, sin deteriorar el mismo.
Después de realizar la siembra, esterilizar el asa y flamear nuevamente la
boca del tubo.
Al sembrar trabajar en cámara de flujo laminar o en su defecto con
mechero Bunsen.
En las siembras por picadura y mixtas, evite romper el medio de cultivo, así
como, utilice asas totalmente rectas.
(HERNANDEZ, 2003)
Siembra en tubos por estrías simples
Técnicas de aislamiento
En esta técnica se hacen crecer los microorganismos en tubos, cada uno con una
concentración diferente, y se evalúa el tubo en el que las colonias crecieron en
forma separada.
Por último, de esta dilución, se toma una muestra de las colonias y se siembra en
una placa de Petri, por rayado, para confirmar si el cultivo está puro. La
conformación de pureza se puede realizar por observación a simple vista
(colonias de igual morfología), por observación microscópica o mediante pruebas
bioquímicas.
Diluciones en serie
Esta técnica se aplica cuando se conoce de antemano que el microorganismo de
interés se encuentra en mayor cantidad que los demás. Para llevarla a cabo, se
preparan varias diluciones de la muestra y se incuban en el medio de cultivo
adecuado para que crezca este microorganismo; así, se logra que en alguna de
las diluciones solo él aparezca. Es necesario reconfirmar su presencia, utilizando
el método de siembra en placa de Petri por rayado. (Brock, 1998)
Un medio se formula para suministrar todos los nutrientes que un microorganismo necesita para
crecer, pero esto no es suficiente. En el laboratorio, también es preciso aportar las condiciones
ambientales adecuadas. Tanto la temperatura como el pH deben estar dentro del intervalo
apropiado; con respecto al oxígeno, según el caso, será aportado o eliminado.
Temperatura
Cada especie bacteriana se caracteriza por un intervalo de temperatura en el cual presenta su
crecimiento óptimo. Pero, en general, los microorganismos crecen más rápidamente cuando se
aumenta la temperatura, sin llegar hasta un punto en el cual se dañan las proteínas. Así pues,
para favorecer un crecimiento rápido, las bacterias se suelen cultivar a la temperatura más alta
a la cual crecen bien, y que suele ser la de su medio natural. Escherichia coli sp la bacteria que
más frecuentemente se utiliza en investigación, se encuentra en el intestino humano y de otros
mamíferos. Este microorganismo crece óptimamente a 37ºC, la temperatura del cuerpo
humano.
pH
El pH óptimo depende de la especie bacteriana, pero cada una de ellas crece en un intervalo de
pH relativamente estrecho. Casi todas las bacterias crecen mejor a valores de pH próximos a la
neutralidad, en el intervalo de 6,5 a 7,5. Sin embargo, los hongos crecen mejor entre 4,5 y 6,0.
Oxígeno
Una vez que se obtiene un cultivo axénico, hay que mantenerlo en el laboratorio para poder
trabajar con él o intercambiarlo con otros científicos. Esto se puede llevar a cabo haciendo
resiembras en un medio fresco, mensualmente o con otra periodicidad. Pero un cultivo puro
también puede mantenerse viable durante años sin hacerlo crecer periódicamente. A los cultivos
que se mantienen en el laboratorio para su estudio y como referencia se les denomina cultivos
de colección. Muchos laboratorios poseen una colección de cepas que se han aislado en el
mismo o que han obtenido de las denominadas colecciones de cultivos tipo, que son
organizaciones que mantienen un número enorme de cultivos microbianos como un servicio a
los microbiólogos. Existen muchas técnicas de mantenimiento de los cultivos puros, pero casi
todas consisten en una desecación (eliminación del agua) o en un almacenamiento a baja
temperatura.
Para almacenar un cultivo empleando bajas temperaturas, se mezcla con sustancias protectoras,
como la leche descremada, el glicerol, o el dimetilsulfóxido (DMSO). Los tubos de ensayo se
sellan y se almacenan por debajo de los - 50oC, en nitrógeno líquido o en un ultracongelador,
capaz de alcanzar tan bajas temperaturas. (Ingraham, 1998)
La estimación por el método del Número Más Probable (NMP) es muy adecuado para
determinar bacterias anaerobias, porque permite mantener un ambiente anaerobio dentro de los
tubos, sin necesitar de sistemas anaerobios más complejos como cámaras o jarras anaerobias.
En un principio este método fue empleado para estimar el número de microorganismos en
muestras de alimentos y aguas. Sin embargo, se ha demostrado que también puede ser
aplicado para la determinación de microorganismos aerobios y anaerobios en lodos, sedimentos
marinos y suelos contaminados.
5. ¿De qué manera se pueden preservar cepas puras por largos períodos?
Existen varios métodos para la conservación de los microorganismos-, todos buscan que las
células sufran el daño mínimo y se preserven por el máximo periodo posible. Los cuatro
procedimientos generales son:
MATERIALES Y REACTIVOS
1. Cajas Petrie
2. Encubadora De Bacterias
3. Pipetas De 1 Ml Y 10 Ml
4. Erlenmeyer De 500 Ml
5. Espátula
6. Ansa De Platino
7. .Agua Destilada
8. Muestra A Analizar
9. Tubos De Ensayo De 10 Y 20 Ml
10. Mechero De Bunsen
11. Algodón Y Gasa
CONCLUSION
El desarrollo de microorganismos anaerobios facultativos en un medio líquido se manifiesta
a través de la turbidez.
El crecimiento bacteriano realizado en la siembra en placas por estría no fue claramente
observable.
BIBLIOGRAFÍA
Brock, T. D. (1998). Biología de los microorganismos, 8va Edición. Barcelona: Omega.
HERNANDEZ, A. (2003). Microbiología industrial. Primera edición. San José, Costa Rica:
EUNED.
Ingraham. (1998). Introducción a la microbiología. Barcelona: Reverté.
KONEMAN, E. A. (2006). Diagnostico Microbiológico. Sexta edición. Argentina: Médica
Panamericana.
MADIGAN. (2009). Biología de los microorganismos. Madrid: Pearson-Prentice Hall.
Prescott, H. K. (1999). Microbiología. Madrid: Mc Graw Hill Interamericana.
ROJAS, A. (2011). En Conceptos y práctica de microbiología general. Palmira: Universidad
Nacional de Colombia.
SWANSON M. J. Katherine, R. L. (2001). Microbiologia general. American Public Health
Association.