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LABORATORIO DE BIOTECNOLOGÌA
PRÁCTICA N°4
técnicas de siembra
“ ”
grupo n°1
PARALELO I
Integrantes:
Santiago Achote
Fátima Carvajal
Gustavo Cubas
Francisco González-Valerio
Emerson Vizuete
2018-2018
RESUMEN
PALABRAS CLAVE
Siembra por dilución: Se toma el tubo de ensayo con medio líquido, como el caldo
simple. Se toma el material a diluir y se siembra en el tubo con el uso del asa cargada
con el material bacteriológico, se agita, con movimientos moderados.
Siembra por inmersión: se coloca el inóculo en una placa o caja de Petri y sobre el
mismo se vierte el medio de cultivo previamente fundido. Este método se utiliza para
microorganismos aerobios. (Bonner & Castro, 1974)
Siembra en doble capa: se procede de la misma manera que por inmersión. Una vez
solidificado el medio se vierte una cantidad extra de medio necesaria para cubrir la
capa anterior (generalmente 10 ml. aprox.).
Siembra en superficie: se vierte sobre una placa de Petri el medio de cultivo fundido,
se deja solidificar y se coloca sobre la superficie el inóculo. Con ayuda de una espátula
de Drigalsky se extiende el inóculo hasta su absorción total por el medio de cultivo.
Este tipo de siembra se recomienda para microorganismos aerobios estrictos.
Siembra en estría: se vierte sobre una placa de Petri el medio de cultivo fundido y se
deja solidificar. (Dority, s.f)
3. PARTE EXPERIMENTAL
3.1. Material y Equipos
Asas de Drigalsky
Lámpara de alcohol
Pipeta R:0-1[ml]
Caja Petri
Hisopos
Asas de cultivo.
3.2. Sustancias y reactivos
Medios de cultivo
Agua destilada (H2O)(l)
3.3. Procedimiento
A) Siembra en masa.
3.3.1. Se deposita 1mL de la muestra (si es líquida) en placas estériles, vacías.
3.3.2. Se agrega a cada placa 15 a 20 mL del medio de cultivo a emplear, previamente
fundido y manteniendo a unos 47C.
3.3.3. Se agita moviendo la placa tapada sobre la superficie de la mesa con
movimientos circulares y de vaivén. (siempre sin levantar la placa de la mesa).
3.3.4. Se deja solidificar el agar y se llevan las placas a incubar.
3.3.5. Pasado el tiempo de incubación las colonias habrán crecido dentro del agar.
Elegir de entre todas las placas donde existan 30 y 300 colonias/placa.
Para realizar el contaje, se utiliza un cuenta-colonias; se pone la placa Petri con la base
hacia arriba, y si es preciso, se divide en sectores marcando mediante un lápiz graso a
lo largo de los diámetros. El número de unidades formadoras de colonia o UFC/g (o mL
en muestras liquidas) de la muestra original será:
Número de UFC/g = Número de colonias x factor de dilución 6.
B) Siembra en superficie.
3.3.6. Se deja solidificar primero y luego se coloca 0,1 ml de la muestra y se expande
con una asa de Drigalski. Se deja secar durante 3 minutos y se incuban.
C) Técnicas para medio sólido. (Caja Petri).
3.3.7. Agotamiento por estría
3.3.8. Se esteriliza el asa de cultivo.
3.3.9. Se levanta la tapa lo suficiente para introducir el asa o se coloca la tapa de la
caja volteada muy cerca tanto del cultivo como de la lámpara de alcohol.
3.3.10. Se esteriliza el asa en calor seco y se deja enfriar.
3.3.11. Se introduce el asa en la muestra.
3.3.12. Se inicia la estría en el borde que queda al lado izquierdo del operador.
3.3.13. Se gira la caja Petri 45 grados en modo horario y se estría cada cuadrante.
3.3.14. Al finalizar se estría en el medio de la caja y unas punzadas sin dañar el medio.
3.3.15. Por homogenización.
3.3.16. En tubo para volcar en placa.
3.3.17. El inóculo se introduce en medio de cultivo fundido en cantidad suficiente para
cubrir la caja Petri.
3.3.18. Se homogeniza por rotación y se vuelca en la placa previo flameado de la
boquilla.
4. DATOS
4.1 Datos Experimentales.
Tabla 4.1-1
Observaciones en las técnicas de siembra
volcado de placa
Tabla 5-1
Observaciones de crecimiento microbiano.
volcado de placa
Crecimiento microbiológico en la superficie y en
la parte media del medio de cultivo por lo cual
se puede concluir que existe presencia de
microorganismos anaerobios y aerobios. UFC
6. DISCUSIÓN
El método cualitativo utilizado en la práctica para reconocer y diferenciar los tipos de medio
de cultivo, e identificar las técnicas y materiales para los mismos fue válido, ya que nos
permitió observar la formación y crecimiento de colonias de microorganismos en un medio
de cultivo sólido. En el desarrollo de la práctica se evidenciaron errores sistemáticos tales
como al momento de esterilizar el asa, ya que no se enfrió de la manera indicada en un
extremo del agar, por lo tanto al seguir a una temperatura elevada ningún microorganismo
sobrevivió, ya que la mayor parte de microorganismos son mesófilos, otro error que se
evidenció fue que al momento de realizar la técnica de volcado en placa el medio de cultivo
de igual forma se encontraba a alta temperatura en la cual los organismos no se desarrollan
afectando así al crecimiento de colonias. Se recomienda que el asa debe encontrarse a una
temperatura ambiental así se evita que la muerte de los microorganismos debido a altas
temperaturas, y tener en cuenta la temperatura del agar para la técnica de volcado ya que
debe encontrarse en una temperatura mayor a la ambiental, pero no exceder los 50°C, así
se obtendrá una formación exitosa de microorganismos
7. CONCLUSIONES
7.1. Se determinó mediante la técnica de siembra por aislamiento que de tener una
muestra microbiana con muchas impurezas al realizar ésta práctica se obtendrá una
muestra pura, aunque en una porción muy pequeña comparada con la de la muestra,
pero es muy útil y eficaz para poder estudiar más a fondo al microorganismo. Se
identificó colonias de microorganismos en las siembras realizadas con diferentes formas,
elevación y margen; como en la técnica de vertido en placa se observa una forma rizoide,
elevación plana y ondulado. (Francisco González-Valerio)
7.3. Al comparar las técnicas y observar los resultados, se determinó que por medio de la
técnica de siembra por volcado de placa se obtiene más crecimiento de microorganismos,
los cuales se desarrollaron por toda la superficie e inmersos en el medio de cultivo. Por lo
que se asume que este método fue el más efectivo para aislamiento microbiano. (Emerson
Vizuete)
7.4. En la tabla de resultados 5.1 se indica las observaciones realizadas en cada técnica de
siembra, la técnica por volcado de placa resultó ser positiva para la formación de colonias
debido a que se realizó dicha siembra tomando en cuenta la temperatura a la cual
sobreviven las bacterias, mientras que en la técnica de estriado no se obtuvo crecimiento
de colonias ya que al realizar la estriación se encontraba a una temperatura elevada
provocando la muerte de las bacterias, la técnica más efectiva fue las más efectiva dando
microorganismos de color blanco con forma redondeada. (Fátima Carvajal)
8. CUESTIONARIO.
9. REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS
Cartea, M. E., Francisco , M., Abillerla , R., & Velasco , P. (2008). Los glucosinolatos
como factor de calidad en las brásicas. Obtenido de
Stryer, L., Berg, J., & Tymoczko, J. (2013). Bioquímica (Vol. 1). Barcelona, España:
Reverté.
Black, J. (1999). Microbiology Principles and Exploration. Fourth edition. John Wiley &
Son, Inc. .
10. ANEXOS
a. Diagramas de Técnicas de siembra utilizadas.
b. Evidencia del crecimiento microbiano en cada técnica de siembra.
ANEXO 1
Figura 9.1-1
Diagrama de técnicas de siembra
Figura 9.1-2
Siembra por aislamiento
Figura 9.3-1
Técnica de siembra en placa
Figura 9.4-2
Vertido en placa
Figura 9.6-1
PCA Técnica de siembra en placa
Figura 9.7-2
Vertido en placa