DILUCIONES Y CONCENTRACIONES

I. INTRODUCCIÓN

Es un hecho que en la mayoría de los ambientes, la densidad microbiana suele ser demasiado elevada o
baja para poder realizar una siembra directa de la muestra que de buenos resultados en la enumeración de
microorganismos. Esta situación hace necesaria la dilución o la concentración de la muestra previa a la
realización de cualquier estudio. Además, las muestras sólidas requieren su dilución para facilitar la
manipulación y permitir trabajar con ellas como si fueran muestras líquidas.

En la mayoría de los casos, se trabaja con diluciones decimales. El caso más sencillo es la preparación de
10 ml de la dilución 1/10 de la muestra. Para ello, se añade 1 ml de muestra a 9 ml de diluyente; es decir de cada
10 ml de esta dilución 1/10, 1 ml corresponde a la muestra (Nota: El volumen final obtenido viene dado por el
denominador de la ecuación). Expresándolo mediante una ecuación:
1 ml Muestra
Dilución 1/10 = = 10 ml de dilución 1/10 ó 10-1
1 ml Muestra + 9 ml Diluyente
Se pueden preparar diluciones sucesivas. Por ejemplo, si se requiere la dilución 1/100, ó expresado de
otro modo la dilución 10-2, a partir de esta dilución 1/10, se elaboraría de acuerdo con la ecuación siguiente:
1 ml Muestra
Dilución 1/10 = = 10 ml de dilución 1/10 ó 10-1
1 ml Dilución 10-1 + 9 ml Diluyente

II. OBJETIVOS
- Conocer el procesos de diluciones seriadas de microorganismos.
- Realizar las diluciones seriadas de un microorganismo.
- Sembrar por diseminación en placa de las diluciones

III MATERIALES
- Asa de Drigalsky, mechero tubos de ensayo, pipetas, propipeta, incubadora, etc.

IV. PROCEDIMIENTO
- Utilizando pipetas estériles, realizar las diluciones (10 1, 102, 103, 104, 105 y 106) en los tubos de ensayo
conteniendo SSF (según el gráfico).
- Luego, haciendo uso de una pipeta colocar 0,1 ml de cada dilución a las placas de Petri conteniendo un
medio de cultivo adecuado para el crecimiento del microorganismo en estudio.
- Seguidamente, dispersar por toda la superficie de la placa de Petri la muestra de 0,1 ml de cada dilución.
- Envolver con papel kraft y llevar a la incubadora para su crecimiento a 37 °C por 18 a 24 h.
 -
- Figura 1. Dilución seriada y siembra de microorganismos
V. RESULTADOS
VI. DISCUSIÓN
VII. CONCLUSIONES

VIII. CUESTIONARIO
a. ¿Cómo se preparan 250 ml de la dilución 10-1 a partir de una muestra de agua?
b. Queremos preparar 10 ml de la dilución 10-5 en 3 únicos pasos, ¿cómo lo haría?
c. A partir de una muestra de agua, ¿cómo se elaboran las diluciones: 1/10; 1/5; ¼; ½?
d. Con el fin de determinar la densidad microbiana en un yogur, se requiere la dilución 10-2. Indicar los pasos a
seguir y detallar como se prepara esa dilución.
e. Se filtran 100 ml de una muestra de agua. El filtro se resuspende en 10 ml solución salina y se agita
vigorosamente. ¿Cuál es el factor de concentración?
f. 100 ml de una suspensión microbiana densa se centrifugan a 5.000 r.p.m. Se retira el sobrenadante y el
precipitado se resuspende tras la adición de 2,5 ml de diluyente. ¿Cuál es el factor de concentración?
g. 20 g de sedimento se resuspenden en 40 ml de solución salina. Se agita vigorosamente y se sonica para
separar las bacterias de las partículas de sedimento. 10 ml de la suspensión resultante se centrifugan a
velocidad baja (sedimentación de partículas > 3 µm). Se recoge el sobrenadante y se diluye 1.000 veces. 0,2
ml de esta dilución se siembra en profundidad en Agar Nutritivo. Al finalizar el periodo de incubación se
obtienen 126 colonias. ¿Número de bacterias cultivables por g de sedimento?
DILUCIONES SERIADAS
11 MARZO, 2014 INNOVARTE DEJAR UN COMENTARIO
En muchos casos se necesita preparar disoluciones con concentraciones
extremadamente bajas de un soluto, hasta un punto que es difícil o imposible en la
práctica medir la cantidad necesaria de producto sólido o el volumen de solución
madre. En esas situaciones es necesario preparar una solución de mayor
concentración (solución de stock o solución madre) y hacer diluciones sucesivas a
partir de ésta hasta alcanzar la concentración deseada.
banco de diluciones seriadas
En otros casos, muy frecuentes en estudios biológicos, se intenta analizar la
variación de algún parámetro que depende de la concentración de un soluto y se
necesita preparar soluciones con distintas concentraciones del mismo.
En este caso es muy conveniente hacer un banco de diluciones seriadas que no
son más que un tipo de diluciones sucesivas manteniendo constante el factor de
dilución en cada paso.

El banco de diluciones seriadas tiene muchas ventajas prácticas, desde los

cálculos previos, pasando por la manipulación de volúmenes y hasta en la
representación gráfica de resultados.
un cálculo sencillo
La primera ventaja de un banco de diluciones seriadas es que todo el cálculo es
muy sencillo. Sólo hay que tener en cuenta la concentración inicial, el volumen que
se quiere conseguir de cada concentración y el factor de dilución.
El volúmen necesario se asume que es el mismo para todas las concentraciones y
depende de cada experimento. Es fácil ver que el volumen final que se consigue
de cada concentración es exactamente igual al volumen fijo de solvente con que
se cargan todos los tubos del banco.
El factor de dilución se calcula o aproxima sabiendo las concentraciones máxima y
mínima que se quieren estudiar y el número de concentraciones distintas que se
quieren hacer.
El cálculo de las concentraciones en los tubos sucesivos es tan sencillo como
multiplicar la concentracion del anterior por el factor de dilución (1/2, 1/10 u otro).
calculadora
Esta utilidad muestra y permite calcular todos los parámetros relevantes de un
banco de diluciones seriadas.
 Si se cambia la concentración inicial o final, o el número de tubos, calcula el
factor de dilución y el volumen de paso.
 Si se cambia el factor de dilución, calcula la concentración final y el volumen
de paso.
 Si se cambia el volumen fijo, calcula el volumen de paso.
Un ejercicio interesante puede ser la elaboración manual de los cálculos
matemáticos que realiza esta pequeña aplicación.
Principio del formulario
C1 = 0.1
0.1
Concentración inicial C2 = 0.01
C3 = 0.001
1.0e-5 C4 = 1.00e-4
Concentración final
C5 = 1.00e-5
5
Número de tubos

0.1
Factor de dilución

900
Volumen fijo

100
Volumen paso

dos operaciones manuales

Otra ventaja es que sólo hay que repetir dos operaciones manuales. La primera es
la carga de los los tubos con solvente, en todos el mismo volumen fijo. La segunda
consiste en el transvase de un determinado volumen, siempre el mismo, de un
tubo al siguiente y agitar.
Esta sencillez facilita que no se cometan errores, ya que en todo el proceso sólo
hay que prestar atención a la correcta medida repetitiva de un mismo volumen y a
no saltarse ningún tubo.
fácil representación gráfica en escala logarítmica
Independientemente del factor de dilución, el logaritmo de la concentración de los
distintos tubos permite hacer representaciones con todos los puntos igualmente
separados.
Esto es muy útil, porque si sólo se quiere visualizar el cambio de algún parámetro
en función de la concentración, basta con hacer marcas igualmente separadas en
el eje sin necesidad de hacer ningún cálculo para adaptar la escala.