PRACTICAS DE

BIOQUÍMICA Ii
DETERMINACIÓN DE
PROTEINAS TOTALES
EN SUERO
DETERMINACIÓN DE PROTEINAS
TOTALES EN SUERO
Objetivo: Cuantificar las Proteínas Totales en suero

Significación Clínica.-
Las proteínas son compuestos orgánicos macromoleculares,
ampliamente distribuidos en el organismo, esenciales para la
vida. Actúan como elementos estructurales y de transporte y
aparecen bajo la forma de enzimas, hormonas, anticuerpos,
factores de coagulación, etc.
En el plasma, las proteínas contribuyen a mantener el volumen
del fluido circulante, transportan sustancias relativamente
insolubles y actúan en la inactivación de compuestos tóxicos
y en la defensa contra agentes invasores. La determinación de
proteínas totales es útil para el monitoreo de cambios
ocasionados por diversos estados de enfermedad.
DETERMINACIÓN DE PROTEINAS
TOTALES EN SUERO
En condiciones patológicas como pérdidas renales,
desnutrición, infecciones prolongadas, etc., suelen
presentarse hipoproteinemias, mientras que en otras
como mieloma múltiple y hemoconcentración de
diversos orígenes, (ej.: deshidratación) se observan
hiperproteinemias

Fundamento.-
Los enlaces peptídicos de las proteínas reaccionan con el
ión cúprico en medio alcalino, para dar un complejo
color violeta con máximo de absorción a 540 nm, cuya
intensidad es proporcional a la concentración de
proteínas totales en la muestra.
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TOTALES EN SUERO
Marco Teórico
Investigar sobre la actividad de las Proteínas Plasmáticas

Materiales y Reactivos.-
 Reactivo A: complejo EDTA/Cu 13mmol/l en hidróxido de
sodio 875 mmol/l y alquil aril poliéter (AAP).
 Calibrador A plus / Proti 2 Suero Patrón de Wiener lab.
 Espectrofotómetro.
 Baño de agua a 37ºC
 Tubos de ensayo
 Gradilla
 Pipetas automáticas y puntas descartables.
 Material biológico: muestras de suero sanguíneo.
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TOTALES EN SUERO
Procedimiento.-
1. Utilizar tres tubos perfectamente limpios e
identificarlos como B (blanco), S(Estándar) y M
(Muestra )
2. Agregar a los tubos lo indicado en la tabla:
Tubo de Ensayo

B E M

Estandar - 10 uL -

Muestra - - 10 uL

Reactivo de
1.0 ml 1ml 1.0 ml
trabajo
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TOTALES EN SUERO

Procedimiento.-

3. Mezclar e incubar durante 15 minutos a 37ºC

4. Leer en espectrofotómetro a 540 nm de longitud de
onda, llevando el equipo a cero con el blanco de
reactivo.

Nota: El color de la reacción final es estable durante 12

horas, por lo tanto, las lecturas de absorbancia deben
realizarse dentro de ese lapso.
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TOTALES EN SUERO

Valores referenciales.- Rango de Referencia: 4 a 8 g/dl

Observaciones.-
Reporte todas las observaciones obtenidas durante la práctica.
Incluya gráficos o fotografías de los aspectos que considere relevante
resaltar.

Conclusiones.-
Establezca las conclusiones a partir del objetivo planteado, las
observaciones y los resultados obtenidos durante la práctica.

Bibliografía.-
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TOTALES EN SUERO

Resultados.-
Empleando el Suero Patrón tal como se indica en
procedimiento, los cálculos se realizan como sigue:

Proteínas totales = AbM x f

f = PT (g/dl) *
AbS

*Concentración de proteínas totales en el Calibrador A

plus o en el Suero Patrón: 5g/dl