TITULO: EFECTO DE CELULA MADRE EN PACIENTES DESDENTADOS – PUNO

RESUMEN DEL PROYECTO DE TESIS:

Según la Organización Mundial de la Salud (OMS) la caries dental es la enfermedad bucal más común en
todo el mundo, esta enfermedad afecta a ambas denticiones, sin embargo, la dentición primaria es la
que presenta complicaciones más severas ante esta situación, debido a la composición de la estructura
dentaria. Esta enfermedad puede dañar a los tejidos dentarios (esmalte, dentina, pulpa). La pulpa dental
es un tejido conectivo laxo, especializado, vascularizado e inervado, es el único tejido blando del órgano
dentario, es de origen mesodérmico, forma parte del complejo dentino-pulpar. Este tejido blando
especializado se encuentra compuesto por distintos tipos de células, entre ellas: fibroblastos,
odontoblastos y células madre mesenquimales. Las células madre mesenquimales presentan la
capacidad de auto renovación y diferenciación a diversos linajes celulares. Su práctica obtención ha sido
de gran ayuda en la realización de pruebas de citotoxicidad para diversos tratamientos enfocados a la
terapia pulpar. Un tratamiento que se realiza con frecuencia en pacientes pediátricos es la pulpotomía,
este procedimiento consiste en eliminar la pulpa cameral y preservar la vitalidad y salud de la pulpa
radicular.

Introducción. La presente investigación surge de la importancia que implica la irrigación en relación a la

regeneración del complejo dentino-pulpar. En la actualidad, una gran cantidad de artículos han
enfocado sus objetivos en el efecto antibacteriano de soluciones irrigantes, sin embargo, son pocas las
investigaciones que evalúan el efecto de dichas soluciones sobre las células madre presentes en la pulpa
dental.

Objetivo. Evaluar el efecto que dará las células madre en pacientes desdentados en la ciudad Puno.

Materiales y métodos. Se recolectaron muestras de hueso y pulpa dental de los donantes voluntarios
que asistían al Universidad Nacional del Altiplano Facultad de odontología y Hospital Manuel Núñez
Butron para extracción de cordales incluidos. En el caso de las células de pulpa dental se evitó la
odontosección para reducir la contaminación. Se cultivaron dichas células, se caracterizaron mediante
su inmunofenotipo por citometría de flujo y métodos histoquímicos y se determinó su perfil de
expresión genético mediante PCR tanto de osteoblastos como de células madre. Para citometría de flujo,
se incubaron las células con los anticuerpos para los antígenos humanos. se han revisado unos 100
artículos de los cuales se han seleccionado 25 para la realización de este trabajo. Este trabajo ha sido
realizado por dos autoras quienes han trabajado conjuntamente. Posteriormente se realizaron
reuniones sucesivas para la puesta en común de ambas partes.

Resultados: La mayoría de los casos presentó inflamación crónica leve y los efectos sobre la pulpa dental
humana de las piezas a los que se aplicaron células madre. Y se obtuvo el crecimiento normal de las
piezas dentarias.

Conclusiones: Se encontraron histológicamente en proceso de regeneración tisular permitiendo una

neoformación de puente dentinario y la manutención de la vitalidad del tejido conjuntivo pulpar
subyacente
PALABRAS CLAVE:

Células madre, Terapia celular, Medicina regenerativa, Células madre embrionarias, Células madre
adultas.
JUSTIFICACION DEL PROYECTO:

La célula madre son generadoras de los elementos que conforman nuestro sistema sanguíneo e
inmunológico, produciendo glóbulos rojos, que son los que luchan contra las infecciones, los glóbulos
rojos que llevan el oxigeno s todo el organismo y las plaquetas que promueven la cicatrización. Estas
tienen la capacidad natural de regenerar órganos y tejidos. La incidencia del estudio de células madre
recae en la oportunidad de poder regenerar piezas dentarias perdidas sin necesidad de utilizar aparatos
de prótesis, logrando un efecto positivo en la autoestima de los involucrados que vienen a ser los
pacientes , es decir la sociedad.

Las condiciones son ventajosas por las diferentes utilidades que se generarían a partir de la creación de
un banco de células madre s. En la actualidad se utilizan materiales biocompatibles para el tratamiento
de tejidos lesionados a nivel odontológico, sin embargo con esto no se logra recuperar la capacidad
funcional en su totalidad, además de presentar algunas dificultades en la integración material-tejido .Por
lo anterior se ha estudiado el potencial de las células madre en la regeneración de tejido dental y
construcción de andamios que promuevan el crecimiento de las células implantadas

Es beneficioso porque tiene grandes probabilidades de éxito ya que en la actualidad se han realizado a
nivel mundial estudios favorables y comprobados clínicamente lo que tiene una gran influencia en el
paciente que al recibir un tratamiento con células madre obtiene una regeneración de sus órganos
dentarios , los mismos que se relacionan con los trabajos científicos comprobados y que tiene un gran
futuro en el campo de la medicina .El conocimiento de las células madre de origen dentario esta ya
desarrollándose a nivel mundial .Las aplicaciones de las células madre en el campo odontológico se
encuentran en una fase de estudio prometedora .Actualmente se podría concretar el papel de las células
madre en odontología en dos grandes campos : la cirugía destacando la implantología y la endodoncia
, en tratamientos de apicoformacion

Aunque se conocen las ventajas de las células madre de la pulpa dental, esta no es suficiente para lograr
avanzar en el ámbito de la odontología regenerativa, ya que en la formación de nuevos tejidos también
se necesita contar con la matriz extracelular que permite la adhesión, proliferación y posterior
diferenciación en las células requeridas según el procedimiento a realizar. La técnica que hasta el
momento ha sido utilizada y proporcionada buenos resultados, es la implementación de matrices
biodegradables

Se requiere la evaluación de la adhesión y proliferación de las células madre de pulpa dental en una
matriz de hidrogel de PVA y quitosano, para determinar si dichos materiales cumplen con los
requerimientos para ser usados en aplicaciones regulativas. Sobre todo, en el ambiente de la sierra y
con ciudadanos Puneños que es lo que queremos.
ANTECEDENTES DEL PROYECTO:

Procedimiento regenerativo en endodoncia

La pérdida de un diente inmaduro permanente en pacientes jóvenes con dentición mixta puede ser
devastante, llevando a la pérdida de función, maloclusión y un desarrollo maxilofacial inadecuado.
Regularmente, los dientes inmaduros con diagnóstico de necrosis pulpar eran sólo tratados con
procedimientos de apexificación, usando hidróxido de calcio a largo tiempo o la colocación inmediata
de una barrera apical con Trioxoxido Mineral Agregado (MTA). Aunque éstos tratamientos a menudo
resuelven los signos y síntomas de una lesión periapical, proporcionan poco o nulo beneficio en la
continuación de un desarrollo radicular. Los Procedimientos Regenerativos en Endodoncia (REPs) han
emergido como una alternativa de tratamiento para los dientes inmaduros permanentes con necrosis
pulpar, que en adición a la reparación de la periodontitis apical, promueven la regeneración de las
funciones fisiológicas normales de la pulpa. Esto incluye la continuación del desarrollo radicular,
inmunocompetencia y nocicepción. Tradicionalmente, irrigantes y medicamentos han sido elegidos por
su máximo efecto antimicrobiano sin la consideración de su efecto sobre las células madre y el
microambiente dentinario

IMPLANTOLOGIA

La pérdida de uno o varios dientes, requiere tratamiento con prótesis parciales o implantes. En 1950, se
introdujo el término de osteointegración por Per-Ingvar Branemark que observó la formación
estructural y funcional entre el hueso y el titanio, aceptándose los implantes endooseos cómo una
opción de tratamiento habitual ante la pérdida dental. El titanio es un material biocompatible y
duradero. Desde entonces se han modificado las características del implante para aumentar la
osteointegracion, modificando su superficie y mejorando las características físicas, químicas y mecánicas
del mismo.
Sin embargo la osteointegración representa una conexión directa entre implante y tejido óseo, faltando
el tejido periodontal y cemento que forma parte de la estructura de un diente natural, necesario para
modular el stress mecánico que supone la masticación. (Egusa y cols 2012)

La odontología reparadora permite diseñar estrategias para generar implantes dentales asociados
a la formación de nuevos tejidos periodontales. La reconstrucción del periodonto alrededor del
implante permite cambiar la formación del tejido fibroso encapsulado por la formación de cemento
funcional en la superficie del implante, evitando su fracaso. (Kawashima 2012)

La capacidad de diferenciación multipotencial de PDLSCs para generar tejido blando y duro cuando
se emplean scaffolds de ácido poliglicoico, demuestran cuando se insertan en la superficie de las raíces
dentales la regeneración de tejido óseo, cemento, y fibras de colágeno bien orientadas.

El uso combinado de MSCs trasplantadas de origen dental o no, a las que se añade moléculas de
señalización pueden acelerar la diferenciación de MSCs in vivo logrando una nueva regeneración del
tejido periodontal.

El último objetivo en ingeniería tisular odontológica es encontrar un método biológico que

remplace la pérdida del diente. Un implante basado en células y no en metal. Para que el diente
formado sea funcional, necesita la formación de raíces, ligamento periodontal, nervios y vasos
sanguíneos. (Feng y cols 2010)
REGENERACION DENTAL
El tratamiento restaurador tradicional ante la pérdida dental con un diente sintético tal cómo se realiza
en la práctica clínica actual, puede tener una alternativa en un futuro con la regeneración de un diente
mediante ingeniería tisular y su implante posterior en mandíbula.

Por 1ª vez en 2009, se regenera en animales de experimentación un diente funcional con todos
sus componentes, incluyendo el esmalte de la corona . El futuro de la investigación es regenerar dientes
autólogos funcionales en humanos. (Ulmer y cols 2010)

El diente puede regenerarse de 2 maneras: la primera, mediante técnicas de ingeniería Tisular

convencional consistentes en implantar in vivo estructuras dentales inmaduras (“ células germinales
del diente”) para su crecimiento, pero formadas in vitro, cultivando y expandiendo varias poblaciones
de stem cells dentales, transportadas en scaffolds de polímeros. (Mitsiadis y Papagerakis 2011)

La segunda, implantando en la mandíbula poblaciones de stem cell expandidas in vitro, transportadas

en scaffolds de polímeros con la forma y tamaño de la porosidad adecuado para el diente que queremos
regenerar.

Basado en el conocimiento de la embriología y fisiología del desarrollo dental durante la embriogénesis

y la infancia, se conoce que el diente deriva de células embrionarias específicas que crecen,
erupcionando en cavidad oral. Una serie de interacciones entre células epiteliales-mesenquimales
derivadas de la cresta neural craneal, dan origen a estructuras complejas mineralizadas que forman
el diente. Las células mesenquimales, se diferencian a odontoblastos y las epiteliales a ameloblastos,
originando las primeras pulpa y folículo dental, responsables de la síntesis de la matrix de la dentina y
las segundas de la matrix del esmalte. Una vez que ha finalizado la mineralización de la corona, inicia la
erupción del diente en la cavidad oral, mientras continúa el desarrollo de las raíces. Durante el
desarrollo de las raíces se organiza la inervación, vascularización y anclaje del diente al hueso alveolar.
(Yen y cols 2008)

Por ello, la regeneración del diente completo necesita la utilización de stem cell mesenquimales y stem
cells epiteliales, que deben ser capaces de formar varias poblaciones de células mesenquimales y
epiteliales para formar un diente.

Las células madre se clasifican según su origen, potencial de diferenciación y tejido donde se asientan.

1. Según su origen

- Embrionarias: Derivan del embrión de los mamíferos en su etapa de blastocisto, por lo que desde el
primer momento de su manipulación y destino han enfrentado una fuerte oposición en diferentes
países, basada principalmente en aspectos éticos, religiosos y políticos)

- Células madre adultas o posnatales: Poseen notables ventajas sobre las mencionadas, pues su manejo
resulta más simple, pueden ser autólogas y, por tanto, no ocasionan trastornos inmunológicos ni
presentan limitaciones éticas o legales, así como tampoco se ha comprobado que produzcan cáncer, lo
cual contrasta positivamente con las características de las células embrionarias, cuya obtención y
expansión es más compleja, inducen una respuesta inmunitaria por ser alogénicas y provocan
numerosos tumores en animales de experimentación)
2. Según su potencial de diferenciación

- Totipotenciales: Son las capaces de originar desde un embrión hasta un individuo completo.
- Pluripotentes: Pueden generar células de las tres capas germinativas: ectodermo, mesodermo y
endodermo.
- Multipotentes: En una línea celular específica, dan lugar a células de un órgano o tejido en particular.
- Oligopotentes: Al igual que las anteriores, tienen capacidad para desarrollar un conjunto de tipos de
celulares, pero mucho más reducido.
- Unipotentes: Se diferencian en un único tipo celular.

3. Según el tejido donde se asientan

Es de medular importancia comprender el concepto de nichos, acuñado por Scofield en 1978, pues se
trata de los elementos que rodean a las células troncales cuando se encuentran en su estado nativo,
incluidas las no troncales que puedan estar en contacto directo con ellas, así como la matriz extracelular
y las moléculas solubles que se hallan localmente cercanas. Existen nichos en las siguientes
localizaciones: médula ósea, piel, tejido adiposo, cordón umbilical, folículo piloso, intestinos, sistema
nervioso y dientes.

Las células madre de la cavidad bucal poseen un potencial de multidiferenciación y, por ende,
pertenecen al grupo de las unidades adultas, capaces de formar células con carácter osteodontogénico,
adipogénico y neurogénico. Varios autores, entre los cuales figuran González et al,7 han dedicado
especial atención al estudio de las principales células madre en dicha cavidad e identificado 4 grupos:
células madre en pulpa de dientes temporales (SHED), células madre en pulpa de dientes permanentes,
células madre presentes en espacios periodontales y células madre de la mucosa bucal.8

- Las células madre que aparecen en la pulpa de los dientes temporales, manipuladas enzimáticamente
y sometidas a factores tisulares de crecimiento, son capaces de convertirse en células nerviosas,
adipositos y odontogénicas.

- Las células madre que se encuentran en la pulpa de los dientes permanentes se caracterizan por su
capacidad de regenerar el complejo pulpodentinal, además de evidenciar marcadores óseos como las
sialoproteínas óseas y fosfatasas alcalinas, entre otros. La principal fuente de estas células madre adultas
son los terceros molares.
- Las células madre localizadas en los espacios periodontales se hallan en la vecindad de los vasos
sanguíneos. Se afirma que el ligamento periodontal tiene poblaciones de células que pueden
diferenciarse como cementoblastos y osteoblastos, si bien los análisis in vivo con esas células madre en
ratones inmunocomprometidos apuntan hacia la participación de estas en la regeneración del hueso
alveolar, al favorecer la formación de una fina capa de tejido muy similar al cemento que, además de
contar entre sus componentes con fibras colágenas, se asocia íntimamente al hueso alveolar próximo al
periodonto regenerado.
- Los queratocitos de las células madre de la mucosa bucal también han sido aislados y cultivados, son
totipotenciales y pueden utilizarse para reparar defectos de lesiones cutáneas de baja inmunogenidad
DAMARITH ARAIDA ARIAS ORTEGA cod 170707

HIPOTESIS DEL TRABAJO

Los distintos tratamientos existentes que implican la manipulación y aplicación de células madre
constituirán la cura y la base de la terapia de numerosas y diversas enfermedades degenerativas o
inmunológicas, que hasta hoy se consideraban incurables. No obstante, no cabe duda alguna de que
podrán también ser utilizadas para reemplazar regiones completamente dañadas del cuerpo.

Los avances de la ciencia en conjunto con los adelantos tecnológicos permitirán el continuo
desarrollo y perfeccionamiento de esta técnica, y más aún, el descubrimiento de nuevas fuentes de
obtención, métodos de extracción y formas de aplicación en lo que vendría a ser la odontología.

Sin excepción alguna, cualquier persona tendrá a su alcance la posibilidad de asegurarse tanto a sí
misma como a sucesivas generaciones de futuras amenazas de quedar sin una pieza dentaria .
Aquellos que, por ejemplo, preserven sus células y sufran en algún futuro una afección que hoy
requeriría un trasplante o implante , podrán evitar tal situación y utilizar sus propias células,
teniendo además la completa seguridad de una compatibilidad genética del 100%.

OBJETIVO GENERAL

Identificar la respuesta que dará las células madre en pacientes desdentados

OBJETIVO ESPECIFICO

Efecto de las células madre en la dentina, cemento y esmalte con pacientes desdentados totales y
parciales.

Obtener células madre de pulpa dental.

Optimizar el método de obtención de células madre de pulpa dental.

Caracterizar células madre de pulpa dental usando microscopía confocal.

Estudiar el crecimiento de células madre de pulpa dental a distintas presiones de O2 para optimizar
su cultivo.

Estudiar la adhesión y el crecimiento de células madre de pulpa dental sobre el biomaterial β-fosfato
tricálcico.
DAMARITH ARAIDA ARIAS ORTEGA cod 170707

REFERENCIAS

 Mata-Miranda M, Sánchez-Monroy M, Vázquez-Zapién G. Investigación básica con células

madre pluripotentes en la Escuela Médico Militar. Perinatología y reproducción humana.
2014. (27):3 194-199.
 Takeuchi H, Nakatsuji N, Suemori H. Endodermal differentiation of human pluripotent
stem cells to insulinproducing cells in 3D culture. Nature, Scientific reports. 2014. 4:4488.
p. 1-9.
 Lunn SJ, Sakowski SA, Junguk H, Feldman EL. Stem Cell Technology for Neurodegenerative
Diseases., NIH Public Access. 2011. 70(3): 353–361.
 Hernández Ramírez P, Dorticós Balea E. Tras la huellas de las células madres. Rev Cubana
Hematol Inmunol Hemoter [Internet]. 2010 [citado 10 Ene 2011];26(2):[aprox. 7
 Hernández Ramírez P, Alfonso Simón A, Aparicio Suárez JL, Artaza Sanz H, Baganet Cobas A,
Blanco Díaz A. Experiencia cubana con el uso terapéutico de células madre adultas. Rev
Cubana Hematol Inmunol Hemoter [Internet]. 2011 Ene-Mar [citado 1 Abr
2011];27(1):[aprox. 6 p.].
 Camejo Suárez M. Ingeniería de tejido en la regeneración de dentina y la pulpa. Acta
Odontol. Venezolana [Internet]. 2010 [citado 22 Mar 2011];48(1):[aprox. 5 p.].
 Pérez Borrego A, Domínguez Rodríguez L, Ilisástigui Ortueta C. Utilización de células madre
en los defectos óseos periodontales. Rev Cubana Estomatol [Internet]. 2009 Dic [citado 22
Mar 2011];46(4):[aprox. 6 p.].

USO DE LOS RESULTADOS Y CONTRIBUCIONES DEL PROYECTO

Se trata de una técnica en la que es poco probable que haya rechazo por parte del paciente, ya que
se utilizan sus propias células madre. Las células madre de la pulpa dental (la parte “blanda” del
interior del diente) comparten muchas características con las células del mesénquima de la médula
ósea, de donde normalmente se extraen las células madre para muchas investigaciones en este
área.

Fuera del foco mediático, la terapia celular promete espectaculares avances en el campo de la salud
bucodental en la ciudad de Puno en un plazo de tiempo muy corto. Tanto, que los expertos
consideran que ya estamos muy cerca de una auténtica revolución en los tratamientos dentales.
Incluso algunos expertos piensan que las células madre (también denominadas autólogas) de la
pulpa, podrían usarse para regenerar tejidos en otros órganos.

En el futuro, vaticinan estos investigadores, un odontólogo será capaz de implantar en la encía del
paciente (sin necesidad de perforar el hueso) las células que den lugar a un diente vivo, creado a
partir de las células madre del propio paciente. No habría otros problemas anatómicos y la
alineación del diente podrá controlarse con un tratamiento de ortodoncia como el que todos
conocemos.

Este enfoque presenta una serie de ventajas sobre las técnicas implantológicas ya existentes: como
un implante dental no puede moverse, la fuerza de los impactos repetidos de la masticación se
transmite al hueso que lo rodea, que acaba dañándose con el tiempo, y causando problemas como
la periimplantitis.
DAMARITH ARAIDA ARIAS ORTEGA cod 170707

Si bien aún no se ha probado con seres humanos, los investigadores ya han sido capaces de, a partir
de unas cuántas células madre, hacer crecer un diente completo en la encía de un ratón. En caso de
que los implantes con células madres se vuelvan una realidad, la periimplantitis, la enfermedad que
muchos vaticinan como el problema dental del siglo XXI, tal vez quedaría como una cosa del pasado.

IMPACTOS ESPERADOS

Impactos en Ciencia y Tecnología

Las investigaciones con células madres están a la vanguardia de la medicina y son una gran promesa
en la biotecnología contemporánea.
Las células madres se definen a través de dos de sus propiedades. En primer lugar son capaces de
auto-renovarse y también convertirse en diferentes células del mismo tipo. La segunda es que
pueden madurar o diferenciarse de células especializadas que cuentan con funciones específicas
como las neuronas, células de piel, sangre y otras. Este trabajo lo que se plantea es una recopilación
de información que será útil para responder todas aquellas preguntas que se nos cruzan en la
mente, ya que contiene información sobre la historia, generalidades, de donde salieron, como, en
qué y para que las utilizamos, además de quien es aquel especialista que lo hace, y la forma en que
las células madre nos benefician o perjudican.

Impactos económicos

Este avance médico tuvo, y tendrá, repercusiones económicas. Junto a la generación de capital
humano dedicado a esta área, altamente especializado, se abrió un nuevo mercado: los bancos de
células madre. En ellos los interesados preservan (se congela en nitrógeno a -196º C) este material
orgánico que, en el futuro, puede salvar sus vidas. Además, permitiría reinsertar a la vida laboral a
personas con enfermedades que hoy se lo impiden. Esto para cada uno de los pacientes Puneños
para tener un solo gasto en lugar de varias cirugías .

Impactos sociales

Las células madre derivadas de la médula ósea y movilizadas a la sangre periférica, han sido
utilizadas en personas con diferentes procesos patológicos, a saber: cardiopatía isquémica, necrosis
aséptica de la cabeza del fémur, linfedema, síndrome posflebítico, lesiones tróficas en diabéticos,
arteriosclerosis obliterante, trastornos neurológicos crónicos como secuela de infarto o hematoma
cerebral, psoriasis y periodontitis, entre otros

RECURSOS NECESARIOS

Recursos físicos

- Laboratorio de procesado de las unidades.

- Laboratorio de criopreservación.
- Sala de almacenamiento de las unidades.
- Laboratorio de cultivos microbiológicos.
- Laboratorio de cultivo de células progenitoras.
- Laboratorio screening de enfermedades infectocontagiosas.
DAMARITH ARAIDA ARIAS ORTEGA cod 170707

- Sala de reunión
- PC

LOCALIZACIÓN DEL PROYECTO

Laboratorios en el hospital Manuel Núñez Butrón y Clínica Odontológica de Puno

CRONOGRAMA DE ACTIVIDADES

Trimestres
Actividad

PRESUPUESTO

Descripción Unidad de medida Costo Unitario Cantidad Costo total (S/.)

(S/.)