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RESUMEN
La presente experiencia de laboratorio estuvo compuesta por 3 experimentos. En el primer caso el objetivo era
determinar la influencia de la temperatura en la actividad de la β-fructofuranosidasa cuyo sustrato es la sacarosa,
para ello se dispusieron 7 tubos en iguales concentraciones de la enzima y del sustrato, se mantuvo constante la
concentración de DNS que actúa como inhibidor enzimático y reconoce los productos de la reacción, pero se
mantuvo variable la temperatura de la reacción en un rango de entre 0° y 70° C. Al analizar
espectrofotométricamente las muestras de solución se determinó que la temperatura a la cual la enzima es más
eficaz es a los 60° C donde se alcanzó la mayor densidad óptica de 0,022, es decir donde fue mayor la
concentración de producto. El segundo experimento consistió en determinar la influencia de la concentración de
la enzima en la reacción, para ello se dispuso de 9 tubos donde la concentración de la β-fructofuranosidasa fue
diferente en cada uno. Al analizar las muestras en el espectrofotómetro se determinó que la concentración más
eficaz fue la del tubo N° 6 ya que presento la densidad óptica más elevada de 0,408 permitiendo una actividad
enzimática más eficaz y una mayor velocidad de reacción en comparación al resto de los tubos.
Finalmente, el tercer experimento buscaba determinar la influencia de la concentración del sustrato en la reacción,
para ello se dispusieron diferentes concentraciones de sacarosa en 7 tubos, manteniendo constante las demás
variables. Al analizar las muestras en el espectrofotómetro se determinó que la concentración de sacarosa más
efectiva para la reacción es de 0,20 M ya que obtuvo la densidad óptica más alta con 0,991 y fue donde se generó
la mayor concentración de producto.
Palabras claves: β-fructofuranosidasa, actividad enzimática, eficiencia catalítica, factores enzimáticos, velocidad
de reacción.
ABSTRACT
The following laboratory experience consisted of 3 experiments. In the first one the aim was to determine the
influence of temperature on the activity of the β-fructofuranosidase whose substrate is sucrose. For that, we placed
equal concentrations of enzyme and substrate in seven tubes, we also kept the DNS concentration constant, with
a variable reaction temperature in a range between 0° and 70° C. Through an spectrophotometric analysis of the
samples was determined that the temperature at which the enzyme is more effective is at 60 ° C which is where
the highest optical density, of 0.022, was achieved therefore where the product concentration was the highest.
In the second experiment the aim was to determine the influence of the enzyme concentration in the reaction, for
that case we had nine tubes wherein the concentration of the β-fructofuranosidase was different in each. When
analyzing the samples in the spectrophotometer it was determined that the most effective concentration was in
the sixth tube because it presented the highest optical density of 0.408, enabling more efficient enzyme activity
and a fastest reaction rate compared to the rest of the tubes . Finally, the third experiment aimed to determine the
Universidad de La Serena Laboratorio de Bioquímica
Facultad de Ciencias Profesora Verónica Plaza
Enfermería 9 de noviembre 2016
influence of substrate concentration on the reaction. For that, different concentrations of sucrose were disposed
in seven tubes, keeping constant other variables. When analyzing the samples in the spectrophotometer it was
determined that the most effective sucrose concentration for the reaction is 0.20 M as it obtained the highest
optical density of 0.991 therefore it produced the highest concentration of product.
Keywords: β-fructofuranosidase, enzymatic activity, catalytic efficiency, enzymatic factors, reaction rate.
RESULTADOS
Tabla N° 1
TUBO T° OD [PRODUCTO] V
Reacción
1 0°C 0,002 1,64E4 5,46E-06
2 RT 0,001 1,59E-4 5,30E-06
3 30°C 0 0 0
4 40°C 0 0 0
5 50°C 0,013 2,24E-4 7,46E-06
6 60°C 0,022 2,73E-4 9,10E-06
7 70°C 0,011 2,13E-4 7,1E-06 Mediante este grafico se puede distinguir claramente
8 20°C 0 0 0 la temperatura a la que la velocidad de la reacción
enzimática es más rápida, la cual corresponde a la
Estos resultados, para una mejor intrepretación y muestra del tubo 6.
compresión, fueron graficados en torno a dos
criterios diferentes; la absorvancia que arrojo cada
tubo en función de la temperatura y la velocidad de
reacción de cada muestra en función de la
temperatura.
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6 6
5
4 4
3
2 2
1
0
1 2 3 4 5 6 7 8 9
[ENZIMA]
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𝑅 2 = 0,9989
[SUSTRATO] V reacción 1/S 1/V
Tabla N°5 0,45 M 2,64E-4 2,2 3.787,87
0,30 M - - -
TUBO Absorbancia [SUSTRATO] [PRODUCTO]
0,20 M 5,57E-4 5 1.795,33
1 0,455 0,45 M 2,64E-3
0,10 M 4,22E-4 10 2.369,66
(saturado)
2 - 0,30 M - 0,05 M 3,06E-4 20 3.267,97
3 0,991 0,20 M 5,57E-3 0,03 M 2,37E-4 33,3 4.219,40
4 0,744 0,10 M 4,22E-3 0 0 0 0
5 0,531 0,05 M 3,06E-3
6 0,405 0,03 M 2,37E-3
7 0 (blanco) 0 0 Gráfica de Michaelis Menten
[PRODUCTO] T V
reacción reacción
2,64E-3 10 2,64E-4
- 10 - 1/VdevsLineawever
Gráfica 1/S Burk
5,57E-3 10 5,57E-4 4,500.00
4,22E-3 10 4,22E-4 4,000.00
10 3,06E-4 3,500.00
3,06E-3
3,000.00
2,37E-3 10 2,37E-4
2,500.00
1/V
0 10 0 2,000.00
1,500.00
Y= 45,24 x + 2450,17
1,000.00
500.00 𝑹𝟐 = 0,58
0.00
0 10 20 30 40
1/S
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DISCUSION
BIBLIOGRAFIA