Aplicaciones de anticuerpos

• Pruebas inmunológicas
– Directas
Vs. antígenos
– Indirectas
Vs. anticuerpos que se formaron vs. antígenos

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Pruebas inmunológicas
• Precipitación
– Los antígenos y anticuerpos se mezclan en ciertas proporciones,
formando precipitados

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Pruebas inmunológicas
• Precipitación
– Inmunodifusión, involucra el movimiento de Ag y Ac

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Precipitación en tubo capilar (prueba del anillo)

• Capa de Ag sobre Ac
• Prueba cualitativa
• Precipitación en la
interfase, formándose
un anillo
 Pruebas inmunológicas
• Precipitación
– Inmunodifusión Radial
– Medición de Ac específicos en suero
– Los Ac humanos son antígenos

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Imunoprecipitación para purificación de proteínas
Imunoprecipitación para purificación de proteínas

• Recolección utilizando
perlas magnéticas
Pruebas inmunológicas
• Aglutinación
– Ac sufren entrecruzamiento con Ag particulados
– Precipitación con agregación de moléculas solubles
– Reacciones detectables a simple vista

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Hemaglutinación

Aglutinación de
eritrocitos para
determinación de
tipo sanguíneo
 Titulación de anticuerpos

• Reacción
cuantitativa, para
determinar
concentración de
Ac Vs. un Ag
específico

Figure 18.5
Pruebas inmunológicas
• Neutralización
– Utiliza virus con efecto citopático para ciertos tipos
celulares.
– Primero se mezclan los virus con los Ac para dichos
virus, el efecto citopático se elimina
– Para identificar si un individuo ha estado en contacto
con un virus

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Pruebas inmunológicas
• Fijación del
Complemento
– Se basa en la
generación de
complejos de
ataque a membrana
durante la activación
del complemento
– Detecta Ac en el
suero, incluso con
cantidades muy
pequeñas

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Inmunodetección
• Anticuerpos marcados, inmunofluorescencia
– Los Ac se unen a un marcador (fluoresceína, rodamina,
ficoeritrina) que los hace fácilmente detectables con luz UV
– Para detectar a su vez antígenos (detección directa) o
anticuerpos (detección indirecta)

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Figure 17.11 The direct fluorescent antibody test
Inmunohistoquímica
Inmunodetección
• ELISA, Enzyme-linked immunosorbent assay
– Una enzima (peroxidasa) es el marcador, que al
reaccionar con su sustrato produce un color

Detecta Ag Detecta Ac

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Visualización de la reacción
 • ELISA
– Cualitativo,
– Directo o indirecto
– Cuantitativo, usando curva de calibración
– Rápido

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ELISA para Ac anti-p24 de VIH1

Pozo de Se añade Anticuerpo Sustrato para

microplaca suero anti la enzima
Cubierto Achumano
con p24 marcado
con enzima

Puede haber falsos positivos en ELISA por reacciones cruzadas

Radioinmunoensayo
Muy sensible, mide hormonas, proteínas, etc. a bajas
concentraciones (≤ 0.001ug/ml).
Unión competitiva de Ag radiomarcado y Ag no marcado
(de prueba) con un Ac de alta afinidad. Se usan
isótopos como 125I, 14C, 32P, 35S para marcaje.
Aplicación para detección por radiomarcaje.

Detección de cáncer, usando anticuerpos radiomarcados que detectan células

cancerosas de próstata.

www.stjosephs-marshfield.org/ OctreoScan in a patient

with metastatic small cell carcinoma of the prostate
Western Blot
• Para identificar
proteínas específicas
en mezclas:

1) Se separan las proteínas

por SDS-PAGE

2) Se transfieren a una
membrana

3) La membrana se pone en
contacto con los
anticuerpos marcados
Western blot para detectar anticuerpos anti-VIH1

Lisar una cepa de laboratorio de VIH1 -gp160

con detergente -gp120

-p66
-p55
Separar proteínas del VIH1 por SDS-PAGE
-pg41

-p32
Transferir proteínas a la membrana, blotting
-p24

Incubar la membrana con -p17

el suero del paciente

6 30
Detectar los anticuerpos unidos Días post infección
 • Inmunocromatografía
– ELISA de lectura rápida
– Solución de antígeno fluye por
una tira porosa y se encuentra
al anticuerpo marcado,
produciendo marcaje visible Zone of antibodies Line of fixed
linked to colloidal metal, anti-antibody
– Pruebas de embarazo, color too diffuse to see

Strep
Dip

A
infecciones, uso de drogas

Anti-antibodies stop
movement of antibody-
antigen complexes. Color
becomes visible because
of density of complexes.
Movement of
fluid containing
complexes of
Prepared antigen
antibodies
extract from patient’s
bound to
nasal sample
antigen

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• Inmunoelectroforesis:
Electroforesis + doble difusión
- Mezcla de antígenos se separa
por carga
- Se colocan posteriormente
anticuerpos al gel, paralelos a la
dirección de la carga
- Se dejan difundir uno y otro
hasta encontrarse
- Se detecta presencia y ausencia
de Ag específicos.
Uso terapéutico: ‘magic bullets’

Anticuerpos bi-específicos
 CAMPATH-1H
CAMPATH-1H : Anticuerpo humanizado generado por injerto de los CDRs del anticuerpo de rata contra CD52 un
marcador de linfocitos maduros , está siendo utilizado (alemtuzumab ) en ensayos clínicos en esclerosis múltiple
Anticuerpo-toxina

Ac Específico
par un tumor
Sólo las células del tumor son destruidas

Ejemplos de toxinas
Radioinmunoterapia

Célula cancerosa Ac Radioactivos

Radioinmunoterapia

Célula cancerosa Ac Radioactivos

Medicamentos basados en anticuerpos para terapia
• OKT3-Muromonab 1992 Prevención del rechazo en los trasplantes de riñón
• .Abciximab (Reopro) 1997Actúa inhibiendo la agregación plaquetaria . Anti IIb-IIIa.
Prevención en pacientes de alto riesgo de trombosis coronaria aguda que sean
sometidos a angioplastia coronaria transluminal percutánea
• Rituximab (Mathera) 1999 Específico para los receptores de superficie CD20 de los
linfocitos B humanos. Está indicado en el tratamiento de linfoma folicular de
células B que hayan recaído o sean refractarios a otros tratamientos.
• Trastuzumab (Herceptin) 2000Un anticuerpo monoclonal IgG humanizado
dirigido contra el receptor HER2, presente en las células tumorales Ha sido
evaluado en clínica en ensayos para el tratamiento de mujeres con cáncer de
mama metastáticos avanzado con sobrexpresión de HER2.
• Infliximab (Remicade) 2000Se trata de un anticuerpo monoclonal quimérico capaz
de unirse de forma selectiva al factor de necrosis tumoral de tipo alfa (TNFa ),
inhibiendo sus efectos biológicos. Enfermedad de Crohn y Artritis reumatoide,
• Palivizumab (Synagis) 2000Es un anticuerpo monoclonal IgG1 humanizado, se
emplea en la profilaxis de la infección por virus respiratorios sincitiales.
• Basiliximab (Simulect) 2000Es un anticuerpo monoclonal de tipo quimérico anti
CD-25.
• Tratamiento preventivo del rechazo agudo en pacientes sometidos a trasplante
de riñón.
• Daclizumab (Zenepax) 2000Es un anticuerpo monoclonal de tipo quimérico? anti
CD-25.. Tratamiento preventivo del rechazo agudo en pacientes sometidos a
trasplante de riñón.